【正文】 最后，試驗(yàn)結(jié)果是出來了，但沒有讓我們滿意，一點(diǎn)也不滿意，雖然我們在其中投入了大量的時(shí)間，但試驗(yàn)的成敗從來不是與投入的時(shí)間成正比的。此時(shí)，誰也不會想到，最后我們會在這里留下那么多遺憾，此時(shí)的我們只會想到成功會屬于我們，也只可以屬于我們，因?yàn)槲覀冇凶詈玫膶?dǎo)師。在我們的迎接下，設(shè)備一件件加入到了我們奮斗的大業(yè)中，隨我們一起沖殺在試驗(yàn)前線，感覺前途一片光明，隨著設(shè)備增添，試驗(yàn)也逐漸展開了。 選題之初，易老師就告訴了我們接下來將要面對的重重困難，沒有實(shí)驗(yàn)室、沒有設(shè)備、工作量大且試驗(yàn)有極大可能達(dá)不到理想的效果，但一切聽在我們耳中，則變成證明自己的有利條件而已，并沒有放在心上。參考文獻(xiàn)[1] 李新社, 陸步詩．大曲酒糟代替米糠生產(chǎn)小曲的效果研究［J］．釀酒科技, 2006(7):65 －66．[2] 張禮星, 王華．里氏木霉纖維素酶在大曲酒酒糟中的應(yīng)用[J]．釀酒科技, 2000, （3）：5253．[3] 江龍法．分解酒糟生物質(zhì)的纖維素酶生產(chǎn)菌的篩選研究［J］．自然科學(xué)版, 2006, 15(4):51 －54．[4] 熊世勤, 彭謙. 耐熱纖維素酶產(chǎn)生菌及產(chǎn)酶條件[ J ]. 云南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版) , 1998, 20 ( 2 ) : 91 94.[5 ] Bayer EA , Chanzy H , Lamed R , et al . Cellulose , cellulases and cellulosomes [J ] . Current Opinion in Structural Biology , 1998 , 8( 5) : 548 557.[6] 史央. 秸稈降解的微生物學(xué)機(jī)理研究及應(yīng)用發(fā)展[J ] .微生物學(xué)雜志, 2002, 22 (1) : 47 50.[7] 張影. 一株生孢噬纖維菌的分離純化、鑒定及降解纖維素濾紙過程的研究[D]. 長春：東北師范大學(xué), 2003.[8] 郭愛蓮, 楊琳, 劉梅, 等. 產(chǎn)黃纖維單胞菌纖維素酶的培養(yǎng)條件[J]. 西北大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版, 1999(6) ：575577.[9] 謝菊蘭，肖兵南，周望平. 一株產(chǎn)黃纖維單胞菌的選育及產(chǎn)酶特性研究[J]. 微生物學(xué)雜志, 2008(1)：4144.[10] W. Schwarz. The cellulosome and cellulose degradation byanaerobic bacteria[J]. Applied Microbiology and Biotechnology，2001，56(56) .[11] 吳斌, 胡肄珍. 產(chǎn)纖維素酶放線菌的研究進(jìn)展[J]. 中國釀造, 2008(1)：58.[12] 李日強(qiáng)．纖維素類廢棄物的綜合利用．中國環(huán)境科學(xué), 2002, 22(1)：2427．[13] 秦廣利．纖維素酶對白酒酒糟資源化利用研究．釀酒科技,2009(4) :2225[14] 沈萍．微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)［M］．4 版．高等教育出版社, 2007:85120．[15] 王淑軍, 楊從發(fā), 陳靜. 固態(tài)降解農(nóng)作物秸稈纖維素菌株分離篩選方法的研究. 淮海工學(xué)院學(xué)報(bào), 1999 , 1 (3) :42～45[16] 管斌, 丁友昉, 謝來蘇, 等. 還原糖測定方法的規(guī)范[J]. 無錫輕工大學(xué)學(xué)報(bào), 1999, 18(3): 74?79.[17] 胡丹, 劉霞, [J].現(xiàn)代食品科技, 2009, 23(3):1417[18] 李亮亮．纖維素酶活力測定方法的比較研究[ J] . 遼寧農(nóng)業(yè)科技, 2001, ( 4) : 1618．致 謝有的事，在做的時(shí)候沒有顯出有什么意義，但回過頭才發(fā)現(xiàn)意義所在。又由于纖維素酶是一種誘導(dǎo)型復(fù)合酶系，單一菌株降解纖維素的能力有限，需要多菌種協(xié)同才有可能最大化地降解纖維素，所以本試驗(yàn)所獲菌株單獨(dú)降解纖維素能力可能有所不足。