【正文】 使之無法檢測(cè)出 ,而呈現(xiàn) HBeAg陽性。 目 的：電化學(xué)發(fā)光與酶聯(lián)免疫檢測(cè)血清甲胎蛋白的比較 方 法： 標(biāo)本：隨機(jī)抽取 165份臨床送檢血清標(biāo)本，包括正常和異常標(biāo)本。 快速進(jìn)行免疫反應(yīng)，較酶聯(lián)免疫法大大縮短了時(shí)間，提高了工作效率。流感病毒捕獲 EIA 技 術(shù)在國外已有相關(guān)報(bào)道 ,用于檢測(cè) A 型流感病毒 ,但不能直接鑒定 H5亞型禽流感病毒 ,而國內(nèi)僅有用 ELISA 檢測(cè)病毒抗體的報(bào)道。該 ELISA 反應(yīng)體系能檢出 H5N3 標(biāo)準(zhǔn)株和所有 20株國內(nèi) H5 亞型 AIV 分離株 ,而與其他 14 個(gè)血凝素亞型的 AIV 標(biāo)準(zhǔn)株、 15 個(gè) H9 亞型 AIV 分離株和 2 個(gè) H7 亞型 AIV分離株均無交叉反應(yīng)。標(biāo)準(zhǔn)曲線參數(shù)的監(jiān)測(cè)結(jié)果其變異系數(shù)基本控制在 10%以內(nèi) ,說明檢測(cè)系統(tǒng)穩(wěn)定 ,被測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。持續(xù)存在粘膜抗體反應(yīng)超過（ 3— 4個(gè)月 ） 則表明為帶毒狀態(tài)。宮頸癌是婦女癌癥死亡的第二大誘因，每年大約有 40 萬婦女死于宮頸癌。 4. 吸取每個(gè)健康人血清 450μｌ ,加入 160ｇ 13 例陰性標(biāo)本的表面抗體和ｅ抗體檢測(cè)在血清Ｈｂ濃度小于 16ｇ從抗 p24 單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株中培養(yǎng)上清液，通過葡萄球菌蛋白 A免疫親和層析柱可得到 。利用本試劑與荷蘭 Organon 公司 p24抗原診斷試劑及HIV1， HIV2抗體診斷試劑，同時(shí)對(duì) 39份血清檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較，符合率為 100%。通過重組桿狀病毒 /昆蟲細(xì)胞系統(tǒng)，進(jìn)行抗原表達(dá)。 的特性鑒定： ：斑點(diǎn)試驗(yàn)檢測(cè)活性。篩選出 2 株 mAb 為以后進(jìn)一步的工作奠定了基礎(chǔ)。增條件 :93℃ 預(yù)變性 2ｍｉｎ ,然后按 93℃ 30ｓ～ 55℃ 1ｍｉｎ ,共 40 個(gè)循環(huán)。兩株 mAb 識(shí)別的表位不同。在融合前 3 天，再用同樣劑量的抗原腹腔加強(qiáng)免疫 1 次。但當(dāng)病情急劇進(jìn)展及使用抗 HIV 治療產(chǎn)生耐藥時(shí)血液中 P24抗原滴度上升。通過免疫親和層析法純化的 gp41 蛋白及 gp36 蛋白，經(jīng)紫外分光光度計(jì)檢查蛋白表達(dá)量達(dá) 2mg/L。 方 法 利用重組桿狀病毒 昆蟲細(xì)胞系統(tǒng)進(jìn)行 HIV1 gp4 HIV2 gp36抗原的高效表達(dá)，以免疫親和層析法純化抗原。陽性對(duì)照Ａ值為 ,陰性對(duì)照為 。用ＨｉＣＮ法測(cè)定上清Ｈｂ濃度。 由于人群中自然感染結(jié)核菌十分普遍，正常人體和非結(jié)核病人體內(nèi)也會(huì)存在著低度水平的結(jié)核抗 體，本組有 %的假陽性率。