各種疾病的分子基礎(chǔ)(參考版)
2025-03-25 05:03本頁面
【正文】 所以若在引子的 3‘端加入一個雙去氧鹼基就終止了反應(yīng) 加 ddNTP的位置就是要突變所在 產(chǎn)物跑自動定序分析 Minisequencing反應(yīng)產(chǎn)生一個 peak就是homozygote (同型合子，純合 子 ) ， 2個peak就是 heterozygote (異型合子，雜合子 ) 初步篩選突變比較常用的是 Sequencing ， SSCP及 DHPLC 定序是目前最好的方法 趨勢是自動化的過程，包括自動化的資料未來分析解讀及自動 化的樣本操作 關(guān)鍵技術(shù)是 Microarray Sequencing 分子診斷只是將 DNA序列上可能的異?；蛲蛔兣c正常的比對而已 異常及突變太複雜，目前不可能將所有人類的異常突變都點(diǎn)在一片晶片上 。C，共 45回 會形成雜合雙鏈。 如果溫度過低沒有發(fā)生部份變性的情況， DNA與層析管柱結(jié)合的能力取決於 DNA的長度 片段越大在管柱中留置的時間就愈長 雜合雙鏈產(chǎn)物的產(chǎn)生方法 將 PCR 產(chǎn)物野生型和突變型以約 1 : 1混合 95176。 Mbol辨識的序列 。 設(shè)計三種引子，第一種是針對正?；蛟O(shè)計的短引子，第二種是針對突變基因設(shè)計的長引子，第三種引子則是共用的互補(bǔ)引子短片段者為正常型，為抗緊迫豬，而僅有長片段者為突變型，為緊迫豬，同時具有長和短兩個片段者則為雜合型，各具有一正常和突變基因，外表型表現(xiàn)與抗緊迫豬同 ACRS (Amplified Created restriction site) 偵測鹼基變異沒有產(chǎn)生限制酶切位時 設(shè)計一個與正常有一、三個鹼基差異的 mismatch primer 此 primer設(shè)計在變異的鹼基附近 PCR後，其產(chǎn)物在 primer上的 mismatch鹼基及鄰近序列合併變異的鹼基即可產(chǎn)生限制酶的切位 設(shè)計一個 mismatch的 primer來產(chǎn)生二種不一樣的PCR 產(chǎn)物，一種產(chǎn)物會被特定的限制酶切，另一種不會被切 Mismatch base的互補(bǔ)關(guān)係較不穩(wěn)定，設(shè)計不佳沒有產(chǎn)物，若溫度調(diào)降雜 bands多，特異性不足 應(yīng)用 ACRS時， Primer的設(shè)計就必須特別注意 base互補(bǔ)的穩(wěn)定性。各種疾病的分子基礎(chǔ) ?檢測 DNA質(zhì)變的方法 ?單基因突變的檢測方法 物理特性 DGGE變性梯度明膠電泳（ denaturing gradient gel electrophoresis PCR產(chǎn)物跑電泳的分析方法 瓊脂凝膠電 泳：可知大略大小、但長度差異小無法分別 聚丙烯醯胺凝膠電泳：差一兩個鹼基可分開 電泳的速度與片段大小有關(guān)，跟 DNA 的組成及序列無關(guān)，不能分辨鹼基之間是否有突變 DNA雙鏈上發(fā)生部分的解鏈，會使電泳速度大大減慢 DNA被變性的難易程度與 DNA的長度及組成排列有關(guān) 片段長及 CGrich需較高的溫度 DGGE的基本原理 雙鏈的 DNA部分解鏈成單鏈時，在凝膠電泳速度會大大減慢 有鹼基發(fā)生突變時，正常與突變跑出來的速
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