微生物試題(問答)(參考版)
2025-04-07 23:26本頁面
【正文】 限量補(bǔ)充培養(yǎng)法：在[]上加入微量His，由于Hisˉ菌株受到營(yíng)養(yǎng)的限制，因而只能長(zhǎng)成微小菌落，根據(jù)菌落的大小，即可區(qū)出野生型和Hisˉ。影印接種法：將菌懸液作適當(dāng)稀釋后，涂布在補(bǔ)充培養(yǎng)基[His]平皿上，若在[]上沒有長(zhǎng)出菌落，而在[His]相應(yīng)位置上長(zhǎng)出菌落，則該菌落即是Hisˉ菌株形成的菌落。夾層培養(yǎng)法：將菌懸液作適當(dāng)稀釋后，涂布在基本培養(yǎng)基[]平皿上培養(yǎng)，待長(zhǎng)出菌落后作標(biāo)記，然后在其上傾上[His]培養(yǎng)基補(bǔ)充培養(yǎng)，新長(zhǎng)出的菌落即是Hisˉ菌株形成的菌落。逐個(gè)檢出法：將菌懸液作適當(dāng)稀釋后，涂布在補(bǔ)充培養(yǎng)基[His]平皿上，使長(zhǎng)出單個(gè)菌落，然后逐個(gè)接種在[]、[His]平皿的相應(yīng)位置上培養(yǎng)，若在[]上沒有長(zhǎng)出菌落，而在[His]相應(yīng)位置上長(zhǎng)出菌落，則該菌株即為Hisˉ菌株。（2）分離：可采用逐個(gè)檢出法、夾層培養(yǎng)法、限量補(bǔ)充培養(yǎng)法、影印培養(yǎng)法中的任意一種。后者可在堿性條件下與空氣中的氧反應(yīng)生成二乙酰，二乙酰能與蛋白胨培養(yǎng)基中胍基起反映，生成紅色化合物，使培養(yǎng)液變成紅色。在葡萄糖發(fā)酵液中加入甲基紅指示劑就可觀察到不同的結(jié)果：大腸桿菌發(fā)酵過程中產(chǎn)酸多，甲基紅由黃變紅，氣桿菌發(fā)酵中指示劑顏色不變。這些腸桿菌在形態(tài)上很相似，可根據(jù)它們?cè)诎l(fā)酵葡萄糖時(shí)產(chǎn)生的不同產(chǎn)物來進(jìn)行區(qū)別、鑒定。（2）營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變株發(fā)酵法：如賴氨酸的生產(chǎn)就是用高絲氨酸缺陷型發(fā)酵制得；（3）添加前體法：由前體a氨基丁酸生產(chǎn)異亮氨酸；（4）酶轉(zhuǎn)化法：如由二氨基庚二酸生產(chǎn)賴氨酸。當(dāng)害蟲食入含有芽孢和伴孢晶體的蘇云金芽孢桿菌后，晶體毒素經(jīng)蟲體腸液分解，轉(zhuǎn)化為有活性的毒素，并使害蟲的中腸麻痹而引起癱瘓，停止進(jìn)食，隨后細(xì)菌穿過被破壞的腸壁，進(jìn)入血腔大量繁殖，導(dǎo)致害蟲加速死亡。另：由于產(chǎn)a淀粉酶的菌株多是芽孢桿菌，可直接將單孢子懸液加熱至80℃，處理15分鐘，然后作適當(dāng)系列稀釋。培養(yǎng)基可采用選擇培養(yǎng)基：在淀粉培養(yǎng)基中加入少量制霉菌。將單孢子懸液作適當(dāng)系列稀釋。預(yù)備一只無菌三角瓶，去掉表層幾厘米土壤，用無菌鏟迅速鏟取一定量土壤裝入三角瓶中。此法適合于各類微生物的保藏，包括病毒和噬菌體。（9）封口保存：待抽干（一般需8~10小時(shí)）后，將安瓿管從冰鹽水中取出，再在室溫下繼續(xù)抽真空半小時(shí)，然后在真空條件下用酒精燈在安瓿管的頸部熔化封口，放入冰箱中保存。