【正文】 健康人的血清 (未溶血 )進(jìn)行倍比稀釋 ,分別配成含Ｈｂ濃度 1ｇ 2. 制備不同濃度血紅蛋白血清：取一健康學(xué)生新鮮抗凝血 4ｍｌ ,用冷凍法造成溶血 ,3000ｒｐｍ離心 30ｍｉｎ。 方法： Luminex 的多元分析系統(tǒng)（ LabMAP3），將重組表達(dá)的 4 種 HPVL1 顆?？乖謩e偶聯(lián)到 4 種不同熒光的 Luminex 微球上，用 PE 標(biāo)記型別特異的中和單抗，采用競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)血清的中和抗體。故可認(rèn)為 ELISA 檢測(cè)血清結(jié)核抗體對(duì)活動(dòng)性結(jié)核病診斷具有較高的臨床價(jià)值。 二． 方法 采用快速酶聯(lián)吸附法（ ELISA）檢測(cè)血清抗 PPDIgG 在各類(lèi)結(jié)核病中的特異性、敏感性及２７ 與痰菌、病情的關(guān)系。 結(jié)果與討論： 接苗動(dòng)物的血清 1gG抗體可能推遲感染后的粘膜反應(yīng)。 2．對(duì)于 AFP定量 ELISA kit來(lái)說(shuō)，被測(cè)物的濃度同樣實(shí)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算求出的，因此要保證標(biāo)準(zhǔn)品這一參數(shù)的穩(wěn)定，用質(zhì)控品來(lái)監(jiān)測(cè)其穩(wěn)定性是切實(shí)易行并且有效的方法 。腫瘤標(biāo)志物 20次測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線參數(shù) 的監(jiān)測(cè)結(jié)果AFP 5個(gè)參數(shù)依次為 ， ， ， ， ； CEA 5個(gè)參數(shù)依次為 ， ， ， ， 。 方法： AFP、 CEA RIA kit 按說(shuō)明書(shū)操作。用 SPF 雞胚尿囊液和稀釋至32HA 的 H7N2 AIV 尿囊液作對(duì)照 ,在反應(yīng)板孔中加入經(jīng)倍比稀釋的 H5N1 AIV 尿囊液 ,其余檢測(cè)步驟同上。 方法 長(zhǎng)臂活化生物素 (BCNHS) 標(biāo) 記抗體的制備 :用 DMSO 將 BCNHS 配成 1 mg/ml 的溶液 。禽流感的臨診癥狀變化很大 ,臨床診斷常難以定性 ,必須進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室病原學(xué)、血清學(xué)和分子生物學(xué)診斷。 （摘自：中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志 2020年 7月第 24卷第 4期） 盧龍縣戊性肝炎流行特征調(diào)查 蔡芳 為了解本地區(qū)戊型肝炎 (HE)流行特征， 1994年 5月至 1995年 4月對(duì) 1 57例散發(fā)性肝炎病人和 57例急性暴發(fā)流行的肝炎病人進(jìn)行戊性肝炎的病原和流行病學(xué)調(diào)查。電化學(xué)發(fā)光采用磁性微珠包被技術(shù)，由于磁珠體積小，可以吸附更多的抗原或抗體，同時(shí)磁珠的核心是鐵，在磁場(chǎng)中很快下沉，因此容易進(jìn)行洗滌和固相載體分離。 結(jié) 果： 線性：電化學(xué)發(fā)光法在 ，酶聯(lián)法在，可見(jiàn)電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)范圍更寬，更能充分滿足臨床要求。在本報(bào)道所列舉的6例血清中 ,有 3例 HBeAg假陽(yáng)性 ,而另 2例 HBsAg假陰性 ,說(shuō)明體內(nèi)仍有 HBV復(fù)制。