牛呼吸道和消化道中的分泌免疫系統(tǒng)有一種復(fù)雜的結(jié)構(gòu)，在鼻和口腔分泌物中不同類型的免疫球蛋白與 18A或 IgGl反應(yīng)區(qū)結(jié)合。 討論： : 應(yīng)用質(zhì)控血清監(jiān)測(cè)法評(píng)價(jià)批內(nèi)精密度、批間重現(xiàn)性和檢測(cè)偏差是內(nèi)部質(zhì)量控制主要內(nèi)容。 生物素標(biāo)記單抗工作濃度的選擇 : 用健康雞胚尿囊液和稀釋至 32HA 的 H7N2AIV 尿囊液做對(duì)照 ,在包被有純化單抗的板孔中加入經(jīng)過倍比稀釋的 H5N1 病毒 ,同上孵育洗滌之后加入經(jīng)過倍比稀釋的生物素標(biāo)記單抗 ,37 ℃孵育 2 h , PBST 洗板 5次 ,每孔加入 100μ l 1∶ 1 000 稀釋的 HRP 標(biāo)記鏈酶親和素 ,37 ℃孵育 30 min ,PBST 洗板 5 次 ,顯色反應(yīng)同上 ,測(cè)定 A450 nm 讀數(shù)。血清學(xué)診斷和監(jiān)測(cè)方法 ,包括瓊脂凝膠擴(kuò)散試驗(yàn)和紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn) ,在國內(nèi)普遍實(shí)行免疫接種的情況下已經(jīng)失 去作用。發(fā)光信號(hào)檢測(cè)的寬線性加上獨(dú)特的標(biāo)記物本身循環(huán)發(fā)光，使電化學(xué)發(fā)光檢２２ 測(cè)的線性范圍更寬。傳統(tǒng)的肝功能實(shí)驗(yàn)僅檢測(cè) HBsAg,而不檢測(cè)其他 4項(xiàng) HBV標(biāo)記物 ,按照我們的發(fā)現(xiàn)來估計(jì) ,會(huì)有相當(dāng)量的乙肝患者的漏診 ! 個(gè)人小結(jié)： 據(jù)上述文獻(xiàn)所報(bào)道就我公司 HBeAg項(xiàng)目前所出現(xiàn)的問題來分析，造成假陽性的原因是否與上述 7種原因有關(guān)，是否說明有一些假陽性是酶標(biāo)試劑所共同存在的必然結(jié)果，針對(duì)此文摘所講述的內(nèi)容并結(jié)合目前我公司 HBeAg項(xiàng)目存在的假陽性問題，通過系統(tǒng)調(diào)整可以解決一部分假陽性問題，那么無法解決的假陽性問題是否與上述 7種原因有關(guān)，我們的假陽性問題主要還是與原料有關(guān)，原料本身所造成的假陽性解決起來有一 定難度，是否可以找一些大量的 HBeAb強(qiáng)陽性的血清進(jìn)行沉淀，純化，然后標(biāo)記再進(jìn)行檢測(cè)，若可行的話，是否可以減少原料所造成的假陽性問題。據(jù)報(bào)道 ,此種血清熱聚變 IgG中和 HBeAg可轉(zhuǎn)陰 ,或用 F(ab)2片段制備的酶結(jié)合物 ,也可除去 RF的干擾。 3次檢測(cè)用同一批號(hào)試劑，嚴(yán)格按說明書方法判斷陰陽性結(jié)果。獼猴的分支形成白面猴、狒狒和山魈，與 HIV— 2／ SIV— 2有緊密的聯(lián)系，人科 (黑猩猩與人類 )則伴有 HIV— 1／ SIV— l感染，亞洲猿 (馬來猩猩、長臀猿和獼猴 )不感染 SIV，同樣南美猿也不受感染，這些種系顯然是在 3000萬年前，從共同的靈長目分支出來的，亞洲的獼猴如同狒狒群體一樣，伴有 STLV— l感染，這是一種與 HTLV— l相似的致癌性逆轉(zhuǎn)錄病毒。純化 HIV制備的試劑現(xiàn)今已不再應(yīng)用。