【正文】 。 ? 與其它蛋白質(zhì)一起裝配成為功能單位，血紅蛋白； ? 與某些離子結(jié)合而激活，鈣調(diào)蛋白 。 ? 除去某些保護(hù) /抑制性片段而激活， Dorsal。 減數(shù)成熟分裂后這些 mRNA迅速加上一個(gè)長(zhǎng)的 polyA,開(kāi)始翻譯。 三、翻譯和翻譯后調(diào)控的機(jī)制 Poly(A)對(duì)翻譯的調(diào)控： 在小鼠的未成熟卵母細(xì)胞質(zhì)中可以翻譯的 mRNA具有較長(zhǎng)的 poly(A), 減數(shù)成熟分裂后 poly(A)降解，翻譯終止。帶長(zhǎng) polyA的 mRNA具翻譯活性 ? 翻譯效率的調(diào)控： 如將海膽卵母細(xì)胞裂解液的 pH從自然狀態(tài)下的 高到 （ 受精后自然狀態(tài)下的 pH） ,蛋白質(zhì)合成量急劇增加。如海膽未受精卵的 組蛋白 mRNA定位于原核中，受精后原核破裂， mRNA才能進(jìn)入胞質(zhì)開(kāi)始翻譯。 ? 5’ Cap（ 7甲基鳥(niǎo)苷酸）的調(diào)控： 如某些種類(lèi) (蛾 )， 其卵中的部分 mRNA的 5`鳥(niǎo)苷酸在受精后才甲基化，然后開(kāi)始翻譯。 β 珠蛋白 RNA的 3’UTR中含有 3個(gè) C富集區(qū)，穩(wěn)定，半衰期 17h 一種生長(zhǎng)因子 mRNA的半壽期不超過(guò) 30min mRNA降解性能的差異可以影響細(xì)胞的功能 Cfos mRNA 5’UTR coding sequence 3’UTR 成纖維細(xì)胞 腫瘤細(xì)胞 AU富集區(qū) cfos基因編碼正常成纖維細(xì)胞分裂必需的一種蛋白質(zhì) 3. 激素對(duì)特定 mRNA穩(wěn)定性的影響 如 Prolactin（泌乳刺激素） 僅提高牛的 casein（酪蛋白） 基因轉(zhuǎn)錄水平 2倍，提高其 mRNA壽命 25倍，使mRNA更多次的翻譯。 第二節(jié) 翻譯和翻譯后 的調(diào)控 1. 翻譯過(guò)程 （ mRNA → 特異多肽鏈的合成 ） AUG 氨基酰 tRNA與核糖體結(jié)合； aa離開(kāi) tRNA， aa之間肽鍵、縮合；核糖體沿 mRNA移動(dòng)； UAG UAA UGA 一、翻譯水平的調(diào)控 3個(gè)階段 2. mRNA壽命的不同對(duì)蛋白質(zhì)合成的調(diào)控 —— 通過(guò) mRNA的選擇性降解和 mRNA穩(wěn)定性不同調(diào)控蛋白質(zhì)的合成 rabbit 3’ 不同基因的 mRNA的半衰期不同，主要受其 3`UTR控制。 反式作用元件 （人癌細(xì)胞） ?特異性核蛋白因子：可識(shí)別發(fā)生裂解和進(jìn)行多聚腺苷酸化的順式因子； ?poly（ A）聚合酶：用于合成多聚腺苷酸尾； ?裂解因子 I和 II： mRNA前體的裂解酶； ?裂解刺激因子：可顯著提高裂解反應(yīng)的效率 （三）、 mRNA向核外的運(yùn)輸 ?推測(cè)： RNA在核基質(zhì)內(nèi)完成轉(zhuǎn)錄和加工，然后將mRNA運(yùn)輸?shù)胶四た?，由此運(yùn)出核外，但機(jī)制尚不十分清楚。 nRNA （一）、同一基因的初始轉(zhuǎn)錄物（ nRNA） 經(jīng)選擇性拼接可產(chǎn)生不同的成熟 RNA 原肌球蛋白基因 二、 RNA加工水平的調(diào)控 α原肌球蛋白基因 nRNA mRNA B淋巴細(xì)胞的 DNA，發(fā)生重排 生殖細(xì)胞的DNA 重鏈可變區(qū)（抗原結(jié)合區(qū)）在淋巴細(xì)胞形成過(guò)程中，發(fā)生基因重 排（ DNA水平） 重鏈恒定區(qū)發(fā)生分子轉(zhuǎn)換，該模式通過(guò) RNA加工完成 前體 RNA