【正文】 們的標(biāo)本量少的緣故。在全國(guó)各大小醫(yī)院里 ,ELISA法以其經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)便、易于開(kāi)展和掌握已成為確診乙型肝炎最直接的實(shí)驗(yàn)診斷方法 ,其結(jié)果具有相當(dāng)?shù)目尚判浴? （摘自《臨床薈萃》 2020年第 15卷第 15期） ２１ 電化學(xué)發(fā)光與酶聯(lián)免疫檢測(cè)血清甲胎蛋白的比較 梁崴 背景介紹：目前，臨床實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢測(cè)血清甲胎蛋白（ AFP）多采用酶聯(lián)免疫法。 儀器與試劑：全自動(dòng)酶免疫分析系統(tǒng) ES300 和全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)Elecsys2020 及其配套試劑，質(zhì)控品，羅氏公司提供。 回收率：用電化學(xué)發(fā)光法與酶聯(lián)法測(cè)得平均回收率 。磁性微珠包被技術(shù)的應(yīng)用提高了檢測(cè)的靈敏度。 試劑穩(wěn)定性好，有效期長(zhǎng)。一次性加樣頭的使用及流動(dòng)沖洗過(guò)程，徹底避免了交叉污染。發(fā)病多為 8~10月份與甲肝發(fā)病月份相似。各型肝炎之間無(wú)交叉免疫，當(dāng)出現(xiàn)重疊感 染時(shí)可加重病情及延長(zhǎng)病程；乙肝與戊肝重疊感染者癥狀持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)、肝功能損害明顯。病原學(xué)檢測(cè)方法 — 雞胚分離病毒是檢測(cè)病禽組織中禽流感病毒 (Avian InfluenzaVirus ,AIV) 的一種經(jīng)典、準(zhǔn)確、敏感的方法 ,但耗時(shí)長(zhǎng) ,不利于禽流感病毒的快速診斷。本研究在已制備的抗 H5 亞型 AIV 單克隆抗體的基礎(chǔ)上 ,建立檢測(cè) H5 亞型禽流感病毒的單抗介導(dǎo)、生物素放大的捕獲 ELISA ,期望進(jìn)一步研制出用于禽流感臨床診斷和病原學(xué)監(jiān)測(cè)的、特異、簡(jiǎn)便和易于推廣的免疫學(xué)技術(shù)。按 BCNHS: IgG的容積比為 1 : 混合 ,室溫?cái)嚢钘l件下反應(yīng) 4 h 。 每孔加入 100 μ l 1∶ 1 000稀釋的 HRP 標(biāo)記單抗 ,37 ℃孵育 90 min ,PBST洗板 5 次 ,顯色 15 min ,測(cè)定 A450值。 特異 性和敏感性測(cè)定 : 選取最適宜的包被抗體及其最適包被濃度 ,采用生物素 酶標(biāo)鏈酶親 和素系統(tǒng) ,檢測(cè) H1～ H15 亞型 AIV 標(biāo)準(zhǔn)株和 H H H9 亞型 AIV 分離株 ,測(cè)試初步建立的抗原捕獲 ELISA 反應(yīng)體系的敏感性和特異性。 結(jié)論 初步建立了檢測(cè) H5 亞型禽流感病毒的單抗 — 生物素捕獲 ELISA 方法 ,為研制試劑盒和進(jìn)一步應(yīng)用試驗(yàn)提供了基礎(chǔ)。質(zhì)控血清由廠家隨試劑盒提供。 2．腫瘤標(biāo)志物測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)參數(shù)的監(jiān)測(cè)結(jié)果：在 RIA中，常用的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)參數(shù)有零標(biāo)準(zhǔn)結(jié)合率 (Ｂ 0%),非特異性結(jié)合率 (ＮＳＢ %)以及（ＥＤ 80、ＥＤ 50、ＥＤ 20） 3個(gè)有效劑量值共 5個(gè)參數(shù)。