【正文】 感謝我的家人、同學(xué)和朋友一 路上的陪伴、鼓勵和支持。感謝我的導(dǎo)師李會端老師及無機教研室主任宋建梅老師和管春平老師在整個論文完成過程中的悉心指導(dǎo)與大力幫助，在此謹向無機教研室的各位老師致以最衷心的感謝。 本論文 與乙醇回流提取相比得率提高了 %，說明 酶 輔助法有一定的優(yōu)異性。 3 結(jié)論 與討論 本 論文采用 酶 輔助法 提取 藕節(jié)中的總黃酮， 考查了酶濃度、酶解溫度、 pH值及酶解時間， 四個單 因 素對藕節(jié) 中總 黃酮得率的影響，最后通過正交實驗確定最佳提取條件 為 ： 70%乙醇作提取劑，濃度 為 mg/mL， 酶解溫度 55℃ ， pH值 為 ，酶解時間為 h。 乙醇回流法提取藕節(jié)中的總黃酮實驗結(jié)果 按 ， 測得藕節(jié) 中黃酮的平均得率為 % ，驗證 實驗 結(jié)果如表 25。 楚雄師范學(xué)院本科論文（設(shè)計） 8 表 23 正交 實驗 結(jié)果 實驗序號 因素 水平 總黃酮 得率/% A B C D 1 1 1 1 1 2 1 2 2 2 3 1 3 3 3 4 2 1 2 3 5 2 2 3 1 6 2 3 1 2 7 3 1 3 2 8 3 2 1 3 9 3 3 2 1 K1 K2 K3 R 按照正 交實驗所確定的最佳提取條件進行驗證性實驗， 做三次 平行實驗 ， 藕節(jié) 中黃酮的平均得率為 % ， 驗證 實 驗結(jié)果如表 24。 表 22 因素水平表 水平 A 酶濃度 (mg/ml) B酶解溫度 /℃ C pH值 D酶解時間 /h 1 50 2 55 3 60 由表 23可知，用 70%乙醇溶液作提取溶劑，酶濃度 mg/mL， 酶解溫度 55℃ ， pH值 為 ，酶解時間為 h，即 A1B2C2D3為 藕節(jié)中總黃酮提取的較 佳 提取 條件。 圖 26 酶解時間對藕節(jié) 中總 黃酮得率的影響 由圖 26可知，隨著酶解時間的增加藕節(jié)中總 黃酮得率 增加 ，當酶解時間為 h時 得率 有最大值，而后隨著酶解時間的 增加 藕節(jié)中 總黃酮得率 反而減小，實驗結(jié)果表明藕節(jié)中總黃酮得率較佳的酶解時間為 h。 圖 25 酸堿度 對藕節(jié) 中總 黃酮得率的影響 楚雄師范學(xué)院本科論文（設(shè)計） 7 由圖 25可知，隨著 pH 值增大 藕節(jié)中總 黃酮得率增大，當 pH 值為 得率 有最大值，而后隨著 pH值 的 增大 總黃酮得率 反而減小， 實驗結(jié)果表明藕節(jié)中總黃酮得率較佳的 pH值為 。 圖 24 酶解溫度對藕節(jié) 中總 黃酮得率的影響 由圖 24 可知，隨著酶 解 溫度的增大 藕節(jié)中總 黃酮 得率增大 ，當 解 酶溫度為 55℃時 得率 有最大值，而后隨著酶解溫度的 升高 總黃酮得率 反而減小，實驗 結(jié)果表明藕節(jié)中總黃酮得率 較佳的 酶解溫度為 55℃ 。 圖 23 酶濃度對藕節(jié) 中總 黃酮得率的影響 由圖 23可知，隨著酶濃度的增大藕節(jié)中總黃酮得率增大，當酶濃度為 mg/mL時 得率 有最大值，而后隨著酶濃度的增加總黃酮得率反而減小，實驗結(jié)果表明藕節(jié)中總黃酮得率較佳的酶濃度楚雄師范學(xué)院本科論文（設(shè)計） 6 為 mg/mL。 