【正文】 遼寧農(nóng)業(yè)科技, 2001, ( 4) : 1618．致 謝有的事，在做的時(shí)候沒有顯出有什么意義，但回過頭才發(fā)現(xiàn)意義所在。在我們的迎接下，設(shè)備一件件加入到了我們奮斗的大業(yè)中，隨我們一起沖殺在試驗(yàn)前線，感覺前途一片光明，隨著設(shè)備增添，試驗(yàn)也逐漸展開了。最后，試驗(yàn)結(jié)果是出來了，但沒有讓我們滿意，一點(diǎn)也不滿意，雖然我們?cè)谄渲型度肓舜罅康臅r(shí)間，但試驗(yàn)的成敗從來不是與投入的時(shí)間成正比的。此時(shí)，誰(shuí)也不會(huì)想到，最后我們會(huì)在這里留下那么多遺憾，此時(shí)的我們只會(huì)想到成功會(huì)屬于我們，也只可以屬于我們，因?yàn)槲覀冇凶詈玫膶?dǎo)師。 選題之初，易老師就告訴了我們接下來將要面對(duì)的重重困難，沒有實(shí)驗(yàn)室、沒有設(shè)備、工作量大且試驗(yàn)有極大可能達(dá)不到理想的效果，但一切聽在我們耳中，則變成證明自己的有利條件而已，并沒有放在心上。又由于纖維素酶是一種誘導(dǎo)型復(fù)合酶系，單一菌株降解纖維素的能力有限，需要多菌種協(xié)同才有可能最大化地降解纖維素，所以本試驗(yàn)所獲菌株單獨(dú)降解纖維素能力可能有所不足。另外纖維素酶活力的測(cè)定方法也很多，至今沒有統(tǒng)一， 這就造成了相互之間無法比較活力的情況。因纖維素空間結(jié)構(gòu)和纖維素酶酶系組成對(duì)纖維素分解效果影響顯著。濾紙酶活力法測(cè)定總酶活力雖然是一種通用的、公認(rèn)的、經(jīng)典的方法，但由于其底物為濾紙是不溶性的，結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜，不同廠家生產(chǎn)的濾紙也不同，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有一定的影響，因此，對(duì)濾紙品種的要求也十分嚴(yán)格。從試驗(yàn)中可以看出，單菌株濾紙條崩解實(shí)驗(yàn)證明單株細(xì)菌對(duì)濾紙條纖維素的分解能力比較弱， 通過查閱有關(guān)文獻(xiàn)，知道有通過多菌種混合培養(yǎng)，利用不同菌種分泌的多種酶之間的協(xié)同作用，得到對(duì)濾紙條纖維素具有較強(qiáng)分解能力的菌株組合。而在30176。C培養(yǎng)條件下，前期，高溫培養(yǎng)的細(xì)菌生長(zhǎng)快于低溫培養(yǎng)，但3d之后，二者趨向平衡；后期，30 176。 U/ mL。在這103株菌中，最具研究?jī)r(jià)值的有近20株，本試驗(yàn)著重選取了其中13株，分別是50 176。所以，濾紙崩解試驗(yàn)可以用作菌株的篩選之中，但不能作為判斷酶活力大小的依據(jù)。 葡萄糖DNS顯色反應(yīng) 濾紙崩解試驗(yàn)情況菌株編號(hào)培養(yǎng)液沉淀情況顆粒物分布狀況菌落顏色培養(yǎng)液液面有無菌落層濾紙崩解狀況培養(yǎng)液渾濁度BH19無稀薄極低BH314絮狀均勻少量+低BH331無少量極低BH520微量下層較多大量極低BH526無均勻少量極低BH536無少量極低BH634少量稀薄極低BL345中量上層較多黃色無+低BL465少量上層較多灰色少量極低BL5581大量上層較多黃紅色無++中度BL595中量均勻紅白交替無++中度BL599中量均勻無++中度BL5106微量均勻無+++高度，除了2株細(xì)菌BL5106一具有一定降解濾紙條的能力外，其他單菌株在連續(xù)8d的恒溫振蕩培養(yǎng)過程中不能使濾紙條崩解，這也可能是培養(yǎng)時(shí)間不夠長(zhǎng)，或是濾紙成分構(gòu)成的原因。.酶活力測(cè)定結(jié)果以520 nm 處測(cè)出的吸光度OD 值為縱坐標(biāo)，以葡萄糖含量(mg)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 對(duì)具有纖維素分解功能的菌株分別進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)，測(cè)定酶活力，其中菌株BL5106產(chǎn)纖維素酶活力最高， U/mL。C、120 r /min振蕩培養(yǎng)下的菌懸液吸光度只能略作結(jié)果的參考。 通過肉眼的觀察判斷，50176。在測(cè)定細(xì)菌生長(zhǎng)曲線時(shí)，通過觀察發(fā)現(xiàn)。C條件下，待到用時(shí)再取出，但要注意保存時(shí)間不宜過長(zhǎng)，通常為7 d。C3dBL599 30176。C3dBL345 30176。C3dBH520 50176。 其中BL5581是在純化BL558時(shí)被發(fā)現(xiàn)的，后來發(fā)現(xiàn)透明圈半徑比: BL558更大，就一直以此命名。C培養(yǎng)條件下的，選取透明圈半徑超過2 cm，透明圈與菌落半徑比值大于3的7株菌；30176。通過對(duì)近千個(gè)菌株的初篩，用羧甲基纖維素鈉鑒定培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，滴加革蘭氏碘液有透明圈的244株。