此外，北京試劑能以較高的 S/CO值檢出美國 BBI HTLV Panel全部陽性血清，說明其靈敏度明顯高于國外試劑。 1 材料與方法 血清標(biāo)本 標(biāo)本 797份采自來本站獻(xiàn)血的獻(xiàn)血者。 IFT最早用于病毒的鑒定和定位病毒感染細(xì)胞中特異性抗原，主要是核內(nèi)熒光；用 MP抗原的熒光抗體主要出現(xiàn)胞質(zhì)熒光，核內(nèi)也有部分熒光。 酶標(biāo)法 H5型流感病毒 HA抗原原理： 本試劑盒采用雙抗體夾心法檢測(cè)標(biāo)本中的 H5型流感病毒 HA抗原。此外，禽流感病毒可以在自然環(huán)境中，特別是涼爽和潮濕的條件下存活很長時(shí)間。病毒表面有 10～ 12納米的密集釘狀物或纖突覆蓋，病毒囊膜內(nèi)有螺旋形核衣殼。 AFP的變性中間體：在活細(xì)胞中的 AFP分子的結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)出一個(gè)可溶的球樣的構(gòu)像 (MGF)。它是建設(shè)性的文化品格的體現(xiàn)，它是力求接受、學(xué)到、發(fā)明和發(fā)現(xiàn)新知識(shí)、新觀點(diǎn)、新角度的。 ———— 蘇麗娜摘自《王蒙自述：我的人生哲學(xué)》４ 目 錄 甲胎蛋白的結(jié)構(gòu)與功能 ７ H5型禽流感病毒的預(yù)防及病毒學(xué)檢測(cè)方法 ８ 4 種 ELISA試劑篩查獻(xiàn)血人群抗 HTLV結(jié)果評(píng)價(jià) １２ HIV— 1 0亞型：對(duì)診斷和艾滋病病原體起源的意義 １５ 滴金法同步檢測(cè)甲、乙、丙型肝炎病毒免疫標(biāo) 志物方法學(xué)建立及評(píng)價(jià) １７ 血清反復(fù)凍融對(duì) HBSAG和抗 HBS抗體檢測(cè)的影響 １８ 對(duì)乙肝“二對(duì)半”檢測(cè)中“ HBSAG陰性 HBEAG陽性”現(xiàn)象的分析 １９ 電化學(xué)發(fā)光與酶聯(lián)免疫檢測(cè)血清甲胎蛋白的比 較 ２１ 盧龍縣戊性肝炎流行特征調(diào)查 ２２ 369例病毒性肝炎患者抗 HEV的檢測(cè)與分析 ２２ H5 亞型禽流感病毒單抗 — 生物素捕獲 ELISA 的建立 ２３ AFP、 CEA的內(nèi)部質(zhì)量控制 ２５ 用測(cè)定口咽液中抗體的方法檢測(cè)口蹄疫病毒感 染牛 ２６ ５ ELISA檢測(cè)結(jié)核 IGG抗體對(duì)結(jié)核病的診斷價(jià)值 ２６ 多元 LUMINEX檢測(cè)系統(tǒng)能同時(shí) ２８ 定量 HPV6,11,16和 18病毒樣顆粒型特異性中和表位抗體 ２８ 不同程度溶血對(duì)ＥＬＩＳＡ法檢測(cè)乙肝抗體的 影響 ２８ 同時(shí)檢測(cè) HIV抗體及 P24抗原快速診斷試劑的研制 ３０ 抗 HIV1核心抗原 P24單克隆抗體的制備及特性的初步鑒定 ３２ 丙型和庚型肝炎病毒混合感染母嬰傳播的研究 ３３ 重組ＧＭ ＣＳＦ /ＩＬ 3融合蛋白的純化 ３５ 流感病毒裂解疫苗 ３６ 應(yīng)用疫苗中的鋁佐劑研究 ３８ 超聲破碎重組大腸桿菌釋放包含體 的過程研究 ３９ 以膜為固相載體的免疫膠體金快速試驗(yàn) ４０ 光照對(duì) ELISA試驗(yàn)結(jié)果的影響 ４３ 膠體金診斷試劑盒中層析膜材料性能的分析 ４５ 利用ＭＯＮＩＣＡ質(zhì)控圖進(jìn)行ＥＬＩＳＡ操作 考核的探討 ４６ ELISA用血清標(biāo)本的采集與保存 ４８ ELISA實(shí)驗(yàn)質(zhì)量控制問題 ４９ 光照對(duì) ELISA試驗(yàn)結(jié)果的影響 ５１ HIV抗體快速診斷試劑與酶聯(lián)免疫診斷試劑 ５３ 靈敏度比較 ５３ 丙型肝炎病毒抗體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) ５４ 陽性判斷值在獻(xiàn)血員血液篩檢中的意義 ５４ ６ 結(jié)核抗體檢測(cè)對(duì)肺結(jié)核病診斷價(jià)值的探討 ５４ 客戶管理的目的 ５６ 銷售心得 ５８ 談贏得客戶與保持客戶 ５９ 萬泰 與國際貿(mào)易 ６２ 意念的較量 ６５ 如何維系客戶策略探討 搞好服務(wù)質(zhì)量是關(guān)鍵 ６６ IMMUNODIAGNOSTIC ASSAY DEVELOPMENT PARTNERSHIPS WITH FOREIGN COMPANIES ６９ (與國外公司合作開發(fā)免疫診斷試劑 ) ６９ “萬科新榮”領(lǐng)風(fēng)騷 － 四公司網(wǎng)頁對(duì)比 ７３ 關(guān)于如何有效管理駐外市場(chǎng)營銷人員的分析 ７６ ７ 甲胎蛋白的結(jié)構(gòu)與功能 開發(fā)部 喬杉 甲胎蛋白 (AFP)是一血清糖基化蛋白，屬于類白蛋白。 MGF是界于天然狀態(tài)與完全變性狀態(tài)之間的一種形式。兩種不同形狀的表面釘狀物是 HA(棒狀三聚體 )和 NA(蘑菇形四聚體 )。糞便中病毒的傳染性在 4℃ 條件下可以保持長達(dá) 30～ 50天， 20℃ 時(shí)為 7天。本試劑盒中微孔條上預(yù)包被的單克隆抗體和酶標(biāo)單克隆抗體均能特異地結(jié)合 H5型流感病毒 HA抗原。用于禽流感病毒的診斷常用直接熒光抗體法，即在組織切片上直接染色，以熒光顯微鏡檢查熒光，一種 AIV的熒光抗體可用來檢測(cè)不同亞型的其他病毒。 抗體篩查試劑盒 進(jìn)口 HTLVⅠ /Ⅱ ELISA抗體檢測(cè)試劑盒分別為新加坡 Genelabs公司和美國 UBI公司產(chǎn)品；國產(chǎn)試劑盒 2種，為上海某廠家的 HTLV（Ⅰ +Ⅱ）抗體 ELISA試劑盒以及北京某廠家的 HTLV（Ⅰ +Ⅱ）抗體 EIA試劑盒。這可能與試劑盒所采用的方法不同有關(guān)。 比較各 HIV變異株的外殼蛋白， HIV— l與 HIV— 2有 60％的差異， HIV— l與 HIV— O之間約 45％， HIV— 2與 HIV— O之間約 50％的差異。 SIV與中非非洲大陸相關(guān)，假如考慮到各種猿類很少見或者完全不出現(xiàn)免疫缺陷病毒感染，是因?yàn)閷?duì)逆轉(zhuǎn)錄病毒適應(yīng)的結(jié)果，這將是一有力的證據(jù)。 三、結(jié)果： HBsAg：凍融前、凍融 6次后均陽性 61份，均陰性 115份，凍融前陰性凍融 6次后陽性者 1份，凍融前陽性凍融 6次后陰性者 6份，符合率為 % 抗 HBs：凍融前和凍融 6次后均 陽性 97份，均陰性 10份，凍融前陰性凍融 6次后陽性者 2份，凍融前陽性凍融 6次后陰性者 10份，符合率為 % 四、討論： 血清反復(fù)凍融對(duì) HBsAg的檢測(cè)沒有影響，凍融 3次和凍融 6次與凍融前相比，無論陽性率和 S/N值均無明顯差別 抗 HBs凍融 3次與凍融前沒有顯著差別，而凍融 6次后與凍融前相比，其陽性率有明顯下降，經(jīng)對(duì)凍融前和凍融 6次后抗 HBs檢測(cè)相關(guān)性進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)凍融 