【正文】 反應結束后通過 ＤＡ 620。 2。所觀察的新生兒均無輸血及使用血液制品史。對抗 ＨＣＶ 或抗 ＨＧＶ 陽性者 ,再用熒光定量 ＰＣＲ (ＦＱ ＰＣＲ )方法檢測 ＨＣＶＲＮＡ 或 ＨＧＶＲＮＨＣＶＲＮＡ 和 ＨＧＶＲＮ Ａ均陽性 孕婦 10 例 ,其分娩的新生兒共 11 例。 4)歲。我們在對單純 ＨＣＶ 或 ＨＧＶ 母嬰傳播研究 [1]的基礎上 ,進一步探索普通孕婦 ＨＣＶ 和 ＨＧＶ 混合感染母嬰傳播的發(fā)生情況及影響因素 ,現(xiàn)報道如下。 （摘自：細胞與分子免疫學雜志， 2020年第 20卷第 6期 侯俊等） ３３ 丙型和庚型肝炎病毒混合感染母嬰傳播的研究 韓博 丙型肝炎病毒 (ＨＣＶ )或庚型肝炎病毒 (ＨＧＶ )均可通過母嬰傳播途徑造成胎、嬰兒感染 ,已得到許多研究證實。 討論： HIV1 p24 抗原的檢測是 AIDS 早期診斷、預后判斷，以及評價抗病毒的治療效果的重要指標之一。與 HBcAg、HCV陽性血清及 gp41Ag 均不產(chǎn)生交叉反應。亞類為 IgG1。經(jīng) 3 次克隆化后獲得 2 株陽性細胞株。表達產(chǎn)物純化后，進行 SDSPAGE，相對分子質(zhì)量約為 24000，表達并純化的 HIV1 p24 抗原具有良好的活性和特異性。 力測定：按文獻進行。 ： ELISA間接法測定。 mAb 的效價測定：間接 ELISA 法。 ：常規(guī)進行。 ：取小鼠脾細胞與 Sp2/0 細胞融合。 1 個月后，鼠尾靜脈采血，間接 ELISA 法測定特異性抗體的產(chǎn) 生。 ： ：初次免疫用 p24 蛋白（ 100ug/只）與完全福氏佐劑混勻后，背部及腹股溝多點皮下免疫 BALB/c 小鼠。而制備抗 HIV1 p24 單克隆抗體則是基礎。膠體金標記的快速診斷試劑與 ELISA 試劑相比操作簡便，快捷，不需特殊設備，沒有洗板過程，對環(huán)境無污染，適用于 HIV感染的診斷及流行病學調(diào)查。檢測時加入人血清后，20nmol/L 膠體金顆?？谷?IgG抗體結合物同時加入，經(jīng)過 5min孵育后，洗去未結合的膠體金顆粒，可分別讀取結 果。利用桿狀病毒 /昆蟲細胞系統(tǒng)，表達的重組蛋白生物活性及空間結構，與利用哺乳動物細胞表達的蛋白相近，且容易掌握，耗時較少。我們利用 BacNBlue Transfection 系統(tǒng)進行 HIV1 gp41及 HIV2 gp36 基因重組。血液中 P24抗原滴度 40mg/L是預后不良的標志。 P24 抗原在感染早期出現(xiàn)，當機體 P24 抗體產(chǎn)生后，抗原抗體復合的形成使 P24抗原滴度下降。 HIV 感染的婦女分娩后，新生兒從母體獲得 HIV 抗體可持續(xù)一年之久，而自身抗體的出現(xiàn)在 18個月之后，在這一時期，HIV抗體檢測結果并不能代表機體的感染狀況。與第 3代診斷試劑相比，可提前 12 周做出診斷。因而，必須同時標記 gp36 抗原，才能防止 HIV2 感染者漏診。 HIV1 跨膜基因 gp41抗原性較強，因而，通常用于診斷試劑的標記。 討 論 目前，第四代 HIV診斷試劑已 在歐洲通過注冊。 血清學的檢測結果 39 份已知血清標本中 HIV1感染者 27份， HIV1 急性感染者 3份，HIV2 感染者 3份， HIV 陰性血清 6 份。 診斷試劑的標記 從雜交瘤細胞株培養(yǎng)上清液中直接提取的 p24 單克隆抗體可達。