微生物實驗專題(參考版)
2025-04-07 23:24本頁面
【正文】 8。3. 確定纖維素分解菌：→進行發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶實驗： （1）纖維素酶的發(fā)酵方法：→包括：液體發(fā)酵和固體發(fā)酵。方法二操作簡便，不存在菌落混雜問題◆產(chǎn)生淀粉酶的微生物也產(chǎn)生模糊透明圈◆有些微生物能降解色素，形成明顯的透明圈。 ★透明圈越大的菌落，產(chǎn)纖維素酶能力越強，分解纖維素的能力越強。 ★方法一中要使用NaCl溶液，其作用是：→漂洗作用。 ①方法一：→先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進行顏色反應。CMC—Na（水溶性羧甲基纖維素鈉）酵母膏KH2PO4土豆汁瓊脂溶解后加蒸餾水定容至1000ml5～10g1g100mL15g ②涂布平板：→將稀釋度為104～，30℃倒置培養(yǎng)。（3）梯度稀釋：→將選擇培養(yǎng)后的培養(yǎng)基進行等梯度稀釋101～107倍。②設計對照組培養(yǎng)基時，用葡萄糖代替該配方中纖維素粉。 ★原因是：→該培養(yǎng)基中雖然含有其他碳源（酵母膏），但含量很少，培養(yǎng)基中的主要碳源還是 纖維素；在此種培養(yǎng)基中只有能分解纖維素的微生物才能大量繁殖。7H2O溶解后加蒸餾水定容至1000mLNaNO31gKH2PO4KCL酵母膏MgSO4（2）選擇培養(yǎng)：→★目的：→增加纖維素分解菌的濃度（即：濃縮所需要微生物）。如：樹林中多年落葉形成的腐殖土等。 ★在含有纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅時，能分解纖維素的微生物形成的菌落周圍由于纖維素被分解，因此不呈紅色，而是形成透明圈。（2）纖維素酶：→是一種復合酶，包括：C1酶（外切酶）、CX酶（內(nèi)切酶）和葡萄糖苷酶。（2）方法：→在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅，若酚紅指示劑變紅，則說明該微生物能分解尿素。2. 鑒定能分解尿素的微生物的方法：→脲酶檢測法。③每克土壤樣品中菌落數(shù)＝菌落數(shù) 稀釋倍數(shù) 247。①要設置對照和重復，每個稀釋度土壤懸液至少設置3個重復。 ④★1mL土壤懸液中菌體總數(shù) = 4106每小格中的菌體數(shù)土壤懸液稀釋倍數(shù)。 ②土壤微生物的稀釋要求：→以達到每小格內(nèi)有5～10個菌體為宜。（1）直接計數(shù)法：→用血球計數(shù)板制片后在顯微鏡下觀察計數(shù)。（4）若同一稀釋度的3個重復的菌落數(shù)相差懸殊，表明試驗不精確，需要重新實驗。（2）若空白對照組培養(yǎng)基上有菌落生長，原因可能是被固氮微生物污染或培養(yǎng)基中混入了其他氮源。4. 結果分析與評價：→ ★同一土樣的重復組統(tǒng)計的結果應相近。③★統(tǒng)計的菌落數(shù)比活菌的實際數(shù)目少。①★計算時應選擇菌落數(shù)為30～300的平板上進行計數(shù)，要計算平均數(shù)。（5）培養(yǎng)與觀察：→將已標明培養(yǎng)基種類、培養(yǎng)日期和樣品稀釋度的培養(yǎng)皿，倒置放在37℃的恒溫箱培養(yǎng)1～2d，觀察細菌菌落。②實驗時要對培養(yǎng)皿作好標記。 ①每次吸取土壤懸液前都要將土壤懸液充分振蕩，混合均勻；每一步都應做到無菌操作。（4）接種：→采用（稀釋）涂布平板法。 ④分離不同的微生物采用不同稀釋度（因不同微生物在土壤中含量不同）。依此類推，配制10－10－10－10－8g/mL的等濃度的土壤懸液。②（10－2g/mL）1號試管，配制成10－3g/mL的土壤懸液。（3）土壤樣品稀釋：→制備不同稀釋度的土壤懸液。KH2PO4Na2HPO4MgSO4【注意】→取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的信封在使用前都要滅菌。（1）土壤取樣：→從肥沃、濕潤的土壤中取樣。（2）篩選方法：→用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基培養(yǎng)土壤微生物進行篩選。4. 挑取大腸桿菌菌落多次進行接種培養(yǎng)可以純化大腸桿菌菌種。2. 分離純化大腸桿菌的接種方法：→劃線平板法和稀釋涂布平板法。酶 ②泡菜壇內(nèi)表面白色菌膜是由酵母菌形成的。（3）檢測果醋是否制作成功，并對發(fā)酵液（果醋）進行過濾、滅菌：【檢測方法】→①pH測定、②觀察醋酸菌膜形成、③聞酸味、品嘗、鏡檢等。（3）反應式：C6H12O6 ＋2O2 2 CH3 COOH ＋2CO2＋2 H2O＋能量2. 利用果酒制作果醋的方法步驟
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