【正文】 三、培養(yǎng)器皿及用具(一)玻璃器皿長(zhǎng)時(shí)間進(jìn)行培養(yǎng)和貯藏藥液用的玻璃器皿,要求對(duì)堿性溶解度小的優(yōu)質(zhì)硬質(zhì)玻璃制成,而且能耐高壓滅菌。超凈工作臺(tái)是通過風(fēng)機(jī)交流,將空氣經(jīng)微生物過濾器過濾而到達(dá)無菌臺(tái)面,使用時(shí)間長(zhǎng)會(huì)引起堵塞,影響過濾效果。(十)超凈工作臺(tái)主要用于無菌操作室內(nèi)接種和試管苗繼代轉(zhuǎn)接無菌操作裝置。工廠化生產(chǎn)適合于大型的滅菌鍋,周轉(zhuǎn)快成本低。高壓蒸汽滅菌鍋有小型手提式、大型臥式、大型立式等多種。(八)雙目實(shí)體顯微鏡用于解剖觀察植物各器官和組織,進(jìn)行培養(yǎng)物(如胚、莖尖、根尖等)的分離,也可以從培養(yǎng)玻璃器皿外部觀察細(xì)胞或組織的生長(zhǎng)情況。酸度計(jì)的測(cè)定精密度比試紙高，一般用以科研。(七)酸度計(jì)培養(yǎng)基中的pH十分重要。接種用的鑷子、接種針、彎頭剪、解剖刀等適合干熱滅菌,溫度為120～160℃,持續(xù)1～3小時(shí)即可。(三)干燥箱要用于玻器皿、小型金屬接種工具的干燥滅菌。分析天平和電光分析天平放置的位置要平穩(wěn)、干燥,避免腐蝕性藥品,用完后要罩蓋。 ,用于稱量培養(yǎng)基中的有機(jī)物和部分微量元類。 ,用于稱取蔗糖或瓊脂等。南方培養(yǎng)室選用四面大窗戶,充分利用自然光。工廠化組培生產(chǎn)設(shè)計(jì)培養(yǎng)室考慮節(jié)電、降低成本問題。無菌操作室配置超凈工作臺(tái),用于無菌接種和試管苗轉(zhuǎn)接。（二）無菌操作室無菌操作室,也叫無菌接種室。 洗刷室主要用于培養(yǎng)容器的洗刷工作。 化學(xué)實(shí)驗(yàn)空主要用于化學(xué)藥品的稱量和溶液的配制。實(shí)驗(yàn)室根據(jù)結(jié)構(gòu)和應(yīng)用范圍分為組培準(zhǔn)備室、無菌操作室、試管苗培養(yǎng)室。三、植物組織培養(yǎng)的應(yīng)用（一）優(yōu)良品種的快速繁 （二)莖尖脫毒培育無毒苗（三）組織培養(yǎng)培育新品種 （四）次生代謝產(chǎn)物的生產(chǎn)（五）種質(zhì)資源的保存和交換植物組織培養(yǎng)技術(shù)是生物技術(shù)的重要組成部分,細(xì)胞工程、基因工程、酶工程都必須反映植株水平才能利用,組織培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展有不可估量的前景。特點(diǎn)是形成胚狀體的數(shù)量多,繁殖量大。植物的葉片、子房、花藥等外植體經(jīng)人工培養(yǎng)基、特殊培養(yǎng)條件誘導(dǎo)培養(yǎng)脫分化、再分化產(chǎn)生胚狀體,由胚狀體形成完整小植株。適合于創(chuàng)造有益突變體,培育新品種。特點(diǎn)是愈傷組織再分化,產(chǎn)生大量的單芽或叢生芽,增加繁殖數(shù)量。 不定芽發(fā)生方式,是指植物外植體在組織培養(yǎng)過程中經(jīng)脫分化再分化過程,形成不定芽的類型。特點(diǎn)是植物器官經(jīng)誘導(dǎo)直接分化原球莖,速度快,繁殖數(shù)量大。適應(yīng)多種植物種類,移栽成活率高。成苗快,繁殖效量多。植物再生方式可分幾種類型: 切段及叢生芽增殖方式,是指在組培中切段繁殖或產(chǎn)生不定芽增殖的類型。許多植物是靠種子生長(zhǎng)、發(fā)育來產(chǎn)生完整植株,而不少的植物種類可通過根、莖、葉等器官再生功能而形成完整的植株。另一種是胚形態(tài)建成,在愈傷組織表面或內(nèi)部形成很多胚狀體,也稱體細(xì)胞胚狀體。單倍體細(xì)胞比二倍體細(xì)胞難。一般單子葉植物和裸子植物比雙子葉植物難。