【正文】 附 錄 C（資料性附。v. 處死動物時應選用快速、有效的方法，以盡可能減少其痛苦，最好實施安樂死以使在其無知覺的條件下死亡，且在被丟棄前必須確認其已經(jīng)死亡。iii. 在不影響試驗結果的前提下，對動物進行諸如手術之類等極為痛苦的試驗操作時應給予麻醉處理，且操作完成后的動物如無需處死，應給予高標準的照料。ii. 對動物的試驗操作手法應正確、輕柔，應盡可能避免對動物重復進行帶來應激和痛苦的試驗操作。v. 如需要運輸動物，則在運輸過程中的飼養(yǎng)管理也應符合上述要求。iii. 應及時提供充足的飼料和飲水，并保證其含有動物需要的充足的營養(yǎng)成分，且具有良好的適口性，應注意保證這些飼料和飲水的食用安全性。d) 實驗動物的飼養(yǎng)管理應注意以下幾方面：i. 應為動物提供足夠的活動空間，不應過于擁擠，同時，在不影響實驗結果以及不會導致傷害的前提下，應為具有社會性的動物提供一些交往的伙伴。如為各種動物提供適宜的溫濕度、晝夜溫差、足夠的新鮮空氣、換氣次數(shù)、照明控制、噪聲控制等，并保證其潔凈度符合要求。a) 對動物飼養(yǎng)及操作人員進行專門的培訓，使其理解實驗動物的生理、生態(tài)、習性等，掌握正確的動物捕捉、固定等操作方法，還需要學習動物實驗倫理學方面的知識和要求，最后必須進行理論和實際操作考核，合格并獲取相應的資質認證或授權后方可上崗。c) 減少（Reduction）原則：在動物實驗中，如某些非人道操作不可避免，則在能滿足實驗要求的前提下，應盡可能減少動物的使用數(shù)量，如不盲目增加各試驗組動物數(shù)；減少原則更深層次的要求為從使用的實驗動物中獲取盡可能多的信息。a) 替代（Replacement）原則：在達到實驗目的的前提下，盡可能用認知能力差的低等動物替代認知能力強的高等動物，如用大、小鼠替代狗、猴進行試驗；或用無感知的材料替代存在感知的動物，如用體外培養(yǎng)細胞、組織替代動物整體進行試驗； 替代原則更深層次的要求為不通過與動物相關的試驗或過程去獲取所需的知識。 目前國際社會普遍認同動物有五大自由：即享有不受饑渴的自由；享有生活舒適的自由；享有不受痛苦傷害和疾病威脅的自由；享有生活無恐懼和悲傷感的自由；享有表達天性的自由。 “3R”原則 即“替代、優(yōu)化和減少（Replacement, Refinement and Reduction）”原則，指為了保護動物權益，人類應盡可能減少實驗動物的用量，優(yōu)化實驗方法，采用其他手段或對象替代動物進行實驗。 應重視外部評審和能力驗證、考核、比對結果，無論結果滿意與否，都應根據(jù)此結果評估自身的檢驗質量并采取必要的改進措施。 外部質量保證 實驗室應積極參加、接受上級權威部門或認可機構組織的認可評審或能力驗證計劃，或參加各種類型的檢驗質量考核活動。3) 檢查最終評價是否綜合、分析了所有試驗結果，依據(jù)是否明確，過程是否合理。b) 檢驗評價1) 檢查試驗人員資質是否符合要求，如動物飼養(yǎng)、操作人員及特殊儀器操作人員是否經(jīng)過專門培訓并獲得相關的資質認證，病理切片的閱片人員是否已獲得相關的資質認證和授權等。5) 檢查是否存在無效數(shù)據(jù)，對無效數(shù)據(jù)的處理方法是否正確、合理，是否提供了支持所選處理方法的統(tǒng)計檢驗。3) 檢查核對錄入統(tǒng)計分析軟件的數(shù)據(jù)與原始數(shù)據(jù)是否一致。 試驗后的質量保證a) 試驗數(shù)據(jù)1) 檢查試驗數(shù)據(jù)的可靠性，如將生化指標的測定結果與實驗室歷史檢測獲得的正常參考值進行對比分析，病理切片送權威機構會診并與自身閱片結果進行比對等。3) 對照SOP檢查儀器操作是否正確無誤。e) 儀器、試劑1) 使用儀器前，檢查儀器狀態(tài)，確認其能正常工作。5) 檢查標本的處理及保存方法是否正確、有效。