μ區(qū) δ區(qū) IgM IgD 相同基因在不同發(fā)育時(shí)期或不同組 織細(xì)胞中拼接不同，合成不同的蛋白質(zhì) 降鈣素 /神經(jīng)多肽 CGRP mRNA前體 果蠅性別表型的決定事件，通過(guò) 3個(gè)主要性別決定基因 RNA的不同拼接模式，引起差異基因表達(dá) 選擇性 RNA加工與性別決定 （二）、 RNA 3’末端的決定 絕大多數(shù)真核生物 nRNA在剪接之前，先進(jìn)行 3’末端斷裂和多聚腺苷酸化加工，這種加工由順式和反式作用元件調(diào)控。 Ect En/mes 加工后的 RNA主要存在于外胚層中。 ?當(dāng) 外來(lái)抗原 與 淋巴結(jié) 或 脾 中的淋巴細(xì)胞膜上抗原受體結(jié)合后通過(guò)信號(hào)傳導(dǎo)調(diào)控基因表達(dá)，使細(xì)胞分裂和進(jìn)一步分化。 ?在與抗原接觸之前，處于休止期的 B淋巴細(xì)胞就合成免疫球蛋白分子，但并不分泌。 ?能夠與激素受體蛋白特異性結(jié)合的 DNA序列稱(chēng)為激素效應(yīng)元件，它們既可以是增強(qiáng)子，也可以是啟動(dòng)子。 ?具有轉(zhuǎn)錄因子活性的類(lèi)固醇激素特異性受體以非活性狀態(tài)存在時(shí)與一種熱體克蛋白結(jié)合，當(dāng)激素與受體蛋白結(jié)合后熱體克蛋白脫離，同時(shí)受體構(gòu)象發(fā)生改變。 (四 )激素應(yīng)答成分 ?在發(fā)育過(guò)程中經(jīng)常出現(xiàn)基因表達(dá)的協(xié)同調(diào)節(jié)現(xiàn)象。 ?通用轉(zhuǎn)錄因子 ：指與啟動(dòng)子 TATA框序列結(jié)合的蛋白質(zhì)，他們與 RNA聚合酶 II共同裝配成為轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物，以啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄。通過(guò)相互作用使任何一種細(xì)胞中只有很少的一部分啟動(dòng)子發(fā)生轉(zhuǎn)錄。 脂肪體 卵巢組織 （三）轉(zhuǎn)錄因子 ?轉(zhuǎn)錄因子是 基因調(diào)控的反式作用因子 ，是能與啟動(dòng)子和增強(qiáng)子結(jié)合的蛋白質(zhì)。 ?說(shuō)明 卵黃蛋白基因有兩個(gè)增強(qiáng)子 ，而且都位于 5’末端，分別負(fù)責(zé)在卵巢和在脂肪體中的轉(zhuǎn)錄，使兩個(gè)基因在兩種細(xì)胞中正常轉(zhuǎn)錄。 ?卵黃蛋白基因僅在成體的雌性果蠅中表達(dá)。 ?在卵巢和脂肪體中卵黃蛋白基因都轉(zhuǎn)錄，但是他們能用限制性?xún)?nèi)切酶分解，在共同的 5’末端分開(kāi)。 受體細(xì)胞 外分泌蛋白基因 5’末端旁序列 + cat 內(nèi)分泌蛋白基因 5’末端旁序列 + cat 卵巢細(xì)胞 不表達(dá) 不表達(dá) 分泌胰島素 的胰腺細(xì)胞系 不表達(dá) 表達(dá) 產(chǎn)生外分泌蛋 白的胰腺細(xì)胞系 表達(dá) 不表達(dá) (4)卵黃蛋白增強(qiáng)子 ?果蠅卵黃蛋白是在雌性成體果蠅的特殊細(xì)胞中才大量合成的一種蛋白。 (3)胰腺增強(qiáng)子 ? Walker等 (1983)分別構(gòu)建這些基因 5’末端旁序列和 cat的重組基因，再將不同的重組基因分別轉(zhuǎn)人 3種受體細(xì)胞 ： ?①不產(chǎn)生胰島素和胰凝乳蛋白酶的卵巢細(xì)胞； ?②分泌胰島素的胰腺細(xì)胞系； ?③一種產(chǎn)生外分泌蛋白的胰腺細(xì)胞系。 ?利用報(bào)道基因可對(duì)某一特定增強(qiáng)子的功能進(jìn)行研究。 (3)胰腺增強(qiáng)子 ?有時(shí)基因的活性在不同類(lèi)型的相鄰細(xì)胞中由不同的增強(qiáng)子所調(diào)控。如果 缺失此增強(qiáng)子區(qū)將引起所有 β珠蛋白基因家族的基因沉默 。 ?其中一種增強(qiáng)子位子 β珠蛋白基因的第三個(gè)內(nèi)含子序列內(nèi)，其作用使 β珠蛋白基因的轉(zhuǎn)錄只能在紅細(xì)跑發(fā)生 。 ?通常 γ珠蛋白基因在 人胚胎時(shí)期轉(zhuǎn)錄 ，如果把含有 β珠蛋白基因的時(shí)間特異性增強(qiáng)子的 DNA片段移到 γ珠蛋白基因的附近，在 β珠蛋白基因的時(shí)間特異性增強(qiáng)子的作用下，γ珠蛋白基因 可在成體中表達(dá) 。兩棲類(lèi)的這種增強(qiáng)子位于 MBT基因閱讀框 5’末端上游約 700bp。 ?在 兩棲類(lèi) 胚胎發(fā)育中存在最典型的基因活性的時(shí)間開(kāi)關(guān)，即 囊胚中期轉(zhuǎn)換 (MBT)。 ?根據(jù)增強(qiáng)子的 功能特征 可以將其分為以下幾類(lèi)。 增強(qiáng)子的分類(lèi) ?同一增強(qiáng)子在有的細(xì)胞中是 順式調(diào)控元件 ，但在其他細(xì)胞中可能是 沉默子 ，這是 由細(xì)胞中其他轉(zhuǎn)錄因子決定 的。 ?有一類(lèi)增強(qiáng)子對(duì)基因的轉(zhuǎn)錄起抑制作用，稱(chēng)為 沉默子(suencer)。 ?增強(qiáng)子的效應(yīng)很明顯，一般能使基因轉(zhuǎn)錄頻率增加 10～200倍，有的甚至可以高達(dá)上千倍。增強(qiáng)子是通過(guò)啟動(dòng)子來(lái)增加轉(zhuǎn)錄的。 ? RNA聚合酶 Ⅰ 和 RNA聚合酶 Ⅲ 分別負(fù)責(zé) 18S、 28S核糖體RNA和 5S核糖體 RNA， tRNA基因的轉(zhuǎn)錄，也需要多種蛋白因子參與，這些轉(zhuǎn)錄因子也必須與啟動(dòng)子結(jié)合。 ?已經(jīng)經(jīng)過(guò)鑒定的 普通轉(zhuǎn)錄因子 有 TFⅡ D、 TFⅡ B、 TFⅡ F、TFⅡ A等。 ?從不同動(dòng)物細(xì)胞，甚至從酵母細(xì)胞分離的基本轉(zhuǎn)錄因子具有相似的活性。 ?其中 RNA聚合酶 Ⅱ 負(fù)責(zé)作用于多種基因的轉(zhuǎn)錄。在轉(zhuǎn)錄開(kāi)始之前，首先要形成 RNA聚合酶和啟動(dòng)子的 轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物 。 ? TATA框的主要作用 ：是使轉(zhuǎn)錄精確地從起始位點(diǎn)開(kāi)始，其他的上游啟動(dòng)子元件： 主要調(diào)控轉(zhuǎn)錄起始頻率和維持基因轉(zhuǎn)錄，特別是 CAAT框的作用相對(duì)較大。一個(gè)保守性較高且富含 TA的序列，又稱(chēng)為 TATA框 ，位于 轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游大約 30bp處 。能被 RNA聚合酶 Ⅱ 識(shí)別和結(jié)合，對(duì)于 決定基因轉(zhuǎn)錄起始 和保證 DNA精確 ， 有效地轉(zhuǎn)錄 具有極其重要作用。 ?反式調(diào)節(jié)蛋白是 可溶性的分子 ，包括具有調(diào)控作用的 蛋白因子 和 RNA，它們可 作用于鄰近基因或其他基因 。 ⑩ （二）啟動(dòng)子和增強(qiáng)子 ?真核生物基因的轉(zhuǎn)錄起始和表達(dá)的調(diào)控依賴(lài)于 兩類(lèi)調(diào)控元件 的相互作用，一類(lèi)是 順式調(diào)節(jié)子 ，另一類(lèi)是 反式調(diào)