【正文】 這樣就能通過(guò)基因檢測(cè)對(duì)疾病進(jìn)行基因診斷和基因治療。芯片技術(shù)中雜交測(cè)序技術(shù)是一種新的高效快速測(cè)序方法。與原位合成法相比點(diǎn)樣法較簡(jiǎn)單，只需將預(yù)先制備好的寡核苷酸或 cDNA等樣品通過(guò)自動(dòng)點(diǎn)樣裝置點(diǎn)于經(jīng)特殊處理的玻離片或其它材料上即可。134（一）、生物芯片技術(shù)的操作要點(diǎn)v 1． 芯片制備 v 芯片種類(lèi)較多，制備方法也不盡相同，但基本上可分為兩大類(lèi)：一類(lèi)是原位合成；一種是直接點(diǎn)樣。在醫(yī)藥衛(wèi)生和生物化學(xué)中得到廣泛的應(yīng)用，蛋白質(zhì)、糖類(lèi)、核酸、氨基酸、生物堿、類(lèi)固醇和類(lèi)脂等大分子以及高分子聚合物度能用 HPLC測(cè)定。 HPLC)是用特制微粒（10um）充填的層析柱作為固定相，通過(guò)高壓使液體流動(dòng)相快速通過(guò)層析柱而達(dá)到快速有效分離液相中各種物質(zhì)的層析技術(shù)。制備型和分析型超速離心機(jī)的主要區(qū)別在于分析型有附設(shè)的光學(xué)系統(tǒng)，可以在離心分離過(guò)程中通過(guò)光學(xué)系統(tǒng)，將大分子的沉降行為以掃描或照相的形式記錄下來(lái)，有的有觀察鏡，在可見(jiàn)光波段內(nèi)直接觀察顆粒的沉降行為。131(二 ) 離心機(jī)的應(yīng)用v 目前在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域內(nèi)常用的離心機(jī)種類(lèi)繁多，按其離心轉(zhuǎn)子能到達(dá)最高轉(zhuǎn)速分類(lèi)有：低速離心機(jī)（在 6 000rpm以下），高速離心機(jī)（在 25 000rpm以下），超速離心機(jī)（在 30 000rpm以上）。顆粒除受到離心力外，還受到顆粒在介質(zhì)中移動(dòng)時(shí)的摩擦阻力、與離心力方向相反的浮力，顆粒處于重力場(chǎng)之下的重力和與重力方向相反的浮力。每個(gè)顆粒都有一定大小、形狀、密度和質(zhì)量。130(一 ) 離心分離的原理v 需離心分離的生物樣品，常預(yù)先制成懸浮液。3．袋式分析儀．袋式分析儀128袋式分析儀的試劑包 129一、離心技術(shù)v 離心機(jī)是利用物質(zhì)的高速旋轉(zhuǎn)時(shí)產(chǎn)生強(qiáng)大的離心力，使置于該旋轉(zhuǎn)體中的懸浮顆粒發(fā)生沉降或漂浮，從而使某些顆粒達(dá)到濃縮或與其他顆粒分離的目的。v 袋式試劑包由透明的雙層塑料薄膜制成，每袋均有不同的測(cè)定項(xiàng)目英文縮寫(xiě)標(biāo)記。其層數(shù)視所采用的分析方法而定，干片的大小與一枚郵票大致相同， 指示劑層呈現(xiàn)的顏色深淺隨待測(cè)物的濃度變化而變化。 v 工作原理 ：應(yīng)用涂層技術(shù)制作膠片基礎(chǔ)的感光乳劑，將其均勻呈層狀地涂布在支持層或下層上。血漿中的待測(cè)物與干試劑相作用而呈色并顯示檢測(cè)結(jié)果，全部過(guò)程均在接受密碼信號(hào)后的微機(jī)控制下完成。v 首先通過(guò)玻璃纖維層，紅、白細(xì)胞被阻截，血漿被過(guò)濾到血漿分離區(qū)，另有輔助試劑層，當(dāng)血漿層中的血漿溶解滲透輔助試劑層后，通過(guò)轉(zhuǎn)移介質(zhì)層將血漿運(yùn)送到反應(yīng)區(qū)的底部。試劑條日常貯存在密封的盒內(nèi) ,每條的表面貼有一層錫箔 ,使用時(shí)再揭去。v ② 血漿分離區(qū)： 位于正面下部并標(biāo)以紅色 ,由玻璃纖維和紙層構(gòu)成。 121（二）儀器的類(lèi)型及特點(diǎn)v 一種是使用試條的反射光度法系統(tǒng)（reflotron system）；v 另一種是采用膠片涂層技術(shù)的化學(xué)分析系統(tǒng)（ vitros chemistry system）， v 采用的是干試劑包進(jìn)行臨床化學(xué)分析，常稱為袋式分析儀。