酒糟中的纖維素部分被木質(zhì)素和半纖維素包裹，對纖維素酶有鈍化作用；而在白酒蒸餾過程中，酒糟中纖維素的晶狀結(jié)構(gòu)被部分破壞，有利于纖維素酶的作用。另外纖維素酶活力的測定方法也很多，至今沒有統(tǒng)一， 這就造成了相互之間無法比較活力的情況。還有如梁如玉等對含纖維素底物進(jìn)行化學(xué)的或物理的預(yù)處理，可大大提高底物對酶的敏感性，減少底物的抗性，提高纖維素轉(zhuǎn)化率。因纖維素空間結(jié)構(gòu)和纖維素酶酶系組成對纖維素分解效果影響顯著。對于活力較低的樣品來說，其靈敏度較差。濾紙酶活力法測定總酶活力雖然是一種通用的、公認(rèn)的、經(jīng)典的方法，但由于其底物為濾紙是不溶性的，結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜，不同廠家生產(chǎn)的濾紙也不同，對實(shí)驗(yàn)結(jié)果有一定的影響，因此，對濾紙品種的要求也十分嚴(yán)格。人們對纖維素酶活力測定方法進(jìn)行了大量的研究，自20 世紀(jì)60 年代以來，提出了許多不同的測定方法。從試驗(yàn)中可以看出，單菌株濾紙條崩解實(shí)驗(yàn)證明單株細(xì)菌對濾紙條纖維素的分解能力比較弱， 通過查閱有關(guān)文獻(xiàn)，知道有通過多菌種混合培養(yǎng)，利用不同菌種分泌的多種酶之間的協(xié)同作用，得到對濾紙條纖維素具有較強(qiáng)分解能力的菌株組合。兩種培養(yǎng)方式均有氣體產(chǎn)生。而在30176。C條件下篩選得到的菌株。C培養(yǎng)條件下，前期，高溫培養(yǎng)的細(xì)菌生長快于低溫培養(yǎng)，但3d之后，二者趨向平衡；后期，30 176。在30 176。 U/ mL。C條件的6株，對其進(jìn)行各項(xiàng)指標(biāo)的測定，主要偏重于其纖維素酶活的測定。在這103株菌中，最具研究價(jià)值的有近20株，本試驗(yàn)著重選取了其中13株，分別是50 176。 接種細(xì)菌下的培養(yǎng)液與濾紙通過觀察發(fā)現(xiàn)，具有較強(qiáng)的纖維素酶活性的13株細(xì)菌，原先能在CMCNa培養(yǎng)基上產(chǎn)生大而清亮的透明圈，但在濾紙條崩解試驗(yàn)中卻沒有明顯的效果，只是顯得渾濁。所以，濾紙崩解試驗(yàn)可以用作菌株的篩選之中，但不能作為判斷酶活力大小的依據(jù)。渾濁度高的菌懸液，其細(xì)菌的生長繁殖速度快，繁殖能力較強(qiáng)。 葡萄糖DNS顯色反應(yīng) 濾紙崩解試驗(yàn)情況菌株編號培養(yǎng)液沉淀情況顆粒物分布狀況菌落顏色培養(yǎng)液液面有無菌落層濾紙崩解狀況培養(yǎng)液渾濁度BH19無稀薄極低BH314絮狀均勻少量+低BH331無少量極低BH520微量下層較多大量極低BH526無均勻少量極低BH536無少量極低BH634少量稀薄極低BL345中量上層較多黃色無+低BL465少量上層較多灰色少量極低BL5581大量上層較多黃紅色無++中度BL595中量均勻紅白交替無++中度BL599中量均勻無++中度BL5106微量均勻無+++高度，除了2株細(xì)菌BL5106一具有一定降解濾紙條的能力外，其他單菌株在連續(xù)8d的恒溫振蕩培養(yǎng)過程中不能使濾紙條崩解，這也可能是培養(yǎng)時(shí)間不夠長，或是濾紙成分構(gòu)成的原因。 BL5106DNS顯色圖 μg。.酶活力測定結(jié)果以520 nm 處測出的吸光度OD 值為縱坐標(biāo)，以葡萄糖含量(mg)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。C振蕩，轉(zhuǎn)速為120 r/ min培養(yǎng)6 d， 將培養(yǎng)液于4176。 對具有纖維素分解功能的菌株分別進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)，測定酶活力，其中菌株BL5106產(chǎn)纖維素酶活力最高， U/mL。因?yàn)闇y定的菌株比較多，每一個(gè)菌株對應(yīng)一個(gè)生長曲線，且50176。C、120 r /min振蕩培養(yǎng)下的菌懸液吸光度只能略作結(jié)果的參考。最后通過721G可見分光光度計(jì)的測定證實(shí)以上推斷。 通過肉眼的觀察判斷，50176。C靜置培養(yǎng)下的菌懸液，其沉淀量少、液面無菌苔或菌苔量微小、液體中顆粒物分布均勻、液體昏暗渾濁、細(xì)菌生長規(guī)律；而50176。在測定細(xì)菌生長曲線時(shí)，通過觀察發(fā)現(xiàn)。C低溫保存。C條件下，待到用時(shí)再取出，但要注意保存時(shí)間不宜過長，通常為7 d。C3d，以牛肉膏蛋白胨作