在組織培養(yǎng)中,體細(xì)胞要表現(xiàn)它的全能性,從已經(jīng)有專一功能的細(xì)胞(葉芽能發(fā)育成葉片的功能),在人工培養(yǎng)的特定條件下,經(jīng)過脫分化過程,改變細(xì)胞原來的結(jié)構(gòu)和功能,恢復(fù)到無結(jié)構(gòu)的分生組織狀態(tài)（愈傷組織),從愈傷組織分生細(xì)胞團(tuán)再次分化,進(jìn)行形態(tài)建成而產(chǎn)生不定根、不定芽或胚狀體,形成完整的植株。二、植物組織培養(yǎng)的應(yīng)用原理(一)植物細(xì)胞的全能性植物細(xì)胞的全能性,是指植物體上每個(gè)具有完整細(xì)胞核的植物細(xì)胞,都具有該植物體的全部遺傳信息和產(chǎn)生完整植株的能力。脫分化過程是指植物器官的根、莖、葉、花、果、種子在人工條件下失去原有的狀態(tài)和功能,恢復(fù)到能分裂和增殖細(xì)胞的狀態(tài)(愈傷組織)的過程:再分化過程是指將細(xì)胞狀態(tài)(愈傷組織)再次分化產(chǎn)生分生組織,形成器官狀態(tài)(不定根和不定芽)的過程。愈傷組織在特定條件下(無菌條件、人工培養(yǎng)基、適宜溫度、光照)經(jīng)誘導(dǎo)產(chǎn)生再分化過程,形成不定芽、不定根或胚狀體,最后形成完整的小植株。外植體在人工條件下(無菌條件、人工培養(yǎng)基、適宜溫度、光照)經(jīng)誘導(dǎo)產(chǎn)生脫分化過程,形成愈傷組織。外植體都是多細(xì)胞的,并且組成它們的細(xì)胞是各種不同的類型。將分化過程中成熟或未成熟的離體胚培養(yǎng)稱胚狀體培養(yǎng)。將分化過程中脫離母體體細(xì)施或性細(xì)胞的培養(yǎng)稱細(xì)胞培養(yǎng)。將植物的根、莖、葉、花、果、種子等器官的培養(yǎng)稱植物器官培養(yǎng)。由于培養(yǎng)物脫離母株而在試管內(nèi)培養(yǎng),又稱離體培養(yǎng)。對(duì)外植體的選擇和滅菌接種過程也必須全面了解。輔導(dǎo)材料 植物組織培養(yǎng)技術(shù)概述組織培養(yǎng)是應(yīng)用農(nóng)業(yè)生物技術(shù)的重要領(lǐng)域,它利用植物細(xì)胞全能性的基本理論,在人工培養(yǎng)的條件下,使離體的植物的原生質(zhì)體、細(xì)胞、組織以及器官長(zhǎng)成完整植株的過程。微生物肥料：是以某些有益微生物菌體或產(chǎn)物直接喂養(yǎng)家畜家禽的一中飼料。七、農(nóng)業(yè)微生物在生產(chǎn)上的應(yīng)用微生物農(nóng)藥：是利用微生物本身及其代謝產(chǎn)物來預(yù)防病蟲雜草的制劑。表面培養(yǎng)：本法適用于專性需氧菌的培養(yǎng)。培養(yǎng)時(shí)間一般18～24小時(shí)。六、微生物的培養(yǎng)方法需氧培養(yǎng)：適合一般需氧和兼性厭氧菌的培養(yǎng)。(4)鑒別培養(yǎng)基:在培養(yǎng)基中加入特定的底物和指示劑,測(cè)定細(xì)菌對(duì)糖、蛋白質(zhì)的分解能力和代謝產(chǎn)物以鑒別細(xì)菌,如糖發(fā)酵管等。(2)營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基:在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入葡萄糖、血液、酵母浸液等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),供營(yíng)養(yǎng)要求較高或特殊營(yíng)養(yǎng)要求的細(xì)菌用,如血平板。液體培養(yǎng)基主要用于增菌、鑒別和純培養(yǎng),固體平板培養(yǎng)基主要用于分離培養(yǎng),固體斜面培養(yǎng)基主要用于鑒別和純培養(yǎng),而半固體培養(yǎng)基則用于觀察細(xì)菌動(dòng)力和短期保存菌種。培養(yǎng)基制成后必須經(jīng)過滅菌處理。