它既可反映試劑盒穩(wěn)定性 ,又可反映操作者的技術(shù)水平 ,還可以對(duì)每批測(cè)定結(jié)果的可信性作出判斷。 分析 : AFP,還包括其他產(chǎn)品 ,我們同樣要建立完善的室內(nèi)質(zhì)控品。 方法： (1)將純化、滅活的 FMDV 146S抗原 (5ug／ ml)吸附到 ELISA板上。 (3)用高免型特異兔抗血清將滅活的 FMDV抗原捕獲到 ELISA板上。本試驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，中和抗體和 IgA測(cè)定適于檢測(cè)在現(xiàn)地緊急接種后 FMDV感染和可能帶毒的牛，適于檢測(cè)粘膜分泌物中的微量特異性抗體．這些樣品一般具有游離細(xì)胞、蛋白酶及組織顆粒含量高的特點(diǎn)，這在 ELISA中常引起大量的背景反應(yīng)。 （摘自： Ivonne 國(guó)外獸醫(yī)學(xué) — 畜禽傳染病 第 15卷第 4期 1995年 11月） ELISA 檢測(cè)結(jié)核 IgG 抗體對(duì)結(jié)核病的診斷價(jià)值 趙昱 一． 目的 應(yīng)用 ELISA 法檢測(cè)抗結(jié)核分支桿菌抗體，對(duì)結(jié)核病的診斷具有一定的意義。肺結(jié)核組：各類(lèi)活動(dòng)性結(jié)核病患者193 例；非結(jié)核病對(duì)照組： 138 例。 四． 結(jié)論 血清抗 PPDIgG 檢測(cè)是活動(dòng)性結(jié)核病一項(xiàng)有價(jià)值的診斷方法，并可用于評(píng)價(jià)結(jié)核病治療的轉(zhuǎn)歸。這部分個(gè)體抗體水平輕度增高，雖不能完全排除實(shí)驗(yàn)抗原所致的原因，我們認(rèn)為結(jié)核菌隱性感染所致的可能性也很大，酶聯(lián)法為隱性結(jié)核菌感染提供了新的判斷依據(jù)，文獻(xiàn)報(bào)道血清結(jié)核抗體的水平與病情相關(guān)，隨著病情的恢復(fù) ,結(jié)核抗體可以轉(zhuǎn)陰，故對(duì)于這部分個(gè)體建議定期查體，復(fù)測(cè)抗體，可能在結(jié)核病預(yù)防和早期治療方面有重要價(jià)值。 HPV 特異性強(qiáng)，單一型別的疫苗保護(hù)率低，一種有效的 HPV疫苗可能需要多種不同的基因型，才能預(yù)防乳頭瘤病毒引起的多種癌癥， HPV 的 4 價(jià)疫 苗（ HPV 1 16 和 18）保護(hù)率在 80%以上。同時(shí)對(duì) HPVLuminex 競(jìng)爭(zhēng)免疫分析結(jié)果與放射性免疫分析結(jié)果進(jìn)行比較。 目的： 模擬體外溶血造成血清中不同血紅蛋白濃度 ,來(lái)探討溶血對(duì)ＥＬＩＳＡ法檢測(cè)抗體的影響。取上清 ,用生理鹽水稀釋至 160ｇＬ 1Ｈｂ液 50μｌ ,制成Ｈｂ濃度 16ｇ然后分別進(jìn)行表面抗體、ｅ抗體和核心抗體檢測(cè) ,測(cè)定各樣本Ａ值并進(jìn)行相關(guān)性檢驗(yàn)。 1ｇ 1∶ 30 稀釋血清樣本用雙波長(zhǎng)檢測(cè) ,Ａ值均大于 ,各Ｈｂ濃度標(biāo)本間Ａ值無(wú)明顯差異 (Ｐ ),陽(yáng)性對(duì)照Ａ值為 ,陰性對(duì)照為 。Ｌ 1 的情況下未出現(xiàn)假陽(yáng)性 , 核心抗體檢測(cè)原倍溶血血清在一定Ｈｂ濃度范圍內(nèi)出現(xiàn)假陽(yáng)性。只要試劑良好 ,操作規(guī)范 ,溶血標(biāo)本不會(huì)使表面抗體、ｅ抗體的陽(yáng)性和陰性結(jié)果出現(xiàn)變化，核心抗體稍加注意也不會(huì)有太大影響。