【正文】 SD） P，與假手術(shù)組相。 ** 尼莫地平組 40 177。 50 177。 模型組 － 177。 表 22 葛根素對雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎再灌注致癡呆模型小鼠大腦皮層 SOD 活力的影響 （ n=10, ?X177。與模型組小鼠相比，葛根素高劑量組（ 100mg/kg）與尼莫地平組小鼠大腦皮層內(nèi)的 SOD 活力顯著升高（ P， n=10）。** P，與假手術(shù)組相比； *P， **P，與模型組相比 圖 22 表 21 葛根素對雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎再灌注致癡呆模型小鼠 水迷宮實(shí)驗(yàn)的影響 （ n=10, ?X177。* 177。* 177。* 177。* 177。 100 177。 177。* 177。 177。 177。 葛根素 組 25 177。 177。 177。 177。 177。SD） 到達(dá)安全臺的游泳時(shí)間 (s) 組別 劑量 (mg/kg) 1d 2d 3d 4d 5d 假手術(shù)組 － 177。 （見 表 21， 圖 22）。 哈爾濱商業(yè)大學(xué)畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 19 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論 葛根素對雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎再灌注致癡呆模型小鼠 水迷宮實(shí)驗(yàn)的影響 由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知 ， 與假手術(shù)組小鼠相比，模型組小鼠 在水迷宮 測試 期間從起點(diǎn)到安全區(qū)的游泳時(shí)間顯著延長 （ P， n=10） 。標(biāo)準(zhǔn)差 表示， 采用單因素方差分析方法 。取樣量反應(yīng)液的的總體積 /對照管吸光度 （ 2）定義 :每毫克組織蛋白在 lml 反應(yīng)液中 SOD 抑制率達(dá) 50%時(shí)所對應(yīng)的 SOD量為一個(gè)亞硝酸鹽單位。操作如下： 試劑 測定管 對照管 試劑一 （ ml） 樣品 （ ml） － 蒸餾水 （ ml） 試劑二 （ ml） 試劑三 （ ml） 試劑四 （ ml） 顯色劑 （ ml） 2 2 用微型旋渦混勻器充分混勻，置 37℃恒溫水浴 40 分鐘。當(dāng)被測樣品中含 SOD 時(shí)，則對超氧陰離子自由基有專一性的抑制作用，使形成的亞硝酸鹽減少，比色時(shí)測定管的吸光度值低于對照管的吸光度，通過公式計(jì)算可求出被測樣品中的 SOD 活力。進(jìn)行生化指標(biāo)檢測時(shí)，以重量 /體積比 1:9 加入 4℃ 生理鹽水，制成 10%的 腦組織 勻漿， 3000r/min 低溫離心15min，取上清液，按 超氧化物歧 化酶（ SOD） 試劑盒說明，用 722 分光光度計(jì)測定大腦 皮層 組織 中 SOD 的 活 力。每次訓(xùn)練 時(shí) 記錄小鼠進(jìn)入水中至到達(dá)安全區(qū)的時(shí)間，計(jì)算每天 小鼠到達(dá)安全區(qū)的平均游泳 時(shí)間。在 F區(qū)處有一階梯，動(dòng)物到達(dá)階梯 F可以獲得休息。 各組均連續(xù)給藥 7 天后進(jìn)行水迷宮實(shí)驗(yàn) ， 16 天后取材進(jìn)行生化指標(biāo)檢測。 （ 1）模型組：按上述步驟制備模型，術(shù)后 48h 后每 日 灌胃給予蒸餾水； （ 2）假手術(shù)組： 手術(shù)步驟同模型組，但不對其雙側(cè)血管進(jìn)行結(jié)扎，尾部也不放血。消毒，頸正中切口，分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈，以動(dòng)脈夾夾住血管，阻斷 血流 20min，同時(shí)尾部放血 ，熱凝止血，恢復(fù)血流 10min，再次阻斷血流 20min；假手術(shù)組僅暴露雙側(cè)頸總動(dòng)脈不結(jié)扎，尾部不放血。 