【正文】 ３０ 抗 HIV1核心抗原 P24單克隆抗體的制備及特性的初步鑒定 ３２ 丙型和庚型肝炎病毒混合感染母嬰傳播的研究 ３３ 重組ＧＭ ＣＳＦ /ＩＬ 3融合蛋白的純化 ３５ 流感病毒裂解疫苗 ３６ 應(yīng)用疫苗中的鋁佐劑研究 ３８ 超聲破碎重組大腸桿菌釋放包含體 的過程研究 ３９ 以膜為固相載體的免疫膠體金快速試驗 ４０ 光照對 ELISA試驗結(jié)果的影響 ４３ 膠體金診斷試劑盒中層析膜材料性能的分析 ４５ 利用ＭＯＮＩＣＡ質(zhì)控圖進行ＥＬＩＳＡ操作 考核的探討 ４６ ELISA用血清標本的采集與保存 ４８ ELISA實驗質(zhì)量控制問題 ４９ 光照對 ELISA試驗結(jié)果的影響 ５１ HIV抗體快速診斷試劑與酶聯(lián)免疫診斷試劑 ５３ 靈敏度比較 ５３ 丙型肝炎病毒抗體酶聯(lián)免疫吸附試驗 ５４ 陽性判斷值在獻血員血液篩檢中的意義 ５４ ６ 結(jié)核抗體檢測對肺結(jié)核病診斷價值的探討 ５４ 客戶管理的目的 ５６ 銷售心得 ５８ 談贏得客戶與保持客戶 ５９ 萬泰 與國際貿(mào)易 ６２ 意念的較量 ６５ 如何維系客戶策略探討 搞好服務(wù)質(zhì)量是關(guān)鍵 ６６ IMMUNODIAGNOSTIC ASSAY DEVELOPMENT PARTNERSHIPS WITH FOREIGN COMPANIES ６９ (與國外公司合作開發(fā)免疫診斷試劑 ) ６９ “萬科新榮”領(lǐng)風騷 － 四公司網(wǎng)頁對比 ７３ 關(guān)于如何有效管理駐外市場營銷人員的分析 ７６ ７ 甲胎蛋白的結(jié)構(gòu)與功能 開發(fā)部 喬杉 甲胎蛋白 (AFP)是一血清糖基化蛋白，屬于類白蛋白。１ 2020年第一期 ２ 科學為本 關(guān)注健康 ３ 卷首語 我 是 學 生 當我想清楚了我是學生以后，我是何等地快樂??！這不但是一種身份也是我的世界觀、人生觀、性格與情感的一部分，非常重要的有機組成部分。它是建設(shè)性的文化品格的體現(xiàn)，它是力求接受、學到、發(fā)明和發(fā)現(xiàn)新知識、新觀點、新角度的。 AFP有很多重要的生理功能，最基本的就是運輸脂肪酸。 AFP的變性中間體：在活細胞中的 AFP分子的結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)出一個可溶的球樣的構(gòu)像 (MGF)。 ) ８ H5 型禽流感病毒的預(yù)防及病毒學檢測方法 王勇 禽流感是由正粘病毒科流感病毒屬中的 A 型流感病毒引起的、發(fā)生于各種家禽和 野禽的病毒性傳染病。病毒表面有 10～ 12納米的密集釘狀物或纖突覆蓋，病毒囊膜內(nèi)有螺旋形核衣殼。其毒力主要取決于病毒粒子的復制速度和血凝素蛋白裂解位點附近的氨基酸組成，臨床表現(xiàn)的變化主要是由于感染不同亞型的緣故。此外，禽流感病毒可以在自然環(huán)境中，特別是涼爽和潮濕的條件下存活很長時間。分析歷史上發(fā)生的禽流感病例的年齡，兒童居多，這可能是由于兒童接觸雞、鳥類及其排泄物機會多造成的。 酶標法 H5型流感病毒 HA抗原原理： 本試劑盒采用雙抗體夾心法檢測標本中的 H5型流感病毒 HA抗原。 酶標檢測比金標試劑盒具有更高的靈敏度，可達到 1： 10000的檢出率，而且指針對 H5型流感病毒。 IFT最早用于病毒的鑒定和定位病毒感染細胞中特異性抗原，主要是核內(nèi)熒光；用 MP抗原的熒光抗體主要出現(xiàn)胞質(zhì)熒光，核內(nèi)也有部分熒光。從定性到定量，快速診斷應(yīng)該更多的用于現(xiàn)場監(jiān)測，而 RTPCR，免疫熒光， ＮＡＳＢＡ檢測方法 更適用于實驗室確認實驗。 