由于包被試劑的純度及工藝流程等的影響 ,試劑盒本身允許有一定的假陽(yáng)性 (1%～ 2%)存在 ,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)有誤差。經(jīng)檢測(cè) ,在這 6例血清中 ,有 2例 RF陽(yáng)性。 HBeAg陽(yáng)性的臨床意義： 作為急性乙型肝炎輔助診斷和預(yù)防的重要指標(biāo) ?？迫A試劑。 方法： 采用膠體金作為免疫示蹤物 ,標(biāo)記羊抗人 IgG單克隆抗體 ,將相應(yīng)的病毒抗原 HAVAg、HBcAg及 HCVAg包被在硝酸纖維素薄膜表面 ,標(biāo)本中所含抗體與相應(yīng)的抗原結(jié)合后 ,加入金標(biāo)記抗體 ,即可在薄膜表面形成肉眼可見(jiàn)的紅色斑點(diǎn)。迄今僅在黑猩猩中發(fā)現(xiàn)一種免疫缺陷病毒，而亞洲猿猴、馬來(lái)猩猩、長(zhǎng)臂猿和獼猴則無(wú)，經(jīng)對(duì)大猩猩調(diào)查，也末得出有免疫缺陷病毒感染 的最后結(jié)論?？?HIV— O與 B亞型的反應(yīng)性有的極差，可用二種方法，１６ 一是再與 HIV— O作免疫印跡試驗(yàn)，其 優(yōu)點(diǎn)是抗原具有同一性。當(dāng)用原病毒材料制備試劑盒時(shí)，交叉反應(yīng)特別高。 流行病學(xué)：加蓬的初步血清學(xué)調(diào)查報(bào)告其流行率為 3％，喀麥隆的 HIV感染中占 5％。結(jié)果發(fā)現(xiàn)全部試劑的敏感度均可達(dá)到 100%，但 3種間接法試劑均出現(xiàn)了多份假陽(yáng)性，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值僅在 30%左右，而北京的雙抗原夾 心法試劑則未發(fā)現(xiàn)假陽(yáng)性。其中只有 4份標(biāo)本四種試劑的檢測(cè)結(jié)果都為陽(yáng)性，除北京試劑外，其它三種間接酶免法試劑各出現(xiàn) 4份、 5份、 11份互不相同的陽(yáng)性標(biāo)本。因此，在我國(guó)獻(xiàn) 血者中開(kāi)展 HTLV感染的篩查已成為一個(gè)迫切需要認(rèn)真考慮的問(wèn)題，其中尤以篩查試劑的選擇最為重要。 綜上述， H5禽流感病毒的檢測(cè)方法各有利弊。1984年美國(guó)賓西法尼亞州爆發(fā)禽流感時(shí) Skeeles將 IFT首次用于 AIV的檢測(cè)。當(dāng)標(biāo)本 中不含流感病毒抗體或不是 H5型流感病毒抗體，不會(huì)抑制酶標(biāo)單抗與抗原的反應(yīng)。 我們開(kāi)發(fā)了兩種試劑，分別是檢測(cè) H5型的抗原和抗體，可用于禽流感的初篩。 人類(lèi)對(duì)禽流感普遍易感，老年人和兒童都有可能感染禽流感。 在野外條件下，禽流感病毒常從病禽的鼻腔分泌物和糞便中排出，病毒受到這些有機(jī)物的保護(hù)極大地增加了抗滅活能力。禽流感病毒感染引發(fā)的疾病可能是不明顯的或是溫和的一過(guò)性的綜合征，甚至是 100%發(fā)病率和 /或死亡率的疾病。 禽流感病毒一般為球形，直徑為 80～ 120納米，但也常有同樣直徑的絲狀形態(tài)，長(zhǎng)短不一。 (摘自：國(guó)外醫(yī)學(xué)臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊(cè) 2020年 1月第 25卷第 1期， P7778，高豐厚綜述，鄭佐婭審校。蔗糖能夠穩(wěn)定 AFP的天然狀態(tài)。 只有充分了解其結(jié)構(gòu)，才能合理解釋其功能并指導(dǎo)我們的實(shí)際工作。