葡萄糖量=[(mg/mL)?30 min]1/10式中 葡萄糖量：從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查的（mg）；1/10： 稀釋倍數(shù)；30： 糖化時(shí)間（min）。迅速冷卻試管， mL。C和30176。還原糖的測(cè)定：取刻度試管26只， mL，CMC緩沖液（檸檬酸緩沖液） mL。觀察其酶活力的分解強(qiáng)度，以+、—標(biāo)示作用情況，本方法是以肉眼觀察為主，主觀意識(shí)為主，結(jié)果的表示只能為試驗(yàn)提供參考，不能作評(píng)判的依據(jù)，但用于篩選目標(biāo)菌株有很大的適用性，再配以其他方法，不是為有效的手段。在520 nm 處測(cè)OD 值，測(cè)得OD 值后查閱葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出酶解所得葡萄糖含量，換算成酶活力值。C則在120 r /min下振蕩培養(yǎng)24 h，不同處理做3個(gè)重復(fù)。以葡萄糖質(zhì)量為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。取出后置于冷水浴中冷卻，在721G型分光光度計(jì)上比色。用721G可見分光光度計(jì)，在660 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。C條件下保存，以作下一步的研究[15]。C、50176。觀察培養(yǎng)皿上菌落形成情況，選取優(yōu)勢(shì)菌株和透明圈明顯的菌株，CMCNa培養(yǎng)基上用兩區(qū)劃線培養(yǎng)進(jìn)行分離和純化。 7．革蘭氏碘液： g、 g、 mL，將碘與碘化鉀先行混合，加入蒸餾水少許充分振搖，待完全溶解后， mL。5．葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：將葡萄糖放在110 176。量取0. 1 mol / L 檸檬溶液89. 5 mL，0. 1 mol/ L檸檬酸三鈉溶液110. 5 mL，混勻，即得pH 4. 80. 1 mo l/ L的檸檬酸緩沖液。以上培養(yǎng)基于121176。7．纖維素分解細(xì)菌產(chǎn)酶發(fā)酵培養(yǎng)液：、MgSO45． 濾紙崩解培養(yǎng)基： g、 g、NaCl g、 mL、調(diào)pH ， mL試管中，再加入濾紙（1cm6cm）。3H2O g、MgSO4C和50176。因?yàn)槲⑸镌囼?yàn)的主要對(duì)象是微生物，其中空格部分的理化性質(zhì)是無需檢測(cè)的指標(biāo)，理化性質(zhì)只是作為最后結(jié)果的一個(gè)比較參考。茅臺(tái)鎮(zhèn)被數(shù)目龐大的特殊微生物群籠罩其中，正是它們充當(dāng)了釀酒業(yè)的主力軍。2材料與方法樣品來源地茅臺(tái)鎮(zhèn)位于仁懷市赤水河畔，是茅臺(tái)酒、文臺(tái)酒的故鄉(xiāng)。秦廣利等[13]在酒糟中提取酒的研究也有了新發(fā)現(xiàn)，結(jié)果表明，在殘?jiān)阒刑砑永w維素酶10 U/g，于58176。最適產(chǎn)酶條件為：發(fā)酵時(shí)間72~ 96 h，發(fā)酵溫度25~ 30176。纖維小體附著在細(xì)菌細(xì)胞表面，所以細(xì)菌需要粘附在纖維上，使纖維小體在纖維的接觸點(diǎn)處對(duì)纖維素進(jìn)行水解，如熱纖梭菌（Clostridium thermocellum）。研究最多的是纖維單胞菌（Cellulomonas）[89]和熱纖梭菌（Clostridium thermocellum）。因而，篩選纖維素酶比活力高的菌株無疑具有重要的意義。酒糟生物質(zhì)主要由纖維素和木質(zhì)素構(gòu)成，同時(shí)含有一定的殘余糖分、淀粉、粗脂肪和蛋白質(zhì)[3]，因此，可利用具有降解纖維素的菌種對(duì)其進(jìn)行分解，把其中部分纖維素轉(zhuǎn)化為有機(jī)質(zhì)等，從而提高酒糟的綜合利用效率[4]。高溫振蕩培養(yǎng)的菌株在培養(yǎng)前期（12 h）生長(zhǎng)快于低溫靜置培養(yǎng)的菌株，但培養(yǎng)3 d后，二者生長(zhǎng)趨勢(shì)趨向一致，但中溫條件下篩選的部分菌株（BL5106）性能優(yōu)于高溫條件下篩選得到的菌株。本試驗(yàn)分別從50176。特此聲明。畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）中凡引用他人已經(jīng)發(fā)表或未發(fā)表的成果、數(shù)據(jù)、觀點(diǎn)等，均已明確注明出處。在這103株菌中， cm（30℃） cm（50℃）的菌株有20株。通過不同溫度分離篩選條件下得到的菌株分別在其對(duì)應(yīng)溫度下的生長(zhǎng)曲線可以看出，高溫振蕩培養(yǎng)的菌株會(huì)在試管表面長(zhǎng)出菌苔，菌液澄清，試管底部有沉淀；中溫靜置培養(yǎng)條件下的菌株菌液整體渾濁，分布均勻。由于酒糟酸