經(jīng)特異性抗體 Western blot 檢３１ 測，確認為 gp41抗原及 gp36 抗原。第 4 天后擴增量明顯增多。第 7天細胞培養(yǎng)上清液病毒濃度達到 510PFU/cell。第 7天 50%細胞 死亡。 結 果 HIV1 gp41基因重組桿狀病毒及 HIV2 gp36基因重組桿狀病毒感染 High Five 昆蟲細胞后的改變第 2天部分細胞變型，核仁增大，細胞形態(tài)不規(guī)則。利用純化的抗原抗體進行標記，對39 份已知血清進行檢測 ，與荷蘭 Organon公司 HIV1+2 抗體、 p24 抗原、 ELISA 診斷試劑同時檢測結果進行比較，證實有較強的特異性及敏感性。結果通過重組桿狀病毒 昆蟲細胞系統(tǒng)進行 HIV1 gp41及 HIV2 gp36 抗原的表達，可獲取濃度為 ?？? HIV p24單克隆抗體雜交瘤細胞株，并制備抗 HIV p24 單克隆抗體。 目 的 研制可同時檢測 HIV HIV2 抗體及 p24 抗原快速診斷試劑。因而，使用單純檢測 HIV 抗體的診斷試劑進行 HIV 感染 篩查，必定會造成部分患者漏診。目前，通用的 HIV 診斷試劑只能檢測 HIV 抗體。只要試劑良好 ,操作規(guī)范 ,溶血標本不會使表面抗體、ｅ抗體的陽性和陰性結果出現(xiàn)變化，核心抗體稍加注意也不會有太大影響。大約 5%～ 10%的紅細胞破壞標本中Ｈｂ濃度才能達到 16ｇＬ 1 的情況下未出現(xiàn)假陽性 , 核心抗體檢測原倍溶血血清在一定Ｈｂ濃度范圍內(nèi)出現(xiàn)假陽性。Ｈｂ具有類過氧化物酶活性 ,有可能使包被孔吸附大量Ｈｂ而使底物顯色 ,導致檢測結果出現(xiàn)假陽性或假陰性。 1∶ 30 稀釋血清樣本用雙波長檢測 ,Ａ值均大于 ,各Ｈｂ濃度標本間Ａ值無明顯差異 (Ｐ ),陽性對照Ａ值為 ,陰性對照為 。Ｌ 1 溶血血清有 3 例陽性 ,10 例陰性 ,且Ａ值均在臨界值附近。 1ｇ 2. 核心抗體陰性血清檢測結果：用雙 波長檢測 ,1 4ｇ然后分別進行表面抗體、ｅ抗體和核心抗體檢測 ,測定各樣本Ａ值并進行相關性檢驗。再用同一健康人的血清 (未溶血 )進行倍比稀釋 ,分別配成含Ｈｂ濃度 1ｇＬ 1Ｈｂ液 50μｌ ,制成Ｈｂ濃度 16ｇ 3. 取 18 名學生靜脈血 5ｍｌ ,自然凝固后 ,吸出血清備用 (無溶血 )。取上清 ,用生理鹽水稀釋至 160ｇ 2. 制備不同濃度血紅蛋白血清：取一健康學生新鮮抗凝血 4ｍｌ ,用冷凍法造成溶血 ,3000ｒｐｍ離心 30ｍｉｎ。 目的： 模擬體外溶血造成血清中不同血紅蛋白濃度 ,來探討溶血對ＥＬＩＳＡ法檢測抗體的影響。 HPVLuminex 免疫分析方法是同時定量分析多種 HPV 基因型的抗體免疫反應的十分有效工具，可用于患者病史調(diào)查研究和預防疫苗的效力檢測。同時對 HPVLuminex 競爭免疫分析結果與放射性免疫分析結果進行比較。 方法： Luminex 的多元分析系統(tǒng)（ LabMAP3），將重組表達的 4 種 HPVL1 顆粒抗原分別偶聯(lián)到 4 種不同熒光的 Luminex 微球上，用 PE 標記型別特異的中和單抗，采用競爭法檢測血清的中和抗體。 HPV 特異性強，單一型別的疫苗保護率低，一種有效的 HPV疫苗可能需要多種不同的基因型，才能預防乳頭瘤病毒引起的多種癌癥， HPV 的 4 價疫 苗（ HPV 1 16 和 18）保護率在 80%以上。 （摘自《安徽醫(yī)科大學 學報》 1999年 4月； 34(2)： 121122張曉微） ２８ 多元 Luminex 檢測系統(tǒng)能同時 定量 HPV6,11,16 和 18 病毒樣顆粒型特異性中和表位抗體 葉祥忠 背景： 迄今為止，已分離到 100 多種人乳頭瘤病毒，其中低危型 HPV，如 HPV 11 引發(fā)尖銳濕疣，高危型 HPV，如 HPV1 18 引發(fā)宮頸癌。這部分個體抗體水平輕度增高，雖不能完全排除實驗抗原所致的原因，我們認為結核菌隱性感染所致的可能性也很大，酶聯(lián)法為隱性結核菌感染提供了新的判斷依據(jù)，文獻報道血清結核抗體的水平與病情相關，隨著病情的恢復 ,結核抗體可以轉(zhuǎn)陰，故對于這部分個體建議定期查體，復測抗體，可能在結核病預防和早期治療方面有重要價值。故可認為 ELISA 檢測血清結核抗體對活動性結核病診斷具有較高的臨床價值。 四． 結論 血清抗 PPDIgG 檢測是活動性結核病一項有價值的診斷方法，并可用于評價結核病治療的轉(zhuǎn)歸。 三． 結果 肺結核組：有 33 例血清抗體陰性，假陰性率 %； 非結核病對照組：有 14 例血清抗體陽性，假陽性率為 %。肺結核組：各類活動性結核病患者193 例；非結核病對照組： 138 例。 二． 方法 采用快速酶聯(lián)吸附法（ ELISA）檢測血清抗 PPDIgG 在各類結核病中的特異性、敏感性及２７ 與痰菌、病情的關系。 （摘自： Ivonne 國外獸醫(yī)學 — 畜禽傳染病 第 15卷第 4期 1995年 11月） ELISA 檢測結核 IgG 抗體對結核病的診斷價值 趙昱 一． 目的 應用 ELISA 法檢測抗結核分支桿菌抗體，對結核病的診斷具有一定的意義?，F(xiàn)地 FMD暴發(fā)后，如果粘膜抗體陽性，動物已被感染；抗體為陰性，不可能帶毒。本試驗結果證實，中和抗體和 IgA測定適于檢測在現(xiàn)地緊急接種后 FMDV感染和可能帶毒的牛，適于檢測粘膜分泌物中的微量特異性抗體．這些樣品一般具有游離細胞、蛋白酶及組織顆粒含量高的特點，這在 ELISA中常引起大量的背景反應。 結果與討論： 接苗動物的血清 1gG抗體可能推遲感染后的粘膜反應。 (3)用高免型特異兔抗血清將滅活的 FMDV抗原捕獲到 ELISA板上。 (2)用高免型特異兔抗血清將滅活的 FMDV抗原捕獲到ELISA板上。 方法： (1)將純化、滅活的 FMDV 146S抗原 (5ug／ ml)吸附到 ELISA板上。 2．對于 AFP定量 ELISA kit來說，被測物的濃度同樣實根據(jù)標準曲線計算求出的，因此要保證標準品這一參數(shù)的穩(wěn)定，用質(zhì)控品來監(jiān)測其穩(wěn)定性是切實易行并且有效的方法 。 分析 : AFP,還包括其他產(chǎn)品 ,我們同樣要建立完善的室內(nèi)質(zhì)控品。尤其是腫瘤標志物的檢測 ,結果的準 確性和可靠性除了有其重要的臨床價值外 ,還具有深刻的社會意義 ,因此對腫瘤標志物的檢測應格外的重視。它既可反映試劑盒穩(wěn)定性 ,又可反映操作者的技術水平 ,還可以對每批測定結果的可信性作出判斷。腫瘤標志物 20次測定標準曲線參數(shù) 的監(jiān)測結果AFP 5個參數(shù)依次為 ， ， ， ， ； CEA 5個參數(shù)依次為 ， ， ， ， 。 2．