age,sdspage電泳分離-展示頁
2025-05-05 08:49本頁面
【正文】 Cys Val Met IIe Leu Tyr Phe Lys His Arg 見 :曾秋蓮等 . 植物中在 SDSPAGE中向負(fù)極泳動(dòng)的富含苯丙氨酸的蛋白的發(fā)現(xiàn) . 中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào) , 2022, 22(1):8690 ?發(fā)現(xiàn)蛋白 SDS膠束向負(fù)極泳動(dòng)的意義 ⊿ 蛋白性質(zhì)和蛋白組學(xué)研究有缺陷 ⊿ 負(fù)極泳動(dòng)的蛋白容易被忽視 ⊿ 解釋有些蛋白的電荷不均一性 ⊕ 很多蛋白經(jīng)一些方法證實(shí)是純的，如 SDSPAGE后只有單帶，但 IEF卻含多個(gè) pI。 水分子便向負(fù)極移動(dòng) ， 并帶動(dòng)溶液中的蛋白酶等顆粒一起向負(fù)極移動(dòng) € 若蛋白酶帶負(fù)電 ， 泳動(dòng)速度則變慢 一般要選擇電滲較少的固體支持物 (不帶電 ) €若帶正電 ， 泳動(dòng)速度則加快 €若不帶電 ， 顆粒也會(huì)向負(fù)極移動(dòng) 二，電泳技術(shù)的應(yīng)用范圍 ? 酶的純度鑒定 （ 分析電泳 ） SDSPAGE、 PAGE、 IEF（ 電泳純 ） ? 酶 全酶和亞基分子量 測定 SDSPAGE、 PAGE ? pI測定 IEF ? 酶的分離純化（制備電泳） 三，主要采用的電泳技術(shù) (支持物 ) ? 聚丙烯酰胺凝膠電泳 同時(shí)具有電荷和分子篩的雙重作用 ， 故具很高的分辨率 € NativePAGE 蛋白在天然狀態(tài)下的電泳 € SDSPAGE 蛋白在 SDS變性下的電泳 ? 瓊脂糖凝膠電泳 (核酸電泳 ) 瓊脂糖凝膠為電泳的支持物 . 方便但分辨率低 ? 醋酸纖維素薄膜電泳 ◆ 聚丙烯酰胺凝膠的形成 ※ 丙烯酰胺和甲叉雙聚丙烯酰胺為聚合單體 ,在聚合催化劑的催化下 ,聚合為聚丙烯酰胺凝膠 ※ 聚合的催化劑 ▲ 過硫酸銨和四甲基乙二胺 (TEMED) ▲ 光和化學(xué)核黃素 四 聚丙烯酰胺凝膠電泳 (PAGE) ※ 丙烯酰胺 甲叉雙丙烯酰胺 有毒，液體 無毒，固體 . 聚合 聚丙烯酰胺凝膠 催化劑 ◆ 聚合單體丙烯酰胺的濃度和凝膠孔徑的關(guān)系 ◆ 均一膠和梯度膠 ?聚丙烯酰胺凝膠通常由濃縮膠和分離膠組成 ?濃縮膠 :丙烯酰胺濃度均為4%,起蛋白上樣和濃縮的作用 ?分離膠 :起分離蛋白的作用 , 丙烯酰胺濃度可以是相同的 (均一膠 ),也可以是不同的 (梯度膠 ) ◆ 梯度膠電泳的特點(diǎn) ※ 分離膠的丙烯酰胺濃度由上至下形成從低到高的連續(xù)梯度 ,一般是 4%20% ?分辨率高 ?可連續(xù)上樣 ?電泳時(shí)間長 ?可消除電荷對遷移率的影響 ◆ 濃度梯度凝膠的配制 ?需采用梯度混合器，配制時(shí)，濃溶液置于混合室，稀溶液置于貯存室 ◆ 堿性電泳系統(tǒng) ?用 ，電泳向正極進(jìn)行 .下槽接正極，上槽接負(fù)極，以溴酚藍(lán)為指示染料 ?最常用 ?可用于分析絕大多數(shù)的蛋白酶，因?yàn)槠鋚
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