1 材料與方法 血清標本 標本 797份采自來本站獻血的獻血者。三種間接 酶免法試劑的陽性率經(jīng)配對統(tǒng)計處理χ 2=， P﹥ ，均無差異。此外，北京試劑能以較高的 S/CO值檢出美國 BBI HTLV Panel全部陽性血清，說明其靈敏度明顯高于國外試劑。在與喀麥隆接壤的中非共和國地區(qū)，迄今尚未鑒定出 HIV— O，其他的非洲國家尚無研究報道。純化 HIV制備的試劑現(xiàn)今已不再應(yīng)用。另一方法是在提供的免疫印跡試驗試劑中加入具有反應(yīng)性的保守區(qū)肽，這樣可排除抗 HIV— O標本的漏檢。獼猴的分支形成白面猴、狒狒和山魈，與 HIV— 2／ SIV— 2有緊密的聯(lián)系，人科 (黑猩猩與人類 )則伴有 HIV— 1／ SIV— l感染，亞洲猿 (馬來猩猩、長臀猿和獼猴 )不感染 SIV，同樣南美猿也不受感染，這些種系顯然是在 3000萬年前，從共同的靈長目分支出來的，亞洲的獼猴如同狒狒群體一樣，伴有 STLV— l感染，這是一種與 HTLV— l相似的致癌性逆轉(zhuǎn)錄病毒。 結(jié)果 :自制的 GIFA紙條法檢測 645份血清標本 ,與 ELISA、 RIA法作對比 ,符合率分別為 %、%、 %,最低檢測濃度分別為 2ng/ml、 1ng/ml、 1ng/ml。 3次檢測用同一批號試劑，嚴格按說明書方法判斷陰陽性結(jié)果。 有助于確定乙肝患者、無病狀 HBV攜帶者及孕婦的傳染性強弱 。據(jù)報道 ,此種血清熱聚變 IgG中和 HBeAg可轉(zhuǎn)陰 ,或用 F(ab)2片段制備的酶結(jié)合物 ,也可除去 RF的干擾。 有文獻報道 [3],高滴度的 HBsAg易發(fā)生假陰性 ,即鉤狀效應(yīng)或前帶現(xiàn)象 ,用生理鹽水稀釋后可排除干擾 ,我們做了 1∶ 10,1∶ 20,1∶ 100倍血清稀釋后 ,結(jié)果未變。傳統(tǒng)的肝功能實驗僅檢測 HBsAg,而不檢測其他 4項 HBV標記物 ,按照我們的發(fā)現(xiàn)來估計 ,會有相當量的乙肝患者的漏診 ! 個人小結(jié)： 據(jù)上述文獻所報道就我公司 HBeAg項目前所出現(xiàn)的問題來分析，造成假陽性的原因是否與上述 7種原因有關(guān)，是否說明有一些假陽性是酶標試劑所共同存在的必然結(jié)果，針對此文摘所講述的內(nèi)容并結(jié)合目前我公司 HBeAg項目存在的假陽性問題，通過系統(tǒng)調(diào)整可以解決一部分假陽性問題，那么無法解決的假陽性問題是否與上述 7種原因有關(guān)，我們的假陽性問題主要還是與原料有關(guān)，原料本身所造成的假陽性解決起來有一 定難度，是否可以找一些大量的 HBeAb強陽性的血清進行沉淀，純化，然后標記再進行檢測，若可行的話，是否可以減少原料所造成的假陽性問題。 相關(guān)性：結(jié)果表明，兩法差異無顯著性，兩法相關(guān)性良好。發(fā)光信號檢測的寬線性加上獨特的標記物本身循環(huán)發(fā)光，使電化學發(fā)光檢２２ 測的線性范圍更寬。結(jié)果：散發(fā)性急性肝炎中戊型肝炎感染率為 %，急性爆發(fā)肝炎病人中戊肝感染率為 %，沒有顯著性差異，流行特點為散發(fā)； 31例（占 100%）戊型肝炎病人均有接觸肝炎病人史和不潔飲食史；與甲肝混合感染率高，為%；男女發(fā)病比例為 1:，發(fā)病平均年齡為 ，大于甲肝的發(fā)病年齡。血清學診斷和監(jiān)測方法 ,包括瓊脂凝膠擴散試驗和紅細胞凝集抑制試驗 ,在國內(nèi)普遍實行免疫接種的情況下已經(jīng)失 去作用。 