根據(jù)蘆丁標準曲線可得線性回歸方程為： A = R = n = 8 楚雄師范學(xué)院本科論文（設(shè)計） 5 圖 22 蘆丁 標準曲線 總 黃酮得率計算 將所測吸光度帶入回歸方程求出提取液中總黃酮濃度，按下式計算提取液中總黃酮提取率： 100%1050% 321 ?????? Vm VC）總黃酮得率（ 式中： V1為第二次定容后提取液 的體積 50 mL； V2從母液中量取的提取液體積 mL； C為提取液中總黃酮濃度； m為藕節(jié)粉末的質(zhì)量。 測定波長的選擇 按 ，測得不同波長下的吸光度 其結(jié)果 ， 如圖 21所示 。 乙醇 回流 法 提取 藕節(jié)中的總黃酮 取 1個 100 mL的圓底燒瓶， 加入 g藕節(jié)粉， 再 加入 40 mL 70%乙醇回流提取 1 h，過濾，洗滌濾渣，收集 濾 液，用 70%乙醇溶液定容至 50 mL搖勻， 用 吸量管 準確取 mL上述提取液 50 mL楚雄師范學(xué)院本科論文（設(shè)計） 4 容量瓶中，再 用 吸量管 準確加入 mL 5%的亞硝酸鈉混勻，靜置 6 min； 用 吸量管 準確加入 mL 10%硝酸鋁，靜置 6 min ； 再用 吸量管 準確加入 4 .00 mL 1 mol/L氫氧化鈉混勻，用 70% 乙醇定容搖勻，靜置 10 min ； 以試劑空白為參比，在 最大波長處測定吸光度 ， 做三次 平行實驗 。 酶解時間的影響 取 6個 100 mL的圓底燒瓶，分別加入 g藕節(jié) 粉，再 分別 準確 加入 mL mg/mL纖維素 酶溶液， 用稀鹽酸 調(diào)節(jié) pH為 ，在 50℃ 恒溫水浴酶解 h、 h、 h、 h、 h、 h；再 分別加入 28 mL無水乙醇回流提取 1 h， 過濾，洗滌濾渣，收集 濾 液，用 70%乙醇溶液定容至 50 mL搖勻，備用。 酶解溫度的影響 取 6個 100 mL的圓底燒瓶，分別加入 粉，再 分別 準確 加入 mL mg/mL纖維素 酶溶液， 用稀鹽酸 調(diào)節(jié) pH為 ， 在 40℃、 45℃、 50℃ 、 55℃、 60℃、 65℃ 恒溫水浴 中 酶解 h；再 分別加入 28 mL無水乙醇回流 1 h， 過濾，洗滌濾渣，收集 濾 液，用 70%乙醇溶液 定容至 50 mL搖勻，備用。 楚雄師范學(xué)院本科論文（設(shè)計） 3 蘆丁 標準 曲線的 繪制 分別用 吸量管 取 上述蘆丁標準液 、 、 、 、 、 、 、 于 50 mL容量瓶中， 用 吸量管 準確 加入 mL 5%的亞硝酸鈉 混 勻，靜 置 6 min； 用 吸量管 準確 加入 mL 10%硝酸鋁， 靜置 6 min ； 再用 吸量管 準確加入 4 .00 mL 1 mol/L氫氧化鈉混勻 ，用 70% 乙醇定容搖勻 ， 靜置 10 min ； 以試劑空白為參比 ，在 最大吸收 波長 處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，蘆丁標準液濃度為橫坐標，繪制標準曲線 ，得回歸方程 。輕輕振蕩容量瓶，使溶液混合均勻； 再 用 70%乙醇定容至 刻度線 ，搖勻靜置 ，備用 。 蘆丁 標準溶液的配制 [7] 用電子分析天平 準確稱取充分干燥 （ 105℃ ） 的蘆丁 mg于 小燒杯中 ， 用 70%的乙醇 溶解。 鋁鹽反應(yīng) 用 吸量管