儀器分析高效液相色譜法(1)-wenkub.com
2024-10-16 10:08 本頁面
【正文】 利用親合反應的專屬性，該法已成為生化藥物純化、分析的重要手段。 32 （三）反相鍵合相色譜法的分離條件 ? 流動相極性 固定相極性 ? 固定相：非極性鍵合相 ? 流動相：甲醇 水、乙腈 水 ， 常加入弱酸、弱堿或緩沖鹽調(diào)節(jié)流動相 pH以抑制組分離解，增加保留 反相洗脫時， 出峰順序：極性大的組分先出峰。 R= ?n 4 ?1 ? k2 k21 (a) (b) (c) 26 A B 2 3 A B 1 2 A B 1 2 ?增加 2 4 6 8 10 1100 700 300 100 60% 乙腈 Time (min.) mAU 40% 水 溶劑洗脫強度增加 2021 1600 600 0 80% 乙腈 Time (min.) mAU 1000 20% 水 2 4 6 8 10 Inject Time 高柱效 低柱效 柱效增加 27 溶劑的強度和選擇性 ? 溶劑的極性 可按 Snyder溶劑系統(tǒng)中的強度因子來表示，反相洗脫時，強度因子 S越大，洗脫能力越強。有合適的 k值。 ? 按極性分為非極性、中等極性和極性三類。 ? 分析對象： ≤ pKa ≤ ≤ pKa ≤ 兩性化合物 12 ISC ?容量因子及其影響因素 對于弱酸：流動相 pH 組分 pKa， k?， tR? ?流動相 pH范圍 2 ~ 8 ?固定相與反相鍵合相一致 13 （三）反相離子對色譜法 ? RPIC— 在一般 RLLC流動相中加入離子對試劑。 7 鍵合相色譜法 ? 正相色譜法 ? 反相色譜法 ?RHPLC ?ISC ?PIC or IPC 8 （一）正相鍵合相色譜法 ? 固定相：氰基、氨基化學鍵合相。 ? HPLC 快速、分離效率高、樣品不受揮發(fā)性及熱穩(wěn)定性的約束，因而分析對象廣。 ? 以高壓泵輸送液體流動相，采用高效固定相，實現(xiàn)在線檢測和儀器化。具有分離效能高、分析速度快、應用范圍廣等的優(yōu)點。 4 與經(jīng)典液相色譜法的比較 LC HPLC 固定相粒度 (?m) 70~590% 3~10
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