用。 生物素標記單抗工作濃度的選擇 : 用健康雞胚尿囊液和稀釋至 32HA 的 H7N2AIV 尿囊液做對照 ,在包被有純化單抗的板孔中加入經(jīng)過倍比稀釋的 H5N1 病毒 ,同上孵育洗滌之后加入經(jīng)過倍比稀釋的生物素標記單抗 ,37 ℃孵育 2 h , PBST 洗板 5次 ,每孔加入 100μ l 1∶ 1 000 稀釋的 HRP 標記鏈酶親和素 ,37 ℃孵育 30 min ,PBST 洗板 5 次 ,顯色反應(yīng)同上 ,測定 A450 nm 讀數(shù)。質(zhì)控方法采用質(zhì)控血清檢測法和標準曲線參數(shù)檢測法。 討論： : 應(yīng)用質(zhì)控血清監(jiān)測法評價批內(nèi)精密度、批間重現(xiàn)性和檢測偏差是內(nèi)部質(zhì)量控制主要內(nèi)容。 （摘自：放射免疫學雜志， 2020（ 17）， 3， 205206） ２６ 用測定口咽液中抗體的方法檢測口蹄疫病毒感染牛 張香麗 目的： 建立一種現(xiàn)場檢測 FMDV感染的可靠方法。牛呼吸道和消化道中的分泌免疫系統(tǒng)有一種復雜的結(jié)構(gòu)，在鼻和口腔分泌物中不同類型的免疫球蛋白與 18A或 IgGl反應(yīng)區(qū)結(jié)合。 1．檢測對象 ：采用 ELISA 法對 331 例結(jié)核和非結(jié)核住院病人做了血清結(jié)核 IgG 抗體測定，將其分為兩組分別為肺結(jié)核組和肺結(jié)核組非結(jié)核病對照組。 由于人群中自然感染結(jié)核菌十分普遍，正常人體和非結(jié)核病人體內(nèi)也會存在著低度水平的結(jié)核抗 體，本組有 %的假陽性率。 HPVLuminex 競爭免疫分析通過以血清中 多克隆抗體取代 PE 標記的中和單抗而結(jié)合到各自病毒樣顆粒的構(gòu)象性中和表位上，測定血清中和抗體滴度。用ＨｉＣＮ法測定上清Ｈｂ濃度。Ｌ 1的溶血血清標本。陽性對照Ａ值為 ,陰性對照為 。Ｌ 1，而這么多紅細胞破壞的標本在臨床 上很少見。 方 法 利用重組桿狀病毒 昆蟲細胞系統(tǒng)進行 HIV1 gp4 HIV2 gp36抗原的高效表達，以免疫親和層析法純化抗原。第 C3天 10%20%的細胞呈 Tripen Blue著色反應(yīng)。通過免疫親和層析法純化的 gp41 蛋白及 gp36 蛋白，經(jīng)紫外分光光度計檢查蛋白表達量達 2mg/L。 HIV2 跨膜基因表達的 gp36 抗原與 HIV1 gp41抗原只有 40%蛋白序列相同。但當病情急劇進展及使用抗 HIV 治療產(chǎn)生耐藥時血液中 P24抗原滴度上升。通過對 39份血清標本的檢測，結(jié)果證實這種新型診斷試劑可準確的檢測出 HIV1 及 HIV2感染者，并同時報告血液中 P24抗原結(jié)果。在融合前 3 天，再用同樣劑量的抗原腹腔加強免疫 1 次。 ：與 HBcAg、 HCV陽性血清及 HIVgp41Ag 作交叉實驗。兩株 mAb 識別的表位不同。 資料與方法 一、研究對象 選擇孕婦共 4506 例 ,孕婦平均年齡 (28177。增條件 :93℃ 預(yù)變性 2ｍｉｎ ,然后按 93℃ 30ｓ～ 55℃ 1ｍｉｎ ,共 40 個循環(huán)。分別于出生時取臍帶血檢測 ,并于出生后 11 24 個月時 ,取血檢測 ＨＣＶＲＮＡ、ＨＧＶＲＮＡ 、肝功能及其他生化指標等 ,并分析孕婦分娩方式、喂養(yǎng)方式以及分娩前孕婦丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶 (ＡＬＴ )水平等對母嬰傳播的影響。