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、試劑及儀器 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種小鼠 60 只，體重 25~30g，雄 性（ 8 周齡）， 由 中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn) 動(dòng)物中心提供，合格證號： SCXK（軍） 2021005 實(shí)驗(yàn)藥品及試劑 尼莫地平片 拜耳醫(yī)藥保健有限公司 批號： 132865 注射用青霉素鈉 哈藥集團(tuán)制藥總廠 氯化鈉注射液 哈爾濱三聯(lián)藥業(yè)有限公司 水合氯醛 天津市瑞金特化學(xué)品有限公司 純凈水 杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司 碘伏消毒液 德州安捷高科消毒制品有限公司 葛根素 哈爾濱商業(yè)大學(xué)藥學(xué)院醫(yī)藥基礎(chǔ)教研室 實(shí)驗(yàn)儀器 一次性使用無菌注射器（帶針） 上?？祲坩t(yī)療器械有限公司 電子 分析天平 上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司 電熱恒溫水浴箱 RF540 型 江蘇省金壇市醫(yī)療儀器廠 電動(dòng)低速離心機(jī) LDS2 型 北京醫(yī)用離心機(jī)廠 WXH 微型旋渦混合器 上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠 程控 F 型水迷宮 SMG2 醫(yī)科院藥研所制 超氧化物歧化酶試劑盒 SOD 酶法 南京建成生物工程研究所 UV2102C 型紫外可見分光光度計(jì) 尤尼柯（上海）儀器有限公司 哈爾濱商業(yè)大學(xué)畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 17 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法 模型 制備 將小鼠以 %水合氯醛腹腔注射麻醉。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造模是利用雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎造成腦供血供氧不足，從而引發(fā)腦缺血性損傷。 哈爾濱商業(yè)大學(xué)畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 16 2 實(shí)驗(yàn)部分 引 言 學(xué)習(xí)與記憶障礙是腦缺血性損傷的主要癥狀，而腦缺血再灌注損傷是造成血管性癡呆的主要原因之一。已有研究表明，葛根素的療效十分廣泛，其藥理作用大多有利于阿爾茲海默病的預(yù)防治療 [38]，但葛根素對于腦組織缺血缺氧所致的學(xué)習(xí)記憶功能障礙和神經(jīng)損傷是否有改善作用的報(bào)道卻并未多見。在 國際上 對血管性 癡呆的發(fā)病機(jī)制 還未有準(zhǔn)確定論 ，而且 并 無 十分 有效的 治療藥物 ，但 就目哈爾濱商業(yè)大學(xué)畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 15 前而言，中醫(yī)藥在治療癡呆方面 卻 是療效顯著。癡呆為患病者造成巨大痛苦，為患者家庭生活帶來重重困難，更是為社會增加了沉重的負(fù)擔(dān)。而在這其中由于我又國是一個(gè)血管病多發(fā)的國家，所以血管性癡呆患者在我國人群中占有相當(dāng)高的比例 [35]，且隨著我國人口的老齡化以及人民平均壽命的延長，血管性癡呆癥的患病率正在呈直線增加。 根據(jù)近些年的研究，我們可以了解到癡呆的發(fā)病率己呈上升趨勢，在歐美國家中癡呆多以阿爾茨海默病居多，占全部癡呆病例的 50%，血管性癡呆占 20%，阿爾茨海默病與血管性癡呆的混合型則占 10%~20%。 , 立題依據(jù) 隨著 世界經(jīng)濟(jì)的飛速發(fā)展，全球 各國普遍面臨 著 人口老齡化加劇的 趨勢 ，老年人的精神衛(wèi)生問題 和對 老齡化疾病的防治 也 日漸成為全球性公共衛(wèi)生 的重要課題。 (3)結(jié)構(gòu)修飾的意義 由于大部分藥物的療效是由藥物分子與生物受體分子間的相互作用而產(chǎn)生 , 因此藥物分子的溶解性能及分子的大小、形狀和空間結(jié)構(gòu)都很重要?；诖?, 楊若林 , 等 [ 20]用醚化及?