垂直板聚丙烯酰胺凝膠連續(xù)電泳分離乳酸脫氫酶同工酶(參考版)
2025-01-11 06:51本頁(yè)面
【正文】 。 ? 每班請(qǐng)一位同學(xué)配制脫色液 1000 mL，每?jī)山M使用 50 mL（染色、脫色均為兩塊膠同時(shí)進(jìn)行）。 凝膠 玻璃板 玻璃紙 30 其他注意事項(xiàng) ? 愛惜電泳裝置，輕拿輕放，玻璃板必須用海綿清洗，避免產(chǎn)生劃痕，損壞需賠償。 加入脫色液終止酶促反應(yīng) ， 搖動(dòng) 3~5 min， 凝膠底色脫去直至背景清亮 ， 數(shù)碼相機(jī)照相 。 電極導(dǎo)線 安全蓋 上液槽 下液槽 橡膠封條 彈簧夾 冷卻水口 28 五 、 活性染色 ， 脫色 ， 照相： 電泳結(jié)束后 ， 將凝膠板取下 ， 用薄尺子輕輕將玻璃板和氧化鋁板撬開 ， 在凝膠下部切角標(biāo)注凝膠方位 ，然后將帶有凝膠的板反扣過(guò)來(lái) ， 膠面朝下 ， 用尺子小心地將凝膠的一角剝離 ， 使凝膠掉入裝有活性染色液的培養(yǎng)皿中 。注意 每種樣品使用 同一支進(jìn)樣器 ，以免樣品相互污染。將印有樣品槽模板形狀的塑料片貼在玻璃板上，使其與樣品槽重合（加樣后電泳前將塑料片取下），小心拔出樣品槽模板。 23 制備連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠電泳凝膠的配方 （兩組） 凝膠溶液組成 體積 TrisGly緩沖液 5 mL 30%凝膠貯液 mL 重蒸水（含 TEMED） mL 10%AP 60μL 24 凝膠板 電泳槽本體 三、準(zhǔn)備電泳： 將凝膠板安裝在電泳槽本體上 將凝膠板從制膠裝置上取下，安裝到電泳槽本體上，使凹形氧化鋁板緊貼在本體的密封橡膠封條上，用彈簧夾夾緊，在凝膠板和本體之間形成一個(gè)封閉的上液槽。 22 制膠 (T=%， C=%) 兩組 按照表中的比例和順序在小燒杯中配制凝膠溶液 ， 加入 AP后 ， 立即混勻 ， 沿玻璃板 盡快 倒入玻璃板和金屬板縫隙中 ， 注意不要有氣泡 ， 當(dāng)凝膠液面距短板 （ 白金屬板 ） 上緣 cm時(shí) ， 立即輕輕將 樣品槽模板 插入凝膠溶液中 ， 注意樣品槽中不要有氣泡 ， 凝膠溶液應(yīng)充滿樣品槽間隙 。 20 將凝膠模安裝在固定架上 將凝膠模插入固定架， 使凹形氧化鋁板緊貼固定 架的背板，將固定架放在 一個(gè)水平玻璃板上，使凝 膠模各部件與固定架下緣 對(duì)齊，輕輕擰緊螺絲，使 壓條緊壓凝膠模。 17 18 操作步驟 一、樣品制備： 斷脊椎處死小鼠，取適量小鼠
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