【正文】 治療或復(fù)發(fā)可能引起腫瘤細(xì)胞表面抗原改變。 取材不好或樣品保存不當(dāng)，可能導(dǎo)致假陰性的結(jié)果。 102 流式免疫表型診斷血液腫瘤的劣勢 沒有異常免疫表型的 T細(xì)胞淋巴瘤也可能很難檢測。 組織結(jié)構(gòu)關(guān)系、形態(tài)關(guān)系丟失。 細(xì)胞太多聚集或成團(tuán)也可能沒有足夠的分析細(xì)胞。 這樣 ，使用流式細(xì)胞儀對外周血或骨髓標(biāo)本進(jìn)行多參數(shù)分析 ， 并計(jì)算異常漿細(xì)胞含量 ， 對于多發(fā)性骨髓瘤的診斷和治療評估具有重要意義 。另外 ， 正常漿細(xì)胞的表面標(biāo)記為 CD19+/CD56，而多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞通常為 CD19/CD56+。正 常 漿 細(xì) 胞 為 CD38+/CD45dim/ ， 使用 CD38/CD45雙標(biāo)記檢測外周血和骨髓標(biāo)本 ， 可以準(zhǔn)確劃定漿細(xì)胞群 。14)； NCCN要求對所有 CLL患者檢測 t(11。 CLL與其它某些淋巴瘤在形態(tài)學(xué)上相似，但在免疫表型上卻各有特點(diǎn)。免疫分型主要為： SIgM、 SIgD弱表達(dá)， B系抗原為CD1 CD CD2 CD79a與 CD5共表達(dá)。 λ 1 K99+?。 λ 99 k 5。 λ 93 + k 86 ?。 λ 39 k 2。 ? 某些情況下還需要進(jìn)行免疫組化、分子 /細(xì)胞遺傳學(xué)檢查。 ? 腫塊細(xì)針穿刺（ FNA）不宜作為淋巴瘤初始診斷的依據(jù)。確定淋巴瘤的分期：檢測有否血液、骨髓和體液的累及。分類中根據(jù)免疫表型和 DNA含量，可確定低、中、高度惡性程度。淋巴瘤的臨床行為決定了臨床工作中的治療策略， WHO分類系統(tǒng)更多的采用與生物學(xué)特點(diǎn)相關(guān)的淋巴瘤診斷和分類方法，基于淋巴瘤的免疫和分子生物學(xué)特點(diǎn)的治療方法也不斷涌現(xiàn)，這些在將來會大大提高針對淋巴瘤的不同特點(diǎn)進(jìn)行的治療 。雖然定義淋巴瘤是綜合考慮的結(jié)果，但在具體確定一種淋巴瘤時其側(cè)重點(diǎn)有所不同 。這種分類方法在觀察者的組內(nèi)及組間的重復(fù)率為 8595%。s lymphoma)是淋巴系統(tǒng)的一類具有組織和生物學(xué)異質(zhì)性的惡性克隆性疾病。M4Eo/inv(16)等 。 M2/t(8。如： M3/t(15。 ?鑒別急性白血病與其他造血系統(tǒng)和非造血系統(tǒng)惡性腫瘤。 50 ?診斷雙表型 /混合細(xì)胞型急性白血病。 ?診斷一些少見類型的白血病。 ?鑒定 AML的特征。 Monocytic 紅系和巨核系的鑒定需要另外增加二線抗體。如：早前 B，前 B，普通 B… 27 EGIL， 1998年白血病積分系統(tǒng) ? 分值 B系 T系 髓系 ? 2 CD79a CD3 MPO ? (cyt)CD22 TCRα/β ? (cyt)IgM TCRγ/δ ? 1 CD19 CD2 CD117 ? CD20 CD5 CD13 ? CD10 CD8 CD33 ? CD10 CD65 ? TdT TdT CD14 CD24 CD7 CD15 CD1a CD64 ? *當(dāng)髓系和一個淋系積分均 2分時 ， 則診斷為急性混合細(xì)胞型白血病 。如：淋系 T/B、粒單系、紅系、巨核系等。只有熟悉正常細(xì)胞的抗原表達(dá)模式，才能辨認(rèn)白血病 /淋巴瘤細(xì)胞的存在。雖然是惡性腫瘤細(xì)胞，但仍能表達(dá)正常血細(xì)胞所具有的抗原，因而仍可依據(jù)其抗原的表達(dá)譜對白血病 /淋巴瘤進(jìn)行免疫分型。1 白血病 /淋巴瘤免疫分型 蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院 江蘇省血液研究所 衛(wèi)生部 血栓與止血重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 朱明清 2022年 8 月 杭州 2 流式細(xì)胞術(shù)的基本概念 ? 流式細(xì)胞術(shù)（ Flow Cytometry, 簡稱 FCM）是一種可以快速、準(zhǔn)確、客觀，并且同時檢測單個微粒（通常是細(xì)胞）的多項(xiàng)特性的技術(shù)，同時可以對特定群體加以分選 ? 研究對象為生物顆粒，如各種細(xì)胞、微生物及人工合成微球等 ? 研究的微粒特性包括多種物理及生物學(xué)特征，并加以定量 3 散射光信號和熒光信號 ? 前向角散射光（ FSC, Forward Scatter） 入射激光的前向散射光信號 細(xì)胞相對大小及其表面積 ? 側(cè)向角散射光（ SSC, Side Scatter） 入射激光 90?角的 散射光信號 細(xì)胞粒度及細(xì)胞內(nèi)相對復(fù)雜性 ? 熒光素與特異抗體結(jié)合，熒光抗體與細(xì)胞抗原結(jié)合越多，產(chǎn)生的熒光信號越強(qiáng)。 4 CD45/SS示意圖 5 實(shí)驗(yàn)對照的設(shè)計(jì) ? 空白對照： ALL ? 陰性對照： 常用同型抗體對照 單色分析：設(shè)同型抗體對照 多色分析：同型對照，單陽性對照 （用于儀器校正） ? 陽性對照： 檢測陰性時 6 空白對照和陰性對照的比較： 7 ? 需要用多少的標(biāo)志來確證感興趣的細(xì)胞群 ? ? 它們在細(xì)胞上的分布是不是很近 ? ? 它們是否在不同的細(xì)胞上表達(dá)不同 ? ? 他們表達(dá)強(qiáng)還是弱 ? 抗原表達(dá) CD3 CD4 CD3 CD8 8 抗原分布 ? 表面 ,胞漿 ,核內(nèi) ? 是共同檢測還是分別檢測 ? 表面 胞漿 核內(nèi) CD3, CD4, CD8, tetramer cytokines DNA CD3,4,8, tetramer + Cytokines CD3,4,8, tetramer + DNA Cytokines + DNA CD3,4,8, tetramer + Cytokines + DNA 9