儀器分析高效液相色譜法(1)(參考版)
2024-10-22 10:08本頁面
【正文】 35 親和色譜固定相舉例 2 O CH Si NH 3 ( ) 2 O 2 ) ( CH O C NH N N OH OH CH 2 P O O O C O O O 氨丙基硅膠 間隔臂 CMP 固定相可用于細(xì)胞色素 C、核糖核酸酶、溶菌酶等多種蛋白質(zhì)的純度分析。 ? 親和色譜固定相 雖然并非新方法，但近年來有了長足的發(fā)展。 33 （四）反相離子對色譜法的分離條件 ? 離子對試劑的選擇 ? 流動相 pH的選擇 ? 有機(jī)溶劑及其濃度的選擇 34 四、其他固定相 ? 鍵合型離子交換劑 ? 手性固定相 分析、分離對映體的最重要手段。 30 固定相粒度對板高的影響 Cm=dp2/ Dm dp— 固定相微粒直徑 小粒度、均勻的球形化學(xué)鍵合相 低粘度流動相，流速不宜太快 柱溫適當(dāng) 31 （二）正相鍵合相色譜法的分離條件 ? 固定性極性 流動相極性 ? 固定相：極性鍵合相 ? 流動相：烷烴（底劑） +極性調(diào)節(jié)劑 ? 正相洗脫時，依靠組分的極性差別而分離 ? 出峰順序：極性小的組分先出峰。 ? 溶劑系統(tǒng)選擇的原則 (分子間作用力 )與優(yōu)化意義(增加 R) ? 流動相的優(yōu)化 實(shí)現(xiàn)最難分離物質(zhì)對的理想分離前提下的快速分離 實(shí)現(xiàn)最大整體分離效能前提下的快速分離 28 三、分離條件的選擇 （一） Van Deemter 方程式 ? 在氣相色譜法中： 填充柱 毛細(xì)管柱 ? 在 HPLC中： H=A+B/u+Cu H=B/u+Cu H=A+Cu 29 在 HPLC中 ? 縱向擴(kuò)散項(xiàng) B=2?Dm Dm ? T/? B/u減小至忽略不計(jì) ? 渦流擴(kuò)散項(xiàng) A=2?dp 降低 ? 降低 dp ? 傳質(zhì)阻力系數(shù) C? Cm+ Csm H=A+Cu= A+Cmu + Csmu 近似認(rèn)為流動相的流速與板高成直線關(guān)系，流速增大
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