（8）真空干燥：將凍結(jié)的安瓿管放在冰鹽水中，再連接在接有P2O5作吸水劑的高真空泵上抽干。（6）分裝安瓿管：用無菌吸管或較長(zhǎng)的毛細(xì)滴管，將菌懸液或孢子懸液按無菌操作加入已滅菌的安瓿管中，裝量不超過安瓿球部的1/3。（4）制備孢子懸液或菌懸液：將經(jīng)檢查無菌的脫脂牛奶加入已培養(yǎng)好的菌種斜面，如是產(chǎn)孢子的菌，制成孢子懸液，不產(chǎn)孢子的菌，制成菌懸液。（2）保護(hù)劑滅菌：將脫脂牛奶裝入三角燒瓶，塞上棉塞。重復(fù)操作三次后，用脫脂棉花過濾；也可將鮮牛奶以3000rpm離心幾分鐘，去除上層脂肪。間歇滅菌就是基于以上原理進(jìn)行的。3間歇滅菌法的原理：答：微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和休眠細(xì)胞對(duì)溫度的敏感性不同，營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞是不耐熱的，在80~100℃水中30分鐘即可完全殺死。高壓滅菌法升壓前要將冷空氣排盡，因?yàn)椋捍穑阂驗(yàn)榛煊锌諝獾乃羝皇羌冋羝?，?dāng)達(dá)到滅菌的壓力時(shí)，其溫度低于純蒸汽的溫度。2微生物命名的基本原則：答：屬名加種名。（2）人工預(yù)防接種。如：乙型腦炎、蚤傳播鼠疫、恙蟲幼蟲傳播恙蟲病等。如：麻風(fēng)、炭疽等。如：傷寒、痢疾、肝炎、霍亂等。如：結(jié)核、白喉、百日咳、流感等。在準(zhǔn)性生殖過程中，無論單倍體菌絲或異核體菌絲、雜合二倍菌絲都能進(jìn)行無性繁殖，產(chǎn)生分生孢子。2真核微生物準(zhǔn)性雜交的過程分為三個(gè)階段：答：（1）體細(xì)胞融合，進(jìn)行質(zhì)配，形成異核體細(xì)胞（菌絲）；（2）異核體細(xì)胞在質(zhì)配的基礎(chǔ)上進(jìn)行核配。（2）分離：可采用逐個(gè)檢出法、夾層培養(yǎng)法、限量補(bǔ)充培養(yǎng)法、影印培養(yǎng)法中的任意一種。青霉素濃縮法：將處理液培養(yǎng)在青霉素的基本培養(yǎng)液中，野生型因生長(zhǎng)而被殺死。限量補(bǔ)充培養(yǎng)法：在[]上加入微量的Leu，由Leuˉ于菌株受到營(yíng)養(yǎng)的限制，因而只能長(zhǎng)成微小菌落，根據(jù)菌落的大小，即可區(qū)分出野生型和Leuˉ。差別殺菌法：將處理液培養(yǎng)在基本培養(yǎng)液中，野生型能夠生長(zhǎng)，芽孢萌發(fā)形成營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞，然后將培養(yǎng)液加熱60℃、15分鐘，殺滅野生型營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞。2在人工誘變后的枯草桿菌懸液中篩選出亮氨酸缺陷型菌株的實(shí)驗(yàn)方案：答：（1）富集：可采用青霉素濃縮法、差別殺菌法的任意一種。(2)分離：可采用逐個(gè)檢出法、夾層培養(yǎng)法、限量補(bǔ)充培養(yǎng)法、影印培養(yǎng)法中的一種。2在人工誘變后的黑曲霉懸液中篩選出賴氨酸缺陷型菌株的實(shí)驗(yàn)方
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