6次后和凍融前無相關(guān)性，凍融前陽性標(biāo)本 107份，而凍融 6次后下降至 99份，說明凍融對(duì)血清抗 HBs的檢測(cè)結(jié)果確有 影響， 原因尚不清楚 臨床上或血清流行病學(xué)調(diào)查研究中，血清可以放置在 20℃貯存，反復(fù)凍融將不會(huì)影響HBsAg的檢測(cè)結(jié)果；而對(duì)抗 HBs的檢測(cè)，應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融，進(jìn)行多指標(biāo)檢測(cè)時(shí)，應(yīng)提前將所有試劑盒準(zhǔn)備好，短時(shí)間內(nèi)完成。由于實(shí)驗(yàn)條件限制 ,此點(diǎn)我們未加以驗(yàn)證。 （摘自《臨床薈萃》 2020年第 15卷第 15期） ２１ 電化學(xué)發(fā)光與酶聯(lián)免疫檢測(cè)血清甲胎蛋白的比較 梁崴 背景介紹：目前，臨床實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢測(cè)血清甲胎蛋白（ AFP）多采用酶聯(lián)免疫法。 試劑穩(wěn)定性好，有效期長。病原學(xué)檢測(cè)方法 — 雞胚分離病毒是檢測(cè)病禽組織中禽流感病毒 (Avian InfluenzaVirus ,AIV) 的一種經(jīng)典、準(zhǔn)確、敏感的方法 ,但耗時(shí)長 ,不利于禽流感病毒的快速診斷。 特異 性和敏感性測(cè)定 : 選取最適宜的包被抗體及其最適包被濃度 ,采用生物素 酶標(biāo)鏈酶親 和素系統(tǒng) ,檢測(cè) H1～ H15 亞型 AIV 標(biāo)準(zhǔn)株和 H H H9 亞型 AIV 分離株 ,測(cè)試初步建立的抗原捕獲 ELISA 反應(yīng)體系的敏感性和特異性。它既可反映試劑盒穩(wěn)定性 ,又可反映操作者的技術(shù)水平 ,還可以對(duì)每批測(cè)定結(jié)果的可信性作出判斷。本試驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，中和抗體和 IgA測(cè)定適于檢測(cè)在現(xiàn)地緊急接種后 FMDV感染和可能帶毒的牛，適于檢測(cè)粘膜分泌物中的微量特異性抗體．這些樣品一般具有游離細(xì)胞、蛋白酶及組織顆粒含量高的特點(diǎn)，這在 ELISA中常引起大量的背景反應(yīng)。這部分個(gè)體抗體水平輕度增高，雖不能完全排除實(shí)驗(yàn)抗原所致的原因，我們認(rèn)為結(jié)核菌隱性感染所致的可能性也很大，酶聯(lián)法為隱性結(jié)核菌感染提供了新的判斷依據(jù)，文獻(xiàn)報(bào)道血清結(jié)核抗體的水平與病情相關(guān)，隨著病情的恢復(fù) ,結(jié)核抗體可以轉(zhuǎn)陰，故對(duì)于這部分個(gè)體建議定期查體，復(fù)測(cè)抗體，可能在結(jié)核病預(yù)防和早期治療方面有重要價(jià)值。取上清 ,用生理鹽水稀釋至 160ｇ 1∶ 30 稀釋血清樣本用雙波長檢測(cè) ,Ａ值均大于 ,各Ｈｂ濃度標(biāo)本間Ａ值無明顯差異 (Ｐ ),陽性對(duì)照Ａ值為 ,陰性對(duì)照為 ?？? HIV p24單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株，并制備抗 HIV p24 單克隆抗體。 診斷試劑的標(biāo)記 從雜