因而，使用單純檢測(cè) HIV 抗體的診斷試劑進(jìn)行 HIV 感染 篩查，必定會(huì)造成部分患者漏診?？? HIV p24單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株，并制備抗 HIV p24 單克隆抗體。利用純化的抗原抗體進(jìn)行標(biāo)記，對(duì)39 份已知血清進(jìn)行檢測(cè) ，與荷蘭 Organon公司 HIV1+2 抗體、 p24 抗原、 ELISA 診斷試劑同時(shí)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較，證實(shí)有較強(qiáng)的特異性及敏感性。第 7天 50%細(xì)胞 死亡。第 4 天后擴(kuò)增量明顯增多。 診斷試劑的標(biāo)記 從雜交瘤細(xì)胞株培養(yǎng)上清液中直接提取的 p24 單克隆抗體可達(dá)。 討 論 目前，第四代 HIV診斷試劑已 在歐洲通過(guò)注冊(cè)。因而，必須同時(shí)標(biāo)記 gp36 抗原，才能防止 HIV2 感染者漏診。 HIV 感染的婦女分娩后，新生兒從母體獲得 HIV 抗體可持續(xù)一年之久，而自身抗體的出現(xiàn)在 18個(gè)月之后，在這一時(shí)期，HIV抗體檢測(cè)結(jié)果并不能代表機(jī)體的感染狀況。血液中 P24抗原滴度 40mg/L是預(yù)后不良的標(biāo)志。利用桿狀病毒 /昆蟲(chóng)細(xì)胞系統(tǒng)，表達(dá)的重組蛋白生物活性及空間結(jié)構(gòu)，與利用哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)的蛋白相近，且容易掌握，耗時(shí)較少。膠體金標(biāo)記的快速診斷試劑與 ELISA 試劑相比操作簡(jiǎn)便，快捷，不需特殊設(shè)備，沒(méi)有洗板過(guò)程，對(duì)環(huán)境無(wú)污染，適用于 HIV感染的診斷及流行病學(xué)調(diào)查。 ： ：初次免疫用 p24 蛋白（ 100ug/只）與完全福氏佐劑混勻后，背部及腹股溝多點(diǎn)皮下免疫 BALB/c 小鼠。 ：取小鼠脾細(xì)胞與 Sp2/0 細(xì)胞融合。 mAb 的效價(jià)測(cè)定：間接 ELISA 法。 力測(cè)定：按文獻(xiàn)進(jìn)行。經(jīng) 3 次克隆化后獲得 2 株陽(yáng)性細(xì)胞株。與 HBcAg、HCV陽(yáng)性血清及 gp41Ag 均不產(chǎn)生交叉反應(yīng)。 （摘自：細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志， 2020年第 20卷第 6期 侯俊等） ３３ 丙型和庚型肝炎病毒混合感染母嬰傳播的研究 韓博 丙型肝炎病毒 (ＨＣＶ )或庚型肝炎病毒 (ＨＧＶ )均可通過(guò)母嬰傳播途徑造成胎、嬰兒感染 ,已得到許多研究證實(shí)。 4)歲。所觀察的新生兒均無(wú)輸血及使用血液制品史。反應(yīng)結(jié)束后通過(guò) ＤＡ 620。 2。對(duì)抗 ＨＣＶ 或抗 ＨＧＶ 陽(yáng)性者 ,再用熒光定量 ＰＣＲ (ＦＱ ＰＣＲ )方法檢測(cè) ＨＣＶＲＮＡ 或 ＨＧＶＲＮＨＣＶＲＮＡ 和 ＨＧＶＲＮ Ａ均陽(yáng)性 孕婦 10 例 ,其分娩的新生兒共 11 例。我們?cè)趯?duì)單純 ＨＣＶ 或 ＨＧＶ 母嬰傳播研究 [1]的基礎(chǔ)上 ,進(jìn)一步探索普通孕婦 ＨＣＶ 和 ＨＧＶ 混合感染母嬰傳播的發(fā)生情況及影響因素 ,現(xiàn)報(bào)道如下。 討論： HIV1 p24 抗原的檢測(cè)是 AIDS 早期診斷、預(yù)后判斷，以及評(píng)價(jià)抗病毒的治療效果的重要指標(biāo)之一。