age,sdspage電泳分離(參考版)
2025-04-29 08:49本頁(yè)面
【正文】 pH 911 LKB Ampholine 兩性電解質(zhì) ? pH梯度的形成 ⊿ 在沒(méi)有電場(chǎng)時(shí) ， 兩性電解質(zhì)溶液的 pH值大約是該溶液 pH范圍的平均值 ⊿ 當(dāng)引入電場(chǎng) ， 兩性電解質(zhì)分子將向正極或負(fù)極遷移 ⊿ 在電場(chǎng)下 , 所有的一系列的氨基 /羧基比例不同的兩性電解質(zhì)分子 （ 脂肪族多氨基多羧酸 ） ， 最終到達(dá)其 pI相同的位置 ⊿ 短時(shí)間內(nèi)在正、負(fù)極之間給出一個(gè) pH梯度 。pH 57。 ? 一旦蛋白質(zhì)到達(dá)它的等電點(diǎn)位置，它就沒(méi)有凈電荷，蛋白質(zhì)只能在它的等電點(diǎn)位置被聚焦成一條窄而穩(wěn)定的帶 ※ 與 樣品加樣位置無(wú)關(guān) 不管樣品加在什么部位，都可以聚焦到與其等電點(diǎn)相當(dāng)?shù)膒H的位置 ※ 很稀的樣品都可分離 ， 而且重現(xiàn)性好 ※ 分辨率高 可將 pI僅相差 ? 等電聚焦電泳的載體 兩性電解質(zhì) 用 IEF離蛋白質(zhì)，必須要有一個(gè)穩(wěn)定的和線性的 pH梯度 ?早期發(fā)現(xiàn)谷氨酸，組氨酸或賴(lài)氨酸能產(chǎn)生大約 1pH的梯度 ?但 pH范圍太窄，且緩沖能力不夠 ?蛋白質(zhì)分子本身也是兩性電解質(zhì)，在電泳時(shí)，它會(huì)影響梯度的 pH ? 兩性電解質(zhì)必須具備的條件 ⊿ 在等電點(diǎn)狀態(tài)下有足夠的緩沖能力 ⊿ 在等電點(diǎn)狀態(tài)下有足夠的導(dǎo)電能力 ， 而且各個(gè)等電點(diǎn)不同的兩性電解質(zhì)有相同的導(dǎo)電系數(shù) ， 使整個(gè)體系中電導(dǎo)均勻 ⊿ 兩性電解質(zhì)的紫外吸收低 ,以便 IEF后的檢測(cè) ⊕ 以便在 IEF后兩性電解質(zhì)不干擾蛋白的檢測(cè) ⊿ 分子量要小 , ⊕ 以便在 IEF后易于分開(kāi)蛋白和兩性電解質(zhì) ⊿ 化學(xué)組分應(yīng)與待分離的樣品組分不同 ⊕ 以免干擾樣品組分的測(cè)定 ⊿ 與樣品中各組分不會(huì)發(fā)生相互作用 ⊿ 無(wú)生物學(xué)效應(yīng) ⊕ 不干擾 酶活性測(cè)定 ⊕ 不干擾 免疫檢測(cè) ⊕ 不干擾抗體制備 (注射到小白鼠或大白兔中 ) ? 現(xiàn)在常用的 兩性電解質(zhì)的性質(zhì) ⊿ l966年首次合成了多氨基多羧酸的異構(gòu)體和同系物 (類(lèi)似物 ) ⊿ 兩性電解質(zhì)的合成 ⊕ 不飽和酸 (丙烯酸 )與多乙烯多胺 (五乙烯六胺 )發(fā)生雙健的加成反應(yīng)而成 ⊕ 調(diào)節(jié)酸和胺的比例，就可得到一系列的氨基與羧基不同比例的多氨基多羧酸 ⊕ 可得到不同 pH范圍的載體兩性電解質(zhì) 如 pH 310。是在 1966年成功地合成載體兩性電解質(zhì)以后才發(fā)展起來(lái)的電泳技術(shù) ? 在電泳系統(tǒng)中加入兩性電解質(zhì)載體，通電后，載體兩性電解質(zhì)即在電場(chǎng)中形成一個(gè)由負(fù)極到正極連續(xù)變化的 pH梯度 ? 當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì) ,酶或多肽進(jìn)入這個(gè) pH梯度時(shí)，不同的蛋白質(zhì)會(huì)不斷地泳動(dòng) ,直至到達(dá) (聚焦 )與其 pI相當(dāng)?shù)?pH位置上 ? 用于分離具有不同 pI的蛋白和測(cè)定蛋白的 pI ?等電聚焦電泳的特點(diǎn) ※ 濃縮效應(yīng) (或稱(chēng)聚焦效應(yīng) ) ? 分離僅僅決定于蛋白質(zhì)的 pI。 ⊕ 豬生長(zhǎng)激素經(jīng) SDS PAGE后只有 28kD帶， IEF卻有 pI。 ?堿性蛋白能充分和 SDS結(jié)合，但其所帶正電荷比SDS負(fù)電荷還要多，使蛋白 SDS膠束帶正電，同樣會(huì)向負(fù)極泳動(dòng) ?植物綠葉粗蛋白中含大量負(fù)極泳動(dòng)的蛋白 菜心綠葉粗蛋白經(jīng) SDS醋酸纖維素薄膜電泳 ,下方為正極 ,箭頭處為蛋白樣品點(diǎn)樣的位置 正極 負(fù) 極 ?植物綠葉粗蛋白中含有向負(fù)極泳動(dòng)的蛋白 菜心 (A)和生菜 (B)綠葉粗蛋白經(jīng) SDS醋酸纖維素薄膜電泳 ,下方為正極 ,箭頭處為蛋白樣品點(diǎn)樣的位置 正極 負(fù) 極 A B ?植物綠葉粗蛋白中向負(fù)極泳動(dòng)的蛋白的氨基酸組成 Table Amino acid contents of cathode buffer after crude protein from B. campestris ssp. chinensis var. utillis leaves was subjected
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