（一）工作原理120v 優(yōu)點(diǎn)： 它完全脫離了傳統(tǒng)的采用試管和吸管的分析方法，儀器操作簡(jiǎn)便，測(cè)定速度快，靈敏度和準(zhǔn)確度與典型的分立式儀器相近。 它不同于大家所熟知的在反應(yīng)容器中加入液態(tài)試劑和樣品 ,混合后發(fā)生物化學(xué)學(xué)反應(yīng)的 “濕化學(xué) ”(wet chemistry), 所以 “干化學(xué) ”是相對(duì)于經(jīng)典的 “濕化學(xué) ”而言。（五）檢測(cè)成本　　 反應(yīng)杯類(lèi)型和壽命決定其耗費(fèi)，最小樣品量影響試劑用量，最小反應(yīng)杯液量可決定樣品和試劑用量，以及保養(yǎng)維護(hù)消耗。 1164. 檢測(cè)范圍 　 能檢測(cè)吸光度的最高值及其準(zhǔn)確度決定檢測(cè)上限； 檢測(cè)靈敏度則為能辨別待測(cè)物最小濃度差的能力 ， 有時(shí)與最低檢出濃度一致，但后者主要取決于方法靈敏度。 2． 檢測(cè)時(shí)間 　分析儀通?？蓹z測(cè)最長(zhǎng)10min的反應(yīng)，個(gè)別最長(zhǎng)能檢測(cè) 1522min甚至更長(zhǎng)。 114（二）精密度　　 以上影響準(zhǔn)確度的因素同樣可因其制作不精而使工作穩(wěn)定性較差，造成精密度不佳，吸樣精度以及樣品針、試劑針、攪拌棒、反應(yīng)杯的交叉污染是影響精密度的主要因素，有關(guān)分析儀的資料中通常會(huì)介紹防止和減少交叉污染的措施，主要是其沖洗系統(tǒng)各有特點(diǎn)，沖洗效果可能不同。有關(guān)這些準(zhǔn)確度的指標(biāo)通常無(wú)具體說(shuō)明，但可以通過(guò)相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)。一旦在急診樣品位置上放置了樣品，并設(shè)定了急診檢驗(yàn)的項(xiàng)目，分析儀就會(huì)在常規(guī)樣品的測(cè)定過(guò)程中，優(yōu)先安排對(duì)該樣品進(jìn)行分析測(cè)定。 一般在開(kāi)始畫(huà)面還可選擇： ① 是否需要對(duì)結(jié)果超過(guò)設(shè)定的線性范圍、超過(guò)允許的吸光度上限等的樣品自動(dòng)進(jìn)行重復(fù)測(cè)定； ② 測(cè)定結(jié)果是否需要按照已設(shè)定的打印格式自動(dòng)打印與測(cè)定結(jié)果有關(guān)的選項(xiàng)。（ 3）批量輸入 ：對(duì)于有連續(xù)相同測(cè)定項(xiàng)目的樣品，可使用批量輸入的方法。108（四）檢測(cè)項(xiàng)目的輸入與測(cè)定 1．項(xiàng)目輸入（ 1）逐項(xiàng)輸入 ：每份樣品可以任選分析儀中已設(shè)置的且試劑室內(nèi)已預(yù)置試劑的項(xiàng)目中的一項(xiàng)、幾項(xiàng)或全部項(xiàng)目。如果判為 失控 則應(yīng)從試劑、質(zhì)控品、校準(zhǔn)品和分析儀等幾方面尋找原因。 106 所有分析儀都已設(shè)定或固化了有關(guān)質(zhì)控的分析程序：① 設(shè)定有關(guān) 質(zhì)控參數(shù) ，如每個(gè)質(zhì)控品的批號(hào)、靶值和標(biāo)準(zhǔn)差；② 選擇質(zhì)控圖的方式，如均值－標(biāo)準(zhǔn)差質(zhì)控圖；③ 質(zhì)控結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析， 分析儀會(huì)保存每次測(cè)定的質(zhì)控結(jié)果，并對(duì)其進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，以列表及質(zhì)控圖的形式在屏幕上顯示。