它不是自我作古、數(shù)典忘祖的、因而也不是爆炸式的罵倒一切的與充滿敵意的、而是尊重歷史、尊重前賢、尊重不同的學(xué)問(wèn)與思路，接受一切合理的新舊成果與對(duì)同行對(duì)大眾充滿友善的。我把人生當(dāng)作一個(gè)學(xué)習(xí)的過(guò)程，它不是空虛的頹廢的幻滅的無(wú)意義的，而是有為的有關(guān)注有興趣有成就有意義的。血清 AFP水平變化是胚胎發(fā)育異常病和成人幾種病理狀態(tài)的標(biāo)志物。在免疫應(yīng)答中，主要表現(xiàn)為抑制母體對(duì)胚胎發(fā)育的免疫應(yīng)答以及腫瘤患者對(duì)腫瘤的免疫應(yīng)答。它在體內(nèi)僅占總循環(huán) AFP的 %或更少 ,但在胎兒缺陷性疾病中和 AFP的雌激 素結(jié)合的形式中， MGF增加。世界各地的高致病性禽流感主要由 H5 和 H7 亞型禽流感病毒引起，是人畜共患病，不僅能給養(yǎng)禽業(yè)帶來(lái)毀滅性打擊，還嚴(yán)重影響人類(lèi)健康。 禽流感病毒粒子大約由 ～ 的 RNA， 70%～ 75%的蛋白質(zhì)， 20%～ 24%的脂質(zhì)和 5%～ 8%的碳水化合物組成。 三、 禽流感病毒對(duì)理化因素的抵抗力 HA trimer. (From Fields Virology, 2nd ed, Fields amp。 四、禽流感的預(yù)防 (一 ) 禽流感病毒在一定條件下可以存活較長(zhǎng)時(shí)間。世界衛(wèi)生組織及越南專(zhuān)家都 強(qiáng)調(diào)，目前還沒(méi)有證據(jù)顯示該病毒可以由人類(lèi)傳染給人類(lèi)。當(dāng)裂解的 H5型流感病毒HA抗原加到微孔后，預(yù)包被的單克隆抗體能將其捕獲，隨后加入的酶標(biāo)單抗也能與其結(jié) 合，而后通過(guò)酶催化底物顯色程度判斷結(jié)果。目前，我國(guó)通過(guò)設(shè)計(jì)合成 AIV核蛋白（ NP）基因特異的引物，建立了可以直接從臨床病料的感染組織中檢測(cè)所有亞型禽流感病毒的。 IFT用于診斷具有快速、簡(jiǎn)便、敏感性好的特點(diǎn)，而且費(fèi)用較低。 目前存在的問(wèn)題：對(duì)于咽拭樣品的特異性不好（約 91%），有待提高。其中僅北京試劑為雙抗原夾心法，其余均為間接法試劑。χ 2=， P﹥ ，與國(guó)外試劑不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，說(shuō)明國(guó)產(chǎn)雙抗原夾心法試劑質(zhì)量與進(jìn)口試劑相當(dāng)，國(guó)產(chǎn)兩種試劑存在差異則與國(guó)產(chǎn)間接法試劑特異性不高有關(guān)。由于雙抗原夾心法試劑以有別于包被抗原的 HTLV酶標(biāo)特異性抗原代之于間接法的廣譜性酶標(biāo)二抗，此雙重識(shí)別機(jī)制致使假陽(yáng)性不易出現(xiàn)，特異性增高。尼日爾的首府尼亞美發(fā)現(xiàn) 2名 HIV— O感染者，其血清是 1990年因其他原因采集的。 ELISA較寬的交叉反應(yīng)，說(shuō)明用的是保守區(qū)，特別是外殼蛋白作為抗原材料。 聚合酶鏈反應(yīng) (PCR) PCR是通過(guò)加入引物和引物與核酸在一定的溫度相結(jié)合，非常特異地檢測(cè) HIV核酸的方法?；仡欖`長(zhǎng)目的演化過(guò)程 可以理解，為何人類(lèi)的演化與非洲地區(qū)相關(guān)。 討論： GIFA法由于其方法的局限法 ,檢測(cè)靈敏度較 ELISA及 RIA低 ,檢測(cè) ELISA靈敏度為,而我們的實(shí)驗(yàn)表明 ,我們建立的方法檢測(cè)靈敏度在 1ng/ml以上，稍遜一籌的靈敏度可能將部分滴度較低的標(biāo)本漏判。 （摘自：經(jīng)驗(yàn)交流 文章編號(hào)： 10002790(2020)12108401） 凍融前 凍融 3次 凍融 6次 陽(yáng)性數(shù) 陽(yáng)性率 S/N均值 陽(yáng)性數(shù) 陽(yáng)性率 S/N均值 陽(yáng)性數(shù) 陽(yáng)性率 S/N均值 HBsAg 67 % 64 % 62 % HBsAb 107 % 110 % 99 １９ 對(duì)乙肝“二對(duì)半”檢測(cè)中“ HBsAg 陰性 HBeAg 陽(yáng)性”現(xiàn)象的分析 楊海 背景介紹： 在乙型肝炎病毒 (HBV)血清標(biāo)記物中 ,在一般情況下 ,HBeAg只出現(xiàn)于 HBsAg陽(yáng)性血清中 , HBeAg是一種可溶性的蛋 白抗原 ,是完整的 HBcAg肽鏈的一部分 ,當(dāng) HBcAg被蛋白酶裂解時(shí) ,HBeAg即游離出來(lái)分泌到外周血中 ,在血循環(huán)中與 Dane顆粒 ,出現(xiàn)時(shí)間相平行 ,與 HBV、 DNAP的消長(zhǎng)動(dòng)態(tài)也基本一致 ,而消失較早 ,是 HBV體內(nèi)復(fù)制與具有傳染性的重要指標(biāo)。 血清轉(zhuǎn)換期如用敏感方法檢測(cè) HBeAb,可能同時(shí)陽(yáng)性 ,但滴度較低。 ２０ HBsAg與 HBsAb形成免疫復(fù)合物而致的影響 ,機(jī)體的免疫狀態(tài)與 HBV的消長(zhǎng)密切相關(guān)。 HBV是具有高度變異性的病毒 (尤其是編碼 HBsAg的基因區(qū) )為逃避人體免疫系統(tǒng)的攻擊 ,HBV經(jīng)常發(fā)生突變而使我們現(xiàn)有的方法無(wú)法檢出。近年來(lái)，電化學(xué)發(fā)光免疫法以其敏感、快速、穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，在固相標(biāo)記免疫測(cè)定技術(shù)上居領(lǐng)先地位。 精密度：結(jié)果表明，電化學(xué)發(fā)光法的重復(fù)性較酶聯(lián)法更好。由于非同位素金屬三聯(lián)吡啶釕在自然環(huán)境下非常穩(wěn)定，因此用它標(biāo)記的試劑也非常穩(wěn)定。 （摘自 ：現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué) 1997年第 24卷第 2期 唐景裕等） 369 例病毒性肝炎患者抗 HEV 的檢測(cè)與分析 蔡芳 1992 年 1月至 1992 年 12月住院的 369 例病毒性肝炎患者血清中抗 HEV 的檢出率為 %，其檢出率隨患者的年齡增加而增加，但與患者的性別及發(fā)病季節(jié)無(wú)相關(guān)性。近年來(lái)發(fā)展的 RTPCR 技術(shù) ,可以快速作出診斷 ,但操作繁瑣且成本較高 ,不適合對(duì)批量樣本進(jìn)行監(jiān)測(cè)。裝入透析袋 ,對(duì) PBS 透析過(guò)夜 ,加等體積甘油 ,小量分裝 , 20 ℃保存?zhèn)溆谩? 結(jié)果 純化后的單抗具有良好的反應(yīng)活性 ,生物素標(biāo)記單抗工作濃度為 1∶ 5000 。 結(jié) 果： 1. AFP、 CEA質(zhì)控血清的監(jiān)測(cè)監(jiān)測(cè)結(jié)果：高、中 、低值 3種質(zhì)控血清連續(xù) 12次相同條件放免測(cè)定。 2. 對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線參數(shù)的評(píng)價(jià) 在ＲＩＡ中 ,被測(cè)物的濃度是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算而求出的 ,因此 ,盡量保持這些參數(shù)的穩(wěn)定性是保證結(jié)果準(zhǔn)確可靠的重要前提。