；姆椒ㄖ苽淞? 10個(gè)葛根素的衍生物 , 其中 8個(gè)為新化合物。葛根素為異黃酮碳苷 , 7, 4c 二羥基為活性基團(tuán) , 其中 7 位羥基因 8 位糖的位阻影響 , 活性較 439。39。通過小鼠抗缺氧試驗(yàn)和離體動(dòng)脈條試驗(yàn) , 評價(jià)了目標(biāo)化合物的抗缺氧活性和擴(kuò)血管活性 , 結(jié)果合成了 12 個(gè)新的葛根素衍生物 , 初步藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示 , 大多數(shù)化合物的抗缺氧活性等于或略強(qiáng)于葛根素 , 化合物 P P P P5 和 P6 均具有明顯的擴(kuò)血管活性 , 活性隨劑量增加而增大 , 其中 P1和 P2 擴(kuò)血管活性強(qiáng)于葛根素。 3124位 39。屈凌波 , 等 [ 15]則利用熒光光譜在激發(fā)波長處 , 熒光測定中固定 BSA 的濃度而改變葛根素、 7 磷?；鸶匮苌锏臐舛?, 探討了葛根素、 7 磷?；鸶仵ズ? 7 二異丙基磷酸葛根素酯分別與牛血清蛋白的相互作用。陳曉嵐 , 等 [ 16]在葛根素 7 磷酰二烷基酯的電噴霧質(zhì) 譜研究中嘗試對葛根 素進(jìn)行了磷?；Y(jié)構(gòu)改造 , 合成了一系列葛根素 272 磷酸二烷基酯衍生物 , 對其在 ESIM S 中的裂解規(guī)律進(jìn)行了研究。 三個(gè)小分子對 BSA 熒光的猝滅是靜態(tài)猝滅過程 , 結(jié)合力以疏水作用力為主 。由于磷?；囊?, 7 一磷酰基黃酮的抗 HELA 等腫瘤細(xì)胞活性同磷?；坝忻黠@的提高。在現(xiàn)代的制藥工業(yè)中 , 磷酸酯類化合物經(jīng)常被用作前體藥物 , 并因此增加人體的生物獲取能力 [ 12]。 （ 2） 結(jié)構(gòu)修飾類型 3,1,1,7位羥基磷?；Y(jié)構(gòu)修飾 作為有機(jī)磷小分子化合物 , 磷酰胺及其酯類衍生物大多具有廣泛的生物活性 [ 11]。目前 , 臨床應(yīng)用的葛根素注射液大多需要加入聚乙烯吡咯烷酮 ( PVP)或高濃度的丙二醇才能達(dá)到該注射劑要求的藥物濃度 , 這樣使藥物的粘稠度較大 , 給大規(guī)模生產(chǎn)造成過濾上的麻煩 , 成本增加。如此眾多的藥理作用 , 且具有毒性低 , 安全范圍廣等優(yōu)點(diǎn) , 使葛根素的臨床應(yīng)用非常廣泛 , 主要應(yīng)用于心絞痛〔 37～ 38〕、 心肌梗死〔 39〕、心律失常〔 40〕、高粘血癥、高血壓、 B 高敏 癥和視網(wǎng)膜動(dòng)脈阻塞等疾病〔 41〕 , 亦有將其用于突發(fā)性耳聾〔 42〕和擬菊酯類農(nóng)藥中毒〔 43〕。此外 , 葛根素還可抑制體溫升高〔 36〕與乙醇攝入量〔 1〕。一系列的研究分別從離體器官和整體動(dòng)物水平證明葛根素為 B受體阻斷劑 , 且對心房肌 B1受體的選擇性強(qiáng)于氣管的 B2 受體 〔 34〕 , 這也許是其產(chǎn)生眾多心血管藥理作用的分子基礎(chǔ)。 （ 4） 在血液流變學(xué)方面 , 葛根素可能僅作用于血管及血液的物理性質(zhì)方面 , 對血液的化學(xué)性質(zhì)無影響 。 （ 2） 對缺血心肌和心肌缺血再 灌注損傷具有保 護(hù)作用〔 30〕 前者的電生理基礎(chǔ)可能由于心肌細(xì)胞存在河豚毒素不敏感性鈉內(nèi)流 ( TTxr)〔 31〕 , 其對腦缺血是否有保護(hù)作用尚待進(jìn)一步探討。 葛根素的藥理作用 近年來 , 國內(nèi)外學(xué)者對葛根素的藥理和臨床應(yīng)用做了大量的研究工作 , 證實(shí)其為一種 B 受體阻斷劑 , 對冠狀動(dòng)脈有擴(kuò)張作用 , 能保護(hù)全心缺血心肌和心肌缺血再灌注損傷 , 減少人和動(dòng)物急性心梗面積等多種藥理作用。葛根是臨床常用中藥之一 , 其主要有效成分是葛根素 ( Puerarin, pur)和黃豆苷 ( Daidzin), 其中葛根素是葛根心腦血管活性的主要物質(zhì)基礎(chǔ) [ 1, 2]。 1993 年 , 葛根素經(jīng)衛(wèi)生部標(biāo)準(zhǔn)用于臨床 ,多制成注射劑、滴眼劑 , 應(yīng)用于心臟血管疾病 , 其藥源豐富 , 療效好 , 安全范圍廣 , 具有廣闊的發(fā)展前景 , 因而受到了廣泛的 關(guān)注。 