關(guān)于 分析儀的批測(cè)定 ，是指一批樣品從開(kāi)始測(cè)定到完成測(cè)定后停止的整個(gè)過(guò)程。 104如有下列情況發(fā)生時(shí)，必須進(jìn)行校準(zhǔn)： ① 改變?cè)噭┑姆N類(lèi)或批號(hào)； ② 儀器或者檢驗(yàn)系統(tǒng)進(jìn)行一次大的預(yù)防性維護(hù) 或者更換了重要部件； ③ 質(zhì)控反映出異常的趨勢(shì)或偏移，或者超出了 實(shí)驗(yàn)室規(guī)定的接受限。執(zhí)行校準(zhǔn)程序，檢測(cè)得到該校準(zhǔn)品的吸光度值，再根據(jù)校準(zhǔn)濃度計(jì)算校準(zhǔn)系數(shù)（ K=校準(zhǔn)品濃度 /校準(zhǔn)品吸光度）。 102（二）校準(zhǔn) 分析儀在樣品分析之前都要對(duì)該分析項(xiàng)目進(jìn)行 校準(zhǔn) （也稱 定標(biāo) ），得出一個(gè)該項(xiàng)目的 校準(zhǔn)系數(shù)（ K） 。（ 2）確認(rèn)要進(jìn)行校準(zhǔn)的項(xiàng)目，確認(rèn)要做的質(zhì)控批號(hào)及項(xiàng)目，以及校準(zhǔn)品、質(zhì)控品是否足夠。v （ 2）確定第二試劑加入時(shí)間：根據(jù)通用參數(shù)，應(yīng)選擇 .v (3)確定各個(gè)吸光度選擇點(diǎn) :由于第二試劑的加入點(diǎn)是 ,換算成監(jiān)測(cè)周期為第 16~17之間,加上延滯時(shí)間 2min,則在第 24監(jiān)測(cè)點(diǎn)為第一點(diǎn)吸光度 ,并連續(xù)監(jiān)測(cè)量 24~31監(jiān)測(cè)點(diǎn) .98v 計(jì)算 K值 :根據(jù)樣品量度 10ul,第一試劑200ul,第二試劑 100ul代入計(jì)算公式 ,則 K=也可以采用肌酸激酶的校準(zhǔn)品 ,執(zhí)行校準(zhǔn)程序來(lái)得到校準(zhǔn)方程 :K=校準(zhǔn)品濃度 /校準(zhǔn)品吸光度99第四節(jié)　自動(dòng)生化分析儀 工作過(guò)程和操作方法 一、工作過(guò)程 在測(cè)定過(guò)程中所有機(jī)械步驟均由微處理器根據(jù)已設(shè)定的程序（ procedure） 進(jìn)行工作。 97根據(jù)以上條件進(jìn)行參數(shù)設(shè)置v （ 1）按比例減少樣品和試劑的劑量，使反應(yīng)總體積在 180~350ul范圍內(nèi)。10． 總反應(yīng)容量 （ total reacting volume） 一般 180350μl ， 個(gè)別儀器能減少至 120μl 。94 （ response direction） 7． 樣品量 （ sampling volume） 常量、減量和增量。生化分析儀一般另外留一些檢測(cè)項(xiàng)目的空白通道，由用戶自己設(shè)定分析參數(shù)。 92第三節(jié) 分析參數(shù) (analysis　 parameter） 設(shè)置 封閉式生化分析儀： 各種測(cè)定項(xiàng)目的 分析參數(shù)大部分也已設(shè)計(jì)好，存于磁盤(pán)中，供用戶使用。一些代謝物酶法測(cè)定的項(xiàng)目如：脲酶偶聯(lián)法測(cè)定尿素等，也可用連續(xù)監(jiān)測(cè)法。 892．二點(diǎn)速率法　 苦味酸法測(cè)定肌酐采用此法。該法須做 多點(diǎn)校準(zhǔn) ，再經(jīng) 非線性回歸 ，求出抗原或抗體的含量。一般來(lái)說(shuō)以使用 校準(zhǔn) K值 為好， 但必須有兩個(gè)先決條件： ① 必須使用配套的試劑； ② 必須使用配套的高質(zhì)量的校準(zhǔn)品，該校準(zhǔn)品應(yīng)具有 溯源性。86校準(zhǔn) K值注意事項(xiàng)