篩選出 2 株 mAb 為以后進一步的工作奠定了基礎(chǔ)。 ：融合率為 63%，陽性率為 %。 的特性鑒定： ：斑點試驗檢測活性。 方法： p24 抗原的制備及純化鑒定：基因工程方法制備，固相化金屬離子（ Ni2+）配體親和層析進行純化。通過重組桿狀病毒 /昆蟲細胞系統(tǒng)，進行抗原表達。對獻血員進行篩查可提高對 HIV急性感染者的檢出率，防止血 液感染。利用本試劑與荷蘭 Organon 公司 p24抗原診斷試劑及HIV1， HIV2抗體診斷試劑，同時對 39份血清檢測結(jié)果進行比較，符合率為 100%。利用 gp41 特異性引物對逐日收集到的培養(yǎng)上清液，進行基因擴增，均可得 的目的基因。從抗 p24 單克隆抗體雜交瘤細胞株中培養(yǎng)上清液，通過葡萄球菌蛋白 A免疫親和層析柱可得到 。 HIV 感染人體后，血液中 HIV載量迅速上升，同時有高滴度的 p24抗原出現(xiàn)，而抗體要在 HIV 感染后 1個月左右產(chǎn)生。 13 例陰性標本的表面抗體和ｅ抗體檢測在血清Ｈｂ濃度小于 16ｇＬ 1 溶血血清均轉(zhuǎn)為陽性 ,Ａ值小于 ,且隨血紅蛋白濃度減低 ,Ａ值逐漸增大。 4. 吸取每個健康人血清 450μｌ ,加入 160ｇ (摘自： David O, Charles E. L, Stefani A,et al. Simultaneous Quantitation of Antibodies to Neutralizing Epitopes on VirusLike Particles for Human Papillomavirus Types 6, 11, 16, and 18 by a Multiplexed Luminex Assay. CLINICAL AND DIAGNOSTIC LABORATORY . 2020, p. 108– 115.) 不同程度溶血對ＥＬＩＳＡ法檢測乙肝抗體的影響 朱京山 背景介紹： 溶血可對多種檢驗項目產(chǎn)生干擾，溶血時溶血到什么程度即可對ＥＬＩＳＡ法檢測抗２９ 體產(chǎn)生干擾尚無定論。宮頸癌是婦女癌癥死亡的第二大誘因，每年大約有 40 萬婦女死于宮頸癌。 血清抗 PPDIgG 診斷結(jié)核病的特異性為 %，敏感性為 %，其陽性率與痰菌關(guān)系不大，與病情變化有一定的相關(guān)性。持續(xù)存在粘膜抗體反應(yīng)超過（ 3— 4個月 ） 則表明為帶毒狀態(tài)。樣品于 4C過夜，用結(jié)合堿性磷酸酶的免抗牛 Ig抗血清檢測抗體。標準曲線參數(shù)的監(jiān)測結(jié)果其變異系數(shù)基本控制在 10%以內(nèi) ,說明檢測系統(tǒng)穩(wěn)定 ,被測結(jié)果準確可靠。 CEA3種質(zhì)控血清實測值與靶值偏差（ %）為 , , 。該 ELISA 反應(yīng)體系能檢出 H5N3 標準株和所有 20株國內(nèi) H5 亞型 AIV 分離株 ,而與其他 14 個血凝素亞型的 AIV 標準株、 15 個 H9 亞型 AIV 分離株和 2 個 H7 亞型 AIV分離株均無交叉反應(yīng)。 再將 H5N1 AIV 尿囊液、 H7N2 AIV 尿囊液用 PBST 稀釋至 32 個血 凝單位 (32HA) ,同時用健康雞胚尿囊液 1∶ 5 稀釋后作為對照 ,分別加入到包被有上述抗體的板孔中 ,100μ l/孔 ,37 ℃孵育 2 h ,PBST洗板 5 次 。流感病毒捕獲 EIA 技 術(shù)在國外已有相關(guān)報道 ,用于檢測 A 型流感病毒