亞類(lèi)為 IgG1。表達(dá)產(chǎn)物純化后，進(jìn)行 SDSPAGE，相對(duì)分子質(zhì)量約為 24000，表達(dá)并純化的 HIV1 p24 抗原具有良好的活性和特異性。 ： ELISA間接法測(cè)定。 ：常規(guī)進(jìn)行。 1 個(gè)月后，鼠尾靜脈采血，間接 ELISA 法測(cè)定特異性抗體的產(chǎn) 生。而制備抗 HIV1 p24 單克隆抗體則是基礎(chǔ)。檢測(cè)時(shí)加入人血清后，20nmol/L 膠體金顆?？谷?IgG抗體結(jié)合物同時(shí)加入，經(jīng)過(guò) 5min孵育后，洗去未結(jié)合的膠體金顆粒，可分別讀取結(jié) 果。我們利用 BacNBlue Transfection 系統(tǒng)進(jìn)行 HIV1 gp41及 HIV2 gp36 基因重組。 P24 抗原在感染早期出現(xiàn)，當(dāng)機(jī)體 P24 抗體產(chǎn)生后，抗原抗體復(fù)合的形成使 P24抗原滴度下降。與第 3代診斷試劑相比，可提前 12 周做出診斷。 HIV1 跨膜基因 gp41抗原性較強(qiáng)，因而，通常用于診斷試劑的標(biāo)記。 血清學(xué)的檢測(cè)結(jié)果 39 份已知血清標(biāo)本中 HIV1感染者 27份， HIV1 急性感染者 3份，HIV2 感染者 3份， HIV 陰性血清 6 份。經(jīng)特異性抗體 Western blot 檢３１ 測(cè)，確認(rèn)為 gp41抗原及 gp36 抗原。第 7天細(xì)胞培養(yǎng)上清液病毒濃度達(dá)到 510PFU/cell。 結(jié) 果 HIV1 gp41基因重組桿狀病毒及 HIV2 gp36基因重組桿狀病毒感染 High Five 昆蟲(chóng)細(xì)胞后的改變第 2天部分細(xì)胞變型，核仁增大，細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則。結(jié)果通過(guò)重組桿狀病毒 昆蟲(chóng)細(xì)胞系統(tǒng)進(jìn)行 HIV1 gp41及 HIV2 gp36 抗原的表達(dá)，可獲取濃度為 。 目 的 研制可同時(shí)檢測(cè) HIV HIV2 抗體及 p24 抗原快速診斷試劑。目前，通用的 HIV 診斷試劑只能檢測(cè) HIV 抗體。大約 5%～ 10%的紅細(xì)胞破壞標(biāo)本中Ｈｂ濃度才能達(dá)到 16ｇＨｂ具有類(lèi)過(guò)氧化物酶活性 ,有可能使包被孔吸附大量Ｈｂ而使底物顯色 ,導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性。Ｌ 1 溶血血清有 3 例陽(yáng)性 ,10 例陰性 ,且Ａ值均在臨界值附近。 2. 核心抗體陰性血清檢測(cè)結(jié)果：用雙 波長(zhǎng)檢測(cè) ,1 4ｇ再用同一健康人的血清 (未溶血 )進(jìn)行倍比稀釋 ,分別配成含Ｈｂ濃度 1ｇ 3. 取 18 名學(xué)生靜脈血 5ｍｌ ,自然凝固后 ,吸出血清備用 (無(wú)溶血 )。 2. 制備不同濃度血紅蛋白血清：取一健康學(xué)生新鮮抗凝血 4ｍｌ ,用冷凍法造成溶血 ,3000ｒｐｍ離心 30ｍｉｎ。 HPVLuminex 免疫分析方法是同時(shí)定量分析多種 HPV 基因型的抗體免疫反應(yīng)的十分有效工具，可用于患者病史調(diào)查研究和預(yù)防疫苗的效力檢測(cè)。 方法： Luminex 的多元分析系統(tǒng)（ LabMAP3），將重組表達(dá)的 4 種 HPVL1 顆?？