腫瘤標志物測定標準曲線參數(shù)的監(jiān)測結果：在 RIA中，常用的標準曲線參數(shù)有零標準結合率 (Ｂ 0%),非特異性結合率 (ＮＳＢ %)以及（ＥＤ 80、ＥＤ 50、ＥＤ 20） 3個有效劑量值共 5個參數(shù)。 AFP3種質(zhì)控血清實測值與靶值偏差（ %）為 , , 。質(zhì)控血清由廠家隨試劑盒提供。 方法： AFP、 CEA RIA kit 按說明書操作。 結論 初步建立了檢測 H5 亞型禽流感病毒的單抗 — 生物素捕獲 ELISA 方法 ,為研制試劑盒和進一步應用試驗提供了基礎。ELISA 對 H5 亞型 AIV 的檢出限為 個血凝單位。 特異 性和敏感性測定 : 選取最適宜的包被抗體及其最適包被濃度 ,采用生物素 酶標鏈酶親 和素系統(tǒng) ,檢測 H1～ H15 亞型 AIV 標準株和 H H H9 亞型 AIV 分離株 ,測試初步建立的抗原捕獲 ELISA 反應體系的敏感性和特異性。用 SPF 雞胚尿囊液和稀釋至32HA 的 H7N2 AIV 尿囊液作對照 ,在反應板孔中加入經(jīng)倍比稀釋的 H5N1 AIV 尿囊液 ,其余檢測步驟同上。 每孔加入 100 μ l 1∶ 1 000稀釋的 HRP 標記單抗 ,37 ℃孵育 90 min ,PBST洗板 5 次 ,顯色 15 min ,測定 A450值。 捕獲抗體的選擇 : 分別將 H5 亞型病毒高免血清 ,單抗腹水 ,純化單抗作系列稀釋 ,包被 96 孔酶標板 。按 BCNHS: IgG的容積比為 1 : 混合 ,室溫攪拌條件下反應 4 h 。 方法 長臂活化生物素 (BCNHS) 標 記抗體的制備 :用 DMSO 將 BCNHS 配成 1 mg/ml 的溶液 。本研究在已制備的抗 H5 亞型 AIV 單克隆抗體的基礎上 ,建立檢測 H5 亞型禽流感病毒的單抗介導、生物素放大的捕獲 ELISA ,期望進一步研制出用于禽流感臨床診斷和病原學監(jiān)測的、特異、簡便和易于推廣的免疫學技術。為了解決這個問題 ,國內(nèi)外利用抗 H5 亞型禽流感病毒的單克隆抗體(Monoclonal Antibody ,McAb) , 建立了免疫熒光檢測技術 ,但該方法需昂貴設備 ,結果易受主觀影響 ,難以在常規(guī)工作中應用。病原學檢測方法 — 雞胚分離病毒是檢測病禽組織中禽流感病毒 (Avian InfluenzaVirus ,AIV) 的一種經(jīng)典、準確、敏感的方法 ,但耗時長 ,不利于禽流感病毒的快速診斷。禽流感的臨診癥狀變化很大 ,臨床診斷常難以定性 ,必須進行實驗室病原學、血清學和分子生物學診斷。各型肝炎之間無交叉免疫，當出現(xiàn)重疊感 染時可加重病情及延長病程；乙肝與戊肝重疊感染者癥狀持續(xù)時間長、肝功能損害明顯。臨床資料顯示：戊肝多見于中老年，有 % ALT 先恢復正常，爾后黃疸消退；甲肝以青壯年多見，有 %患者黃疸先消退，爾后谷丙轉(zhuǎn)氨酶 (ALT)恢復正 常。發(fā)病多為 8~10月份與甲肝發(fā)病月份相似。 （摘自：中華醫(yī)學檢驗雜志 2020年 7月第 24卷第 4期） 盧龍縣戊性肝炎流行特征調(diào)查 蔡芳 為了解本地區(qū)戊型肝炎 (HE)流行特征， 1994年 5月至 1995年 4月對 1 57例散發(fā)性肝炎病人和 57例急性暴發(fā)流行的肝炎病人進行戊性肝炎的病原和流行病學調(diào)查。一次性加樣頭的使用及流動沖洗過程，徹底避免了交叉污染。而酶聯(lián)免疫法