3) 檢查標本采集操作是否正確，如活體采樣時是否造成動物嚴重感染，動物處死是否損壞待檢臟器等。d) 標本采集方面1) 檢查采集標本所用器具是否符合要求，如是否存在影響試驗結果的污染，全血采集管是否加入抗凝劑等。c) 試驗觀察1) 對照試驗計劃檢查是否完成了所需的所有試驗觀察，且觀察所得結果是否被及時、準確、詳細的記錄。通過動物出現(xiàn)的癥狀或大體解剖情況判斷試驗操作是否對其造成了損傷。b) 試驗操作1) 通過對培養(yǎng)基進行空白操作培養(yǎng)檢驗培養(yǎng)基是否除菌徹底，無菌操作是否符合要求。3) 檢查試驗系統(tǒng)的特性及相關的質控檢驗結果是否符合要求。2) 檢查受試物前處理方法是否正確、合理，是否會破壞受試物成份，受試物在載體中的穩(wěn)定性是否達到要求，分散是否均勻，摻入飼料的受試物對飼料適口性、營養(yǎng)成份等的影響是否會影響試驗結果， 試驗過程的質量保證a) 試驗系統(tǒng)1) 確認已設立了必要的對照組，檢查各對照組除了給予的受試物不同之外的其他因素是否一致，如飼養(yǎng)/培養(yǎng)環(huán)境、飲食飲水、試驗操作、試驗觀察以及標本的采集和檢查等。檢查細胞、細菌培養(yǎng)環(huán)境的無菌條件是否達到要求，培養(yǎng)方法是否滿足試驗的技術要求。3) 檢查試驗系統(tǒng)飼養(yǎng)或培養(yǎng)環(huán)境、方法是否符合要求。2) 檢查試驗系統(tǒng)是否健康、生長狀態(tài)是否良好。b) 試驗系統(tǒng)1) 檢查試驗系統(tǒng)的選擇是否正確、合理。 實驗室負責人對質量保證措施的實施和監(jiān)督活動負責，試驗人員在試驗負責人的領導下實施質量保證措施，并由質量監(jiān)督員通過抽查、審核等方式予以監(jiān)督。7 檢驗結果質量保證 內部質量保證 質量保證措施應貫穿于檢驗工作的全過程，尤其應重視對檢驗結果影響較大、技術難度較高或易被忽視的關鍵控制點進行質量檢查。4) 試驗結果評價是否正確、合理。2) 試驗計劃中對試驗過程的設計和要求是否正確、合理。b) 抽取不少于20%的檢驗報告（包括原始記錄和試驗計劃）進行檢查。 對試驗人員應進行試驗操作的現(xiàn)場目擊檢查，如大、小鼠灌胃操作、動物大體解剖操作、細胞培養(yǎng)無菌操作等。e) 檢查各儀器設備擺放是否符合規(guī)范要求，對于動物房應檢查動物飼養(yǎng)用具，如籠架、墊料、籠具等放置是否正確合理。c) 檢查實驗室設施維護情況，如通風設施、空氣消毒設施、無菌室、安全防護設施等。 實驗室設施及實驗設備的檢查a) 檢查實驗室環(huán)境溫濕度記錄是否齊全，溫濕度量值是否在規(guī)范要求范圍內。報告重發(fā)需要經(jīng)過申請、審批程序。 實驗室應有關于重發(fā)報告的政策和程序。 實驗室應有關于更改報告的政策和程序。 如果檢驗結果以臨時報告或授權人口頭報告的形式傳遞，隨后還應向委托方送交一份正式報告。 實驗室應保留所報告結果的文檔或備份，且保存時間不應少于2年，必要時，需根據(jù)具體情況延長保存時間。報告中應包括但不限于以下內容：a) 報告標題；b) 試驗項目名稱；c) 樣品名稱及批號；d) 對照物名稱；e) 樣品特征，性狀、包裝及數(shù)量情況，必要時包括純度、穩(wěn)定度和均一度等；f) 委托方名稱及地址；g) 實驗室名稱及地址；h) 試驗開始和結束日期；i) 質量保證聲明及有關事項聲明；j) 試驗方法的選擇及依據(jù)；k) 試驗系統(tǒng)的選擇、來源、特征描述及分組信息；l) 樣品的前處理方法、載體名稱及保存方法；m) 給予樣品的途徑、劑量、頻率和實驗期限；n) 說明試驗過程的具體信息；o) 試驗結果的總結；p) 試驗結果的陳述，包括數(shù)據(jù)資料的統(tǒng)計處理方法及統(tǒng)計軟件的名稱、版本號；q) 根據(jù)試驗結果進行分析并做出評價結論；r) 結果的解釋（如需要）；s) 其它注釋，必要時，應給出檢出限和測量不確定度評估；t) 試驗人、審核/校核人員（試驗負責人）、報告簽發(fā)人（實驗室負責人）簽名。