乖謩e偶聯(lián)到 4 種不同熒光的 Luminex 微球上，用 PE 標(biāo)記型別特異的中和單抗，采用競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)血清的中和抗體。 （摘自《安徽醫(yī)科大學(xué) 學(xué)報(bào)》 1999年 4月； 34(2)： 121122張曉微） ２８ 多元 Luminex 檢測(cè)系統(tǒng)能同時(shí) 定量 HPV6,11,16 和 18 病毒樣顆粒型特異性中和表位抗體 葉祥忠 背景： 迄今為止，已分離到 100 多種人乳頭瘤病毒，其中低危型 HPV，如 HPV 11 引發(fā)尖銳濕疣，高危型 HPV，如 HPV1 18 引發(fā)宮頸癌。故可認(rèn)為 ELISA 檢測(cè)血清結(jié)核抗體對(duì)活動(dòng)性結(jié)核病診斷具有較高的臨床價(jià)值。 三． 結(jié)果 肺結(jié)核組：有 33 例血清抗體陰性，假陰性率 %； 非結(jié)核病對(duì)照組：有 14 例血清抗體陽(yáng)性，假陽(yáng)性率為 %。 二． 方法 采用快速酶聯(lián)吸附法（ ELISA）檢測(cè)血清抗 PPDIgG 在各類(lèi)結(jié)核病中的特異性、敏感性及２７ 與痰菌、病情的關(guān)系?，F(xiàn)地 FMD暴發(fā)后，如果粘膜抗體陽(yáng)性，動(dòng)物已被感染；抗體為陰性，不可能帶毒。 結(jié)果與討論： 接苗動(dòng)物的血清 1gG抗體可能推遲感染后的粘膜反應(yīng)。 (2)用高免型特異兔抗血清將滅活的 FMDV抗原捕獲到ELISA板上。 2．對(duì)于 AFP定量 ELISA kit來(lái)說(shuō)，被測(cè)物的濃度同樣實(shí)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算求出的，因此要保證標(biāo)準(zhǔn)品這一參數(shù)的穩(wěn)定，用質(zhì)控品來(lái)監(jiān)測(cè)其穩(wěn)定性是切實(shí)易行并且有效的方法 。尤其是腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè) ,結(jié)果的準(zhǔn) 確性和可靠性除了有其重要的臨床價(jià)值外 ,還具有深刻的社會(huì)意義 ,因此對(duì)腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)應(yīng)格外的重視。腫瘤標(biāo)志物 20次測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)參數(shù) 的監(jiān)測(cè)結(jié)果AFP 5個(gè)參數(shù)依次為 ， ， ， ， ； CEA 5個(gè)參數(shù)依次為 ， ， ， ， 。 AFP3種質(zhì)控血清實(shí)測(cè)值與靶值偏差（ %）為 , , 。 方法： AFP、 CEA RIA kit 按說(shuō)明書(shū)操作。ELISA 對(duì) H5 亞型 AIV 的檢出限為 個(gè)血凝單位。用 SPF 雞胚尿囊液和稀釋至32HA 的 H7N2 AIV 尿囊液作對(duì)照 ,在反應(yīng)板孔中加入經(jīng)倍比稀釋的 H5N1 AIV 尿囊液 ,其余檢測(cè)步驟同上。 捕獲抗體的選擇 : 分別將 H5 亞型病毒高免血清 ,單抗腹水 ,純化單抗作系列稀釋 ,包被 96 孔酶標(biāo)板 。 方法 長(zhǎng)臂活化生物素 (BCNHS) 標(biāo) 記抗體的制備 :用 DMSO 將 BCNHS 配成 1 mg/ml 的溶液 。為了解決這個(gè)問(wèn)題 ,國(guó)內(nèi)外利用抗 H5 亞型禽流感病毒的單克隆抗體(Monoclonal Antibody ,McAb)