感染性疾病病原的診斷策略(講座)(參考版)
2025-01-18 04:14本頁面
【正文】 （五）基因組測序現(xiàn)今的基因組測序大致可以分為初測、拼接、注釋等幾個(gè)重要的步驟，通過這些步驟達(dá)到掌握病原體基因組全部遺傳信息的目的，自從第一個(gè)病原體基因組被公開以來，陸續(xù)有很多的病原體基因組被相繼公開，由于基因組的唯一性，因此它被視作當(dāng)今診斷的基因標(biāo)準(zhǔn)，但是，基因組測序技術(shù)屬于全測序技術(shù)，時(shí)間的要求和成本的要求都無法滿足現(xiàn)今高通量、快速的診斷要求，而且，公開的病原體的基因組畢竟有限，因此，在短時(shí)間內(nèi)基因組測序技術(shù)很難應(yīng)用于臨床實(shí)踐，但是，我們相信，隨著測序技術(shù)的不斷發(fā)展，效率的不斷提高，它最終將成為一種方便可行的檢測手段。上圖給我們展示的是基于16SRDNA文庫檢測技術(shù)的試驗(yàn)與策略。（四）基于測序的方法至今為止，根據(jù)分子生物學(xué)的理論，病原基因組承載了病原基因所有的遺傳信息，所以至少在如今的技術(shù)條件下分析基因組的方法就是病原體診斷的基因標(biāo)準(zhǔn)，當(dāng)然基因組雖然是當(dāng)前條件下診斷的基因標(biāo)準(zhǔn)，可是基因組所含的信息量相當(dāng)龐大，其中很多的信息對(duì)于診斷的意義并不大，而且分析基因組需要依賴具有海量分析、存儲(chǔ)、運(yùn)算能力的設(shè)備，這就大大提高了檢測的成本和時(shí)間，所以，為了解決這些問題，我們就運(yùn)用了部分測序技術(shù)作為折中的辦法，通過理選出一些含有大量種序信息的特異性基因，為病人盡心測序，以達(dá)到估量總體的目的，這個(gè)方法中最具代表性的就細(xì)菌16SRDNA文庫測序技術(shù)，運(yùn)用這個(gè)技術(shù)可以達(dá)到菌種檢測的目的，細(xì)菌16SRDNA測序技術(shù)具有以下幾個(gè)優(yōu)勢，首先細(xì)菌16SRDNA文庫技術(shù)包含了大量的細(xì)菌種序信息，在這個(gè)基因中包含有保守區(qū)域，方便體外進(jìn)行無色記憶，在飽受區(qū)域之間包含了許多高倍區(qū)域，這就方便了在測序過程中進(jìn)行區(qū)別、對(duì)比和種序分析，體外擴(kuò)增的產(chǎn)物多為DNA短鏈，是當(dāng)今測序技術(shù)的最適程度，這樣就避免了基因組測序過程中的后期拼接過程，減少了數(shù)據(jù)量和工作量，大大降低了經(jīng)濟(jì)成本。（三）基于病原體特異性基因的方法我們知道，不同的病原體根據(jù)其種屬的不同，攜帶有自身的特異性基因，這些基因可以將這些病原體與其他的類別區(qū)別開來，我們通過一些特定的方法，將這些特異性序列在體外進(jìn)行擴(kuò)增或者合成，并且，將這些人工合成、可以與病原體特異性互補(bǔ)結(jié)合的DNA片段運(yùn)用放射性物質(zhì)、酶類物質(zhì)或生物素標(biāo)記，等到發(fā)生結(jié)合之后，就可以通過標(biāo)記物質(zhì)檢測到合成的存在，這有點(diǎn)類似于我們前面所講到的酶標(biāo)抗體，只是前者標(biāo)記的是免疫球蛋白，而后者標(biāo)記的是DNA分子。因此，針對(duì)基因型的方法是比較單一的，基因表現(xiàn)型的方法雖然途徑很多，但是能檢測的病原體十分有限，而基于基因組的方法雖然手段比較少，但是可檢測的病原體的數(shù)量卻非常之多，從這一點(diǎn)上來看，基于基因組的方法是一種非常有前途和潛力的方法。對(duì)我們有有利的一面和不利的一面，對(duì)于難以得到的可以用其他物種之間代為堅(jiān)持 我們用意得到的用于檢測感染，反過來不利的因素是假陽性的結(jié)果，只有一個(gè)是明顯的增高進(jìn)行明確的診斷。（四）基于免疫特征的方法存在的優(yōu)缺點(diǎn)首先，在大部分的情況下免疫學(xué)方法所堅(jiān)持的標(biāo)準(zhǔn)是人的血清和尿液；來樣比較方便而且不用等待病原體生化反應(yīng)，通常不需要培養(yǎng)的過程了。首先我們將已知抗原同過化學(xué)方法在固相載體表面。因此叫夾心法；用于檢測病人血清中或ｉ其他標(biāo)
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