實驗室負責人應對結果分析解釋人員進行授權并定期評審。 報告如何送遞可與客戶商定，應確保檢驗報告在約定時間內送達合適的人員，并確保滿足安全和保密要求。 實驗室負責人應制定報告的格式。如果由本實驗室出具報告，則不得做出任何可能影響結果評價和解釋的更改，且注明哪些檢驗工作是由外部實驗室完成。應對委托的樣品進行登記且保留一份受委托實驗室報告的副本。 與受委托方簽訂具備法律效力的協(xié)議并予以保存，以確保：a) 充分明確對委托方及被委托方的各項要求，并形成文件；b) 受委托實驗室有能力滿足這些要求且沒有利益沖突；c) 對檢驗程序的選擇應適合其預期用途；d) 明確對檢驗結果的解釋責任。 委托 實驗室應制定程序文件，規(guī)定必要時轉委托部分工作到外部實驗室的相關要求。c) 評價時應注意試驗組與對照組之間的差異以及各試驗組之間的差異，以求發(fā)現(xiàn)樣品可能的毒性作用及其劑量－效應/反應關系。 試驗結果評價a) 進行結果評價的人員應具有一定的毒理學專業(yè)知識及毒理學實驗室工作經(jīng)驗，實驗室負責人對最終的結論負責。 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析及結果評價 試驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析a) 應遵照試驗計劃或試驗方法中制定的統(tǒng)計方案對試驗獲得的原始數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析；b) 試驗原始數(shù)據(jù)及統(tǒng)計結果均應以列表的形式輸出，以方便核查；c) 如使用電腦軟件進行統(tǒng)計分析，如SAS、SPSS等，則數(shù)據(jù)錄入文件及統(tǒng)計結果的輸出文件均應作為原始記錄予以保存；d) 統(tǒng)計學分析應著眼于樣品的安全性評價問題，如分析劑量組和對照組的差異以及各不同劑量組的差異及其規(guī)律等；e) 如統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)問題，如劑量組和對照組某指標存在統(tǒng)計學顯著性差異（如p），則應分析這些問題與樣品安全性之間的關系；f) 如因統(tǒng)計學原因剔除某些數(shù)據(jù)，應提供支持此決定的統(tǒng)計學檢驗結果；g) 對于諸如組織病理學檢查等描述性試驗結果，必要時，應就異常發(fā)生率數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。j) 如在大體解剖中發(fā)現(xiàn)存在損傷的組織器官，則應對各組動物進行此組織器官的組織病理學檢查。h) 需進行實驗動物標本的組織病理學檢查時，應在動物死亡或處死后及時取出待檢組織、器官并固定，以避免自溶，并應確保標本被有效固定。f) 采集實驗動物臟器標本應去除其附著的其他無關組織，并應盡快稱重以減少因臟器中水分丟失帶來的差異。d) 對采集的生物標本應盡早進行檢測或處理，如需保存，則應選擇適當保存方法。b) 對實驗動物標本的采集應盡可能在同一天的同一時段內完成，如不能在一天內完成，則應確保在每個采集日的同一時段內操作。g) 組織病理學檢查應詳細記錄大體解剖檢查、病理閱片描述，尤其應注意對照組與各劑量組間出現(xiàn)病變的臟器及病變種類、性質、強度和發(fā)生率的描述。f) 應對試驗操作過程進行盡可能詳盡的記錄，記錄要即時進行，并具可追溯性。e) 試驗過程中觀察到的內容及數(shù)據(jù)應被直接、立即、客觀、準確和清晰的記錄下來，并且簽署記錄人姓名和記錄日期。