五、微生物的培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)是指根據(jù)微生物的生理特征,用適宜的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)和培養(yǎng)條件培養(yǎng)微生物的過程。傾注平皿法:本法用于飲水、牛乳及尿液標(biāo)本中細(xì)菌數(shù)的測(cè)定。(6)注意事項(xiàng):畫線接種時(shí),力量要適中,接種環(huán)與培養(yǎng)基表面約呈45176。燒灼接種環(huán)后用相同方法進(jìn)行第三區(qū)、第四區(qū)、第五區(qū)畫線。(4)再次燒均接種環(huán),冷卻,將培養(yǎng)基轉(zhuǎn)動(dòng)80176。(3)左手持平板培養(yǎng)基,左手拇指、食指開啟平皿蓋,右手將取菌液的接種環(huán)在平板表面的邊緣部分涂抹。操作方法:(1)右手以持筆式握接種環(huán),在火焰上燒約滅菌。操作方法:將一定量或適量的菌液加入到瓊脂培養(yǎng)基表面,然后用滅菌的L型玻璃棒或棉拭子于不同的角度反復(fù)涂布,被接種的菌液均勻分布于瓊脂的表面,然后帖上藥敏紙片,或直接培養(yǎng),本法經(jīng)培養(yǎng)后細(xì)菌均形成菌苔。微生物的接種方法有:涂布法、劃線法、傾注法、點(diǎn)植法、穿刺法、浸洗。（4)衰亡期:細(xì)菌繁殖速度繼線減慢或停止，死亡數(shù)繼續(xù)上升,死菌數(shù)超過繁殖數(shù),活菌數(shù)下降,細(xì)菌的性狀變異明顯,形態(tài)不易辨認(rèn)、代謝活動(dòng)停滯,難以鑒定。此期細(xì)菌菌體增大、代謝活躍,但分裂遲緩,菌數(shù)增加不明顯,是細(xì)菌適應(yīng)新環(huán)境的階段(2)對(duì)數(shù)期:培養(yǎng)至8～18h。2)專性厭氧菌,如破傷風(fēng)桿菌:3)兼性厭氧菌,如大腸桿菌細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的規(guī)律(1)細(xì)菌的繁殖方式:二分裂方式進(jìn)行無性繁殖(2)細(xì)菌繁殖速度:大多數(shù)細(xì)菌繁殖一代需20～30min,個(gè)別細(xì)菌繁殖較慢,如結(jié)核桿繁殖一代需18～20h(3)細(xì)菌群體生長(zhǎng)曲線:將細(xì)菌接種于適宜的液體培養(yǎng)中,間隔不同時(shí)間取樣測(cè)定活菌數(shù),以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)、活菌數(shù)的對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)可繪出一條反映細(xì)菌群體生長(zhǎng)繁殖規(guī)律的曲線，稱作生長(zhǎng)曲線。(2)酸堿度—pH:～,～:～。高壓蒸汽滅菌法可消滅芽胞，臨床上把是否消滅芽胞作為滅菌的指標(biāo)。產(chǎn)生芽胞的細(xì)菌都是G+菌。（4)芽胞:某些細(xì)菌在一定環(huán)境條件下,細(xì)胞質(zhì)脫水濃縮,在菌體內(nèi)形成的圓形或橢圓形的小體。鞭毛的功能:是細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)器官,有抗原性(稱H抗原),可用來鑒別細(xì)菌:某些細(xì)菌的鞭毛與致病性有關(guān)。 (2)鞭毛:某些細(xì)菌表面附著的細(xì)長(zhǎng)呈波狀彎曲的絲狀物,化學(xué)成分主要為蛋白質(zhì),特殊染色后在光學(xué)顯微鏡下可見。細(xì)菌的特珠結(jié)構(gòu)(1)莢膜:某些細(xì)菌的細(xì)胞壁外包繞的一層較厚的粘液性物質(zhì),鏡下用特殊的莢膜染色才可見。特征性結(jié)構(gòu):中介體、細(xì)胞膜(3)細(xì)胞質(zhì)位置:細(xì)胞膜內(nèi)基本成分:水、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、核酸及少量的糖和無機(jī)鹽。