葛根素 葛根素是一種異黃酮類化合物 , 可從豆科植物野葛 Pueraria lobata( W illd. ) Ohw i. 的干燥根中提取得到 ， 為辛涼解表藥 , 性味甘、辛、涼 , 歸脾、胃經(jīng) , 具有解肌退熱、生津、透疹、升陽止瀉之功效 。抑郁、焦慮、空虛的精神狀態(tài)非但不利于腦健康 ,還有可能出現(xiàn)假性癡呆。中老年的腦保健。對亞臨床腦卒中患者實(shí)施一級預(yù)防性治療 ,可以減少血管進(jìn)一步受損 ,避免癡呆的發(fā)生。此外 ,我所研發(fā)的國家一類新藥 lNBP,在自然衰老大鼠長期預(yù)防給藥實(shí)驗(yàn)中 ,明顯增加乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶 (ChAT)活性 ,并有降低乙酰膽堿酯酶活性的趨勢 ,因此在促進(jìn)合成和抑制分解兩個(gè)方面增加了乙酰膽堿的含量 ,有利于認(rèn)知功能的恢復(fù)。已證實(shí)有效的藥物包括他克林、加蘭他敏、利伐斯的明和多萘哌齊等。膽堿能假說認(rèn)為中樞膽堿系 統(tǒng)功能的下降導(dǎo)致了認(rèn)知能力受損 ,癡呆患者的認(rèn)知功能受損程度和乙酰膽堿酯酶 (AchE)的活性相對增高及乙酰膽堿合成減少呈正相關(guān) ,而且膽堿能系統(tǒng)在認(rèn)知功能的恢復(fù)中也起重要作用。其所含的黃酮類成份具有協(xié)同抗氧化 ,清除自由 基 ,增強(qiáng)中樞膽堿功能 ,增加腦血流以及改善腦正常代謝功能的作用。②興奮性氨基酸 (EAA)受體拮抗劑 ,如美金剛 (memantine),它是一種選擇性 NMDA受體拮抗劑 ,能夠抑制 NMDA受體的過度激活 ,減輕興奮性細(xì)胞毒作用 ,并通過抑制鈣內(nèi)流發(fā)揮神經(jīng)元保護(hù)作用 。在神經(jīng)元和腦血管細(xì)胞中也存在尼莫地平結(jié)合位點(diǎn) ,尼莫地平通過影響神經(jīng)傳導(dǎo)和腦血流而發(fā)揮作用?；A(chǔ)研究提示 ,抑制鈣內(nèi)流能保護(hù)神經(jīng)元免受一系列損害的影響 ,表明尼莫地平具有神經(jīng)保護(hù)潛能 ,特別是抵抗短暫缺血和缺氧的影響。②增加腦組織氧分壓 ,從而滿足組織對氧的需求。同時(shí)它可提高腦組織線粒體的氧代謝能力 ,滿足腦神經(jīng)細(xì)胞代謝的需要。阿米三嗪能增加肺泡 毛細(xì)血管的氣體交換效率 ,從而改善血?dú)鈪?shù) ,但并不改變通氣參數(shù)。如復(fù)合制劑 都可喜 ,它是法國施維雅公司研究開發(fā)的阿米三嗪和羅巴新組成的復(fù)方制劑。黃酮類可降低腦血管阻力 ,改善腦循環(huán) ,使腦血流量增加 ,改善腦的營養(yǎng) ,有助于改善記憶和腦功能不全或與年齡有關(guān)的系列中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙 ,包括健忘、乏力、疲勞、體力下降等。 哈爾濱商業(yè)大學(xué)畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 11 血管性癡呆的治療 1)改善腦循環(huán)藥物 ,作用是減少腦血管阻力 ,增加血流量或改善血液粘稠度。 血管性癡呆的預(yù)防與治療 改善腦循環(huán)類藥物的作用機(jī)制是降低 腦血管 內(nèi)的 阻力 ， 增加 腦 血流量 以及 改善血液 的 粘稠度。 三焦氣化失司 韓景獻(xiàn) [14]教授認(rèn)為，三焦氣化為腦神的基礎(chǔ)，三焦氣化失司，則氣血津液升降出入的通道不暢，其化生、運(yùn)行、輸布異常，內(nèi)生風(fēng)、火、濕、 熱諸邪，血瘀、痰濁、水飲、濁毒等病理產(chǎn)物隨之而生。治療應(yīng)有所側(cè)重，偏腎虛患者宜以補(bǔ)虛通絡(luò)為主，偏瘀血患者宜以活血通絡(luò)為主，偏痰濁患者宜以化痰通絡(luò)為主。也有學(xué)者姚龍華 [11]為，年輕患者或是患者發(fā)病的初期多以標(biāo)實(shí)為主，年老患者或者發(fā)病的中后期或多為本虛標(biāo)實(shí)。 ． 4 本虛標(biāo)實(shí)，虛實(shí)夾雜證 孫思邈提出：“下焦虛寒損，腹中瘀血，令人善忘。王永炎等 [9] 認(rèn)為，血管性癡呆病位在腦，病變在玄府，發(fā)于五臟，以腎為本，濁毒壅塞，玄府郁閉而發(fā)為本病。王四平 [8]認(rèn)為，