樣品于 4℃過(guò)夜，用結(jié)合堿性磷酸酶的免抗?？寡鍣z測(cè)抗體。因此， 只能檢出低滴定、低親和性的特異性抗體。 2．檢測(cè)試劑 ：采用四川綿陽(yáng)解放軍 404 醫(yī)院科技開(kāi)發(fā)公司提供的 PPDIgG 抗體快速檢測(cè)試劑盒，按說(shuō)明書(shū)方法操作。隨訪97 例抗體陽(yáng)性的結(jié)核病患者治療 3 月后陰轉(zhuǎn)率 %， 6 個(gè)月后陰轉(zhuǎn)率 %，可見(jiàn)結(jié)核抗體檢測(cè)有助于確定病灶是否有活動(dòng)性，也可作為治療轉(zhuǎn)歸的動(dòng)態(tài)觀察。 結(jié)果及結(jié)論： 這種競(jìng)爭(zhēng) Luminex 免疫分析不僅血清用量少（ 50ul 血清就能同時(shí)定量檢測(cè)HPV 1 16 和 18 型別特異的中和抗體），而且敏感性、準(zhǔn)確性和精確性與常用的放免分析一致。Ｌ 1,備用。 結(jié)果： 1. 各Ｈｂ濃度表面抗體陰陽(yáng)性標(biāo)本、ｅ抗體陰陽(yáng)性標(biāo)本、核心抗體陽(yáng)性標(biāo)本的結(jié)果均與無(wú)溶血時(shí)相同 ,相同個(gè)體各Ｈｂ濃度標(biāo)本間Ａ值無(wú)明顯差異。 討論： 標(biāo)本溶血可由多種原因造成 , 紅細(xì)胞釋放的Ｈｂ對(duì)ＥＬＩＳＡ檢測(cè)乙型 肝炎五項(xiàng)指標(biāo)可能有非特異性吸附和血清稀釋的干擾 。 ３０ 同時(shí)檢測(cè) HIV 抗體及 p24 抗原快速診斷試劑的研制 管靜波 背 景： 近年來(lái)我國(guó)艾滋病的發(fā)病率呈明顯上升趨勢(shì)，敏感實(shí)用的診斷試劑對(duì)控制艾滋病的流行是非常重要的。以硝酸基纖維膜為載體，以純化 的 HIV1 gp4 HIV2 gp36抗原及抗 p24 抗體點(diǎn)膜， 20mm 膠體金顆粒 /抗人 IgG 和抗抗 HIV p24 單克隆抗體進(jìn)行標(biāo)記，對(duì) 33份已知 HIV 感染者陽(yáng)性血清及 6 份陰性血清進(jìn)行檢測(cè)。第 9天基本沒(méi)有完整形態(tài)的細(xì)胞。人 IgG抗體及 p24 抗體膠體金結(jié)合物及洗液分別裝瓶供檢測(cè)用。同時(shí)進(jìn)行 HIV抗體及 P24 抗原的檢測(cè)，可提高試劑的敏感性，減少急性感染者窗口期漏診。因而，可通過(guò) P24抗原檢測(cè)判斷病情進(jìn)展及藥物治療反應(yīng)。 (摘自中華醫(yī)學(xué)雜志 2020年 8月第 16卷第 2期 ) ３２ 抗 HIV1 核心抗原 p24 單克隆抗體的制備及特性的初步鑒定 蘇啟東 目的： HIV1 p24 抗原在 HIV急性感染期和 AIDS 病程后期均可出現(xiàn)，因此，檢測(cè) HIV1 p24 抗原不僅有助 于 HIV 感染的早期診斷，而且可作為愛(ài)滋病病情、病程檢測(cè)、預(yù)后判斷和評(píng)價(jià)抗病毒治療效果的重要指標(biāo)。經(jīng)HAT、 HT 選擇性培養(yǎng)， 21 天后間接 ELISA 法檢測(cè)，有限稀釋法進(jìn)行克隆化篩選。 結(jié)果： p24 抗原的制備及純化鑒定：所得片段大小約為 690bp，同預(yù)期的結(jié)果一致。親和常數(shù)為 *104～ *104mol/L。產(chǎn)前均常規(guī)檢查肝及腎功能、血常規(guī)并檢測(cè)血清中ＨＣＶ 抗體 (抗 ＨＣＶ ),其中 878 例孕婦同時(shí)檢測(cè) ＨＧＶ 抗體 (抗 ＨＧＶ