(2)細(xì)胞膜：位置:細(xì)胞壁內(nèi)側(cè)緊包在細(xì)胞質(zhì)外功能:①參與細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)外物質(zhì)交換。④某些細(xì)菌細(xì)胞壁成分是細(xì)菌致病的物質(zhì)基礎(chǔ),如G菌細(xì)胞壁的脂多糖。②保持細(xì)菌抵抗低滲環(huán)境。(1)細(xì)胞壁 位置:細(xì)菌最外層,是與細(xì)胞膜緊密相連的一層堅(jiān)韌而富有彈性的膜狀結(jié)構(gòu)。菌體有數(shù)個(gè)彎曲稱螺菌。螺形菌:呈弧形或螺形。小桿菌,如百咳菌。按大小可分為大桿菌,如破傷風(fēng)桿菌。根據(jù)分裂平面和分裂后的排列方式不同分為雙球菌、鏈球菌、四聯(lián)球菌、八疊球菌、葡萄球菌等。三、細(xì)菌的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、繁殖方式（一）細(xì)菌的形態(tài)：細(xì)菌以微米(μm)為測(cè)量單位,按其外形細(xì)菌的的形態(tài)有球菌、桿菌和螺形菌三種。二、微生物與人類的關(guān)系(一)絕大多數(shù)微生物對(duì)人和動(dòng)、植物是有益的,有些是必需的。如真菌。這類微生物包括細(xì)菌、支原體、衣原體、立克次體、螺旋體和放線菌。（三）微生物種類:依據(jù)分化程度、結(jié)構(gòu)不同分為三型:非細(xì)胞型微生物：體積最小,能通過細(xì)菌濾器:分化程度低,結(jié)構(gòu)最簡(jiǎn)單,無典型的細(xì)胞結(jié)構(gòu),由單一核酸(DNA或RNA)核心和蛋白質(zhì)外殼構(gòu)成,缺乏酶系統(tǒng),不能人工培養(yǎng)而只能在活細(xì)胞內(nèi)生長(zhǎng)繁殖,如病毒。（二）微生物特點(diǎn):個(gè)體微小、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單。移碼突變 移碼突變是指在DNA分子中插入或丟失一個(gè)或幾個(gè)核苷酸對(duì),造成這一位以后全部密碼子的編碼順序發(fā)生改變,從而引起遺傳信息的改變。2)顛換:是指嘌呤與嘧啶之間的互換?？煞謨煞N形式：1)轉(zhuǎn)換:是指嘌呤之間或嘧啶之間的置換。基因突變可以改變基因攜帶的遺傳信息,主要有兩種方式:堿基替換和移碼突變。它是生物變異的根本來源,為生物進(jìn)化提供了最初的原材料。人為條件下誘發(fā)產(chǎn)生的基因突變叫做誘發(fā)突變。發(fā)生在體細(xì)胞中的突變,一般是不能傳遞給后代的。二、基因突變的本質(zhì)基因突變可以發(fā)生在體細(xì)胞中也可以發(fā)生在生殖細(xì)胞中?；蛲蛔兒虳NA復(fù)制、DNA損傷修復(fù)、癌變、衰老等因素有關(guān)?；蛲蛔?cè)谧匀唤缙毡榇嬖?它可以產(chǎn)生等位基因,并且常引起生物表現(xiàn)型的變化,所以是生物進(jìn)化的重要四素之一。*基因突變一、基因突變的概念基因突變是指在染色體的某一位點(diǎn)上發(fā)生了了化學(xué)變化,所以又稱點(diǎn)突變。核型為46,XX(XY)del(5)(pl5)臨床表現(xiàn)除特殊哭聲外,還們智力低下,生長(zhǎng)發(fā)門遲級(jí),小頭,滿臉,耳位低。(二)染色體結(jié)構(gòu)畸變引起的疾病貓叫綜合征:患兒具特殊的貓叫樣哭聲。該病患者智力大多正常,部分智力發(fā)育稍差。(2)先天性卵巢發(fā)育不全綜合征( Turner綜合征)主要臨床特征是:出生時(shí)低體重,原發(fā)閉經(jīng),不育,體矮(成人12D~140cm),小額等,而后發(fā)際低,蹼頸,肘外翻在本病十分典型,乳間距寬,至青春期乳腺不發(fā)育。X染色質(zhì)呈陽(yáng)性。