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垂直板聚丙烯酰胺凝膠連續(xù)電泳分離乳酸脫氫酶同工酶(參考版)

2025-01-11 06:51本頁面
  

【正文】 。 ? 每班請一位同學配制脫色液 1000 mL,每兩組使用 50 mL(染色、脫色均為兩塊膠同時進行)。 凝膠 玻璃板 玻璃紙 30 其他注意事項 ? 愛惜電泳裝置,輕拿輕放,玻璃板必須用海綿清洗,避免產(chǎn)生劃痕,損壞需賠償。 加入脫色液終止酶促反應 , 搖動 3~5 min, 凝膠底色脫去直至背景清亮 , 數(shù)碼相機照相 。 電極導線 安全蓋 上液槽 下液槽 橡膠封條 彈簧夾 冷卻水口 28 五 、 活性染色 , 脫色 , 照相: 電泳結(jié)束后 , 將凝膠板取下 , 用薄尺子輕輕將玻璃板和氧化鋁板撬開 , 在凝膠下部切角標注凝膠方位 ,然后將帶有凝膠的板反扣過來 , 膠面朝下 , 用尺子小心地將凝膠的一角剝離 , 使凝膠掉入裝有活性染色液的培養(yǎng)皿中 。注意 每種樣品使用 同一支進樣器 ,以免樣品相互污染。將印有樣品槽模板形狀的塑料片貼在玻璃板上,使其與樣品槽重合(加樣后電泳前將塑料片取下),小心拔出樣品槽模板。 23 制備連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠電泳凝膠的配方 (兩組) 凝膠溶液組成 體積 TrisGly緩沖液 5 mL 30%凝膠貯液 mL 重蒸水(含 TEMED) mL 10%AP 60μL 24 凝膠板 電泳槽本體 三、準備電泳: 將凝膠板安裝在電泳槽本體上 將凝膠板從制膠裝置上取下,安裝到電泳槽本體上,使凹形氧化鋁板緊貼在本體的密封橡膠封條上,用彈簧夾夾緊,在凝膠板和本體之間形成一個封閉的上液槽。 22 制膠 (T=%, C=%) 兩組 按照表中的比例和順序在小燒杯中配制凝膠溶液 , 加入 AP后 , 立即混勻 , 沿玻璃板 盡快 倒入玻璃板和金屬板縫隙中 , 注意不要有氣泡 , 當凝膠液面距短板 ( 白金屬板 ) 上緣 cm時 , 立即輕輕將 樣品槽模板 插入凝膠溶液中 , 注意樣品槽中不要有氣泡 , 凝膠溶液應充滿樣品槽間隙 。 20 將凝膠模安裝在固定架上 將凝膠模插入固定架, 使凹形氧化鋁板緊貼固定 架的背板,將固定架放在 一個水平玻璃板上,使凝 膠模各部件與固定架下緣 對齊,輕輕擰緊螺絲,使 壓條緊壓凝膠模。 17 18 操作步驟 一、樣品制備: 斷脊椎處死小鼠,取適量小鼠
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