b) 對實驗動物的籠邊觀察一天不應少于兩次，一般間隔6小時，必要時應適當增加觀察次數(shù)，縮短觀察的時間間隔，如動物出現(xiàn)癥狀、死亡或其他異常反應時。e) 試驗過程中發(fā)現(xiàn)試驗系統(tǒng)出現(xiàn)意外情況，如非受試物因素造成死亡、疾病或培養(yǎng)細胞受到污染等，應立即報告試驗負責人制定處理方案：1) 如存在不影響最終試驗結果的治療、處理方法，則應在隔離條件下對試驗系統(tǒng)進行治療或處理，恢復健康狀態(tài)后繼續(xù)試驗，并在最終報告中予以說明；2) 在不影響最終試驗結果且條件允許的前提下，可將此個體剔除并在數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析時予以考慮；3) 如無適當補救措施，則應終止試驗。c) 所有試驗組及對照組動物的給樣操作均應同期進行，如由于動物數(shù)量過多而要分批進行，則各試驗組與對照組應平行處理。 試驗操作 給樣操作a) 應遵照試驗計劃給予試驗系統(tǒng)受試物及對照物，保證給樣量準確、給樣方式一致。 樣品前處理后如需保存?zhèn)溆?，則應以適當方法保存。如受試物輔料熱能含量較高，則應另加設對照組，使其飼料中含有相同比例的此輔料以與試驗組進行比對；d) 應根據(jù)樣品的特性制定合適的飼料制作時間及保存方法，如油脂含量較高的樣品，應盡量新鮮制作，低溫保存。b) 應注意混合了樣品的飼料的適口性，不應因氣味、味道或口感等因素的改變而影響受試動物的進食和飲水量而最終影響試驗結果，否則，應采取適當措施最大限度降低此影響并在結果分析中予以考慮。 應保證樣品在載體中分散均勻，如某些粉末狀物質不溶于載體，可配制成混懸液并在給樣操作前充分混勻。 如處理樣品時需要載體，則載體不應對試驗結果產(chǎn)生不可接受的影響，如不能與樣品、體外代謝活化系統(tǒng)（S9）、培養(yǎng)基成份等發(fā)生化學反應。若試驗過程中尚需處死部分動物，則應根據(jù)需要增加各組實驗動物數(shù)量。f) 各組試驗系統(tǒng)的數(shù)量應能滿足試驗項目的技術要求。d) 對于培養(yǎng)細胞或細菌試驗系統(tǒng)，所有試驗組及相應對照組均應由同一批母代傳代獲得。b) 試驗系統(tǒng)分組應遵循統(tǒng)計學的隨機分配原則，即保證各組動物均為從同一總體中隨機抽取的樣本，且與研究相關的各項指標應盡可能保證一致。c) 用于試驗的菌株應處于對數(shù)生長后期或穩(wěn)定前期（生長密度大約為109/ml），穩(wěn)定后期的菌株不應用于試驗。 試驗菌株的準備a) 標準菌株須進行鑒定，如基因型鑒定、自發(fā)回變數(shù)鑒定和對致突變陽性對照物的反應等，合格后才能用于試驗。c) 應確認用于試驗的培養(yǎng)細胞狀態(tài)良好、均一且穩(wěn)定。 體外培養(yǎng)細胞的準備a) 試驗前應將體外培養(yǎng)細胞進行適當傳代，以能收獲足夠的細胞量。f) 實驗動物的飼養(yǎng)方式應滿足試驗項目的需要，如需計算攝食量或食物利用率指標的試驗項目則應單籠飼養(yǎng)實驗動物。e) 將實驗動物由隔離檢疫室轉入試驗飼養(yǎng)室，并根據(jù)試驗項目放置于相應區(qū)域內，不同種屬實驗動物應放置于分隔的區(qū)間內。c) 單個試驗項目中所使用的試驗動物體重應相近，差異最大不應超過10％。 試驗系統(tǒng)的準備與分組 實驗動物的準備a) 試驗動物的選擇應按照試驗計劃的要求，并根據(jù)樣品的理化特性及其可能的靶器官，盡可能選擇敏感性高的種屬和品系的實驗動物，其性別、年齡、初始體重等均應能滿足試驗項目的需要。 SOP應根據(jù)試驗需要及時更新，并將更新版本盡快發(fā)布，同時對新、舊版SOP均需建檔管理。 為了確保試驗操作的準確、安全和統(tǒng)一，實驗室應編寫與試驗相關的SOP，并經(jīng)實驗室負責人審閱批準。 實驗室負責人應負責保證檢驗