25%的患者有乳房發(fā)育,患者身材高。患者在兒童期無任何癥狀,青春期開始出現(xiàn)病癥。共同的臨床特征:是性發(fā)育不全或兩性畸形(但有些患者僅表現(xiàn)為原發(fā)閉經(jīng),生殖力下降或智力較差等特征)(1)先天性睪丸發(fā)育不全( Klinefelter綜合征)。80%患者伴有先天性心臟病、多囊腎,耳聾等。（3）13三體綜合征(又稱 Patau綜合征)核型47,XX(XY)+13臨床表現(xiàn):顱面部畸形,小頭,前額、前腦發(fā)育缺陷,無嗅腦,眼球小,常有虹膜缺損,2/3患兒有唇裂并伴有腭裂,耳位低,耳廓畸形,常見多指(趾)。船形足,外生殖器畸形,95%病例有先天性心臟病。眼距寬，耳廓畸形。(2)18三體綜合征(又稱 Edward綜合征)核型47,X(XY)+18。其中大多數(shù)為21三體型,即47,XX(XY)+21,最常見,約占90%。女性患者雖能生育,但可將此病傳給后代?；純撼Ｓ蟹窝椎群粑栏腥竞桶籽　Ｐ律鷥嚎梢姷谌龂栝T,舌大外伸,流誕(故又稱伸舌樣癡呆)?；純撼侍厥饷娌炕巍＿@類疾病共有的臨床特征有生長(zhǎng)發(fā)育遲緩,智力低下,并伴有有多發(fā)畸形。（一)染色體數(shù)目異常所致的疾病包括常染色體異常和性染色體異常兩類。染色體病也常被稱為染色體綜合征。含:相互易位和羅氏易位。重復(fù) 是由于染色體或染色單體發(fā)生斷裂后形成的斷片插入到同源染色體上而形成。倒位 倒位是指某一染色體同時(shí)出現(xiàn)兩次斷裂,其中間的片段倒轉(zhuǎn)180176。(二)染色體結(jié)構(gòu)的改變(染色體畸變)染色體結(jié)構(gòu)的改變常見的有缺失、重復(fù)、倒位、易位四種情況。對(duì)于減數(shù)分裂來說,第一次分裂和第二次分裂過程均可發(fā)生染色體不分離。在減數(shù)分裂中,某一對(duì)同源染色體或姐妹染色單體在后期未能分離,同時(shí)進(jìn)入一個(gè)次級(jí)精(卵)母細(xì)胞或精(卵)細(xì)胞,可產(chǎn)生n+1和n1兩種類型的配子。在超三倍體中,多出的一條染色體構(gòu)成某號(hào)染色體三體(三體型)。染色體數(shù)目多于2n(2n+1)的細(xì)胞稱超二倍體。非整倍體變異是指一個(gè)體細(xì)胞內(nèi)染色體數(shù)比二倍體增加或減少一條或數(shù)條。含有3個(gè)或3個(gè)以上的染色體組的細(xì)胞或個(gè)體稱多倍體。人類正常體細(xì)胞中染色體數(shù)為46條,即2n=46,正常性細(xì)胞(精子或卵細(xì)胞)中染色體數(shù)為23條,即n=23條。具有一個(gè)染色體組的細(xì)胞或由這樣的細(xì)胞組成的個(gè)體稱為單倍體(細(xì)胞或個(gè)體),以n表示。染色體形態(tài)特征和數(shù)目是物種鑒定的重要標(biāo)志之一。物理和化學(xué)因素可提高染色體的變異頻率。自然狀態(tài)下,染色體變異的自發(fā)頻率是很低的。臨床應(yīng)用:快速性別鑒定。來源:Y染色體長(zhǎng)臂遠(yuǎn)端部分異染色質(zhì)。來源:失活的X染色體數(shù)目:X染色體數(shù)1臨床應(yīng)用:作為快速性別鑒定的手段之一。這樣,在含有XX的細(xì)胞和XY的細(xì)胞中,其X染色體基因產(chǎn)物的量基本相等,此稱為劑量補(bǔ)償。按照國(guó)際標(biāo)準(zhǔn),在描述一個(gè)核型時(shí),記載的第一項(xiàng)是染色體總數(shù)(包括性染色體),然后是一個(gè)逗號(hào)“,”,最后是性染色體組成。另一對(duì)隨男女性別而異,稱為性染色體,女性為XX染色體,男性為XY染色體,X染色體較大,為亞中著絲粒染色體,列入C組。Y染色體的大小變異較大,大于21和22號(hào)染色體,其長(zhǎng)臂常常平行靠攏。D組:包括1315號(hào)染色體,為近端著絲粒染色體,可以有隨體；E組:包括1618號(hào)染色體,16號(hào)為中央著絲粒染色體