【正文】 增條件 :93℃ 預(yù)變性 2ｍｉｎ ,然后按 93℃ 30ｓ～ 55℃ 1ｍｉｎ ,共 40 個(gè)循環(huán)。分別于出生時(shí)取臍帶血檢測(cè) ,并于出生后 11 24 個(gè)月時(shí) ,取血檢測(cè) ＨＣＶＲＮＡ、ＨＧＶＲＮＡ 、肝功能及其他生化指標(biāo)等 ,并分析孕婦分娩方式、喂養(yǎng)方式以及分娩前孕婦丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶 (ＡＬＴ )水平等對(duì)母嬰傳播的影響。 資料與方法 一、研究對(duì)象 選擇孕婦共 4506 例 ,孕婦平均年齡 (28177。篩選出 2 株 mAb 為以后進(jìn)一步的工作奠定了基礎(chǔ)。兩株 mAb 識(shí)別的表位不同。 ：融合率為 63%，陽性率為 %。 ：與 HBcAg、 HCV陽性血清及 HIVgp41Ag 作交叉實(shí)驗(yàn)。 的特性鑒定： ：斑點(diǎn)試驗(yàn)檢測(cè)活性。在融合前 3 天，再用同樣劑量的抗原腹腔加強(qiáng)免疫 1 次。 方法： p24 抗原的制備及純化鑒定：基因工程方法制備，固相化金屬離子（ Ni2+）配體親和層析進(jìn)行純化。通過對(duì) 39份血清標(biāo)本的檢測(cè)，結(jié)果證實(shí)這種新型診斷試劑可準(zhǔn)確的檢測(cè)出 HIV1 及 HIV2感染者，并同時(shí)報(bào)告血液中 P24抗原結(jié)果。通過重組桿狀病毒 /昆蟲細(xì)胞系統(tǒng)，進(jìn)行抗原表達(dá)。但當(dāng)病情急劇進(jìn)展及使用抗 HIV 治療產(chǎn)生耐藥時(shí)血液中 P24抗原滴度上升。對(duì)獻(xiàn)血員進(jìn)行篩查可提高對(duì) HIV急性感染者的檢出率，防止血 液感染。 HIV2 跨膜基因表達(dá)的 gp36 抗原與 HIV1 gp41抗原只有 40%蛋白序列相同。利用本試劑與荷蘭 Organon 公司 p24抗原診斷試劑及HIV1， HIV2抗體診斷試劑，同時(shí)對(duì) 39份血清檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較，符合率為 100%。通過免疫親和層析法純化的 gp41 蛋白及 gp36 蛋白，經(jīng)紫外分光光度計(jì)檢查蛋白表達(dá)量達(dá) 2mg/L。利用 gp41 特異性引物對(duì)逐日收集到的培養(yǎng)上清液，進(jìn)行基因擴(kuò)增，均可得 的目的基因。第 C3天 10%20%的細(xì)胞呈 Tripen Blue著色反應(yīng)。從抗 p24 單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株中培養(yǎng)上清液，通過葡萄球菌蛋白 A免疫親和層析柱可得到 。 方 法 利用重組桿狀病毒 昆蟲細(xì)胞系統(tǒng)進(jìn)行 HIV1 gp4 HIV2 gp36抗原的高效表達(dá)，以免疫親和層析法純化抗原。 HIV 感染人體后，血液中 HIV載量迅速上升，同時(shí)有高滴度的 p24抗原出現(xiàn)，而抗體要在 HIV 感染后 1個(gè)月左右產(chǎn)生。Ｌ 1，而這么多紅細(xì)胞破壞的標(biāo)本在臨床 上很少見。 13 例陰性標(biāo)本的表面抗體和ｅ抗體檢測(cè)在血清Ｈｂ濃度小于 16ｇ陽性對(duì)照Ａ值為 ,陰性對(duì)照為 。Ｌ 1 溶血血清均轉(zhuǎn)為陽性 ,Ａ值小于 ,且隨血紅蛋白濃度減低 ,Ａ值逐漸增大。Ｌ 1的溶血血清標(biāo)本。 4. 吸取每個(gè)健康人血清 450μｌ ,加入 160ｇ用ＨｉＣＮ法測(cè)定上清Ｈｂ濃度。 (摘自： David O, Charles E. L, Stefani A,et al. Simultaneous Quantitation of Antibodies to Neutralizing Epitopes on VirusLike Particles for Human Papillomavirus Types 6, 11, 16, and 18 by a Multiplexed Luminex Assay. CLINICAL AND DIAGNOSTIC LABORATORY . 2020, p. 108– 115.) 不同程度溶血對(duì)ＥＬＩＳＡ法檢測(cè)乙肝抗體的影響 朱京山 背景介紹： 溶血可對(duì)多種檢驗(yàn)項(xiàng)目產(chǎn)生干擾，溶血時(shí)溶血到什么程度即可對(duì)ＥＬＩＳＡ法檢測(cè)抗２９ 體產(chǎn)生干擾尚無定論。 HPVLuminex 競(jìng)爭免疫分析通過以血清中 多克隆抗體取代 PE 標(biāo)記的中和單抗而結(jié)合到各自病毒樣顆粒的構(gòu)象性中和表位上，測(cè)定血清中和抗體滴度。宮頸癌是婦女癌癥死亡的第二大誘因，每年大約有 40 萬婦女死于宮頸癌。 由于人群中自然感染結(jié)核菌十分普遍，正常人體和非結(jié)核病人體內(nèi)也會(huì)存在著低度水平的結(jié)核抗 體，本組有 %的假陽性率。 血清抗 PPDIgG 診斷結(jié)核病的特異性為 %，敏感性為 %，其陽性率與痰菌關(guān)系不大，與病情變化有一定的相關(guān)性。 1．檢測(cè)對(duì)象 ：采用 ELISA 法對(duì) 331 例結(jié)核和非結(jié)核住院病人做了血清結(jié)核 IgG 抗體測(cè)定，將其分為兩組分別為肺結(jié)核組和肺結(jié)核組非結(jié)核病對(duì)照組。持續(xù)存在粘膜抗體反應(yīng)超過（ 3— 4個(gè)月 ） 則表明為帶毒狀態(tài)。牛呼吸道和消化道中的分泌免疫系統(tǒng)有一種復(fù)雜的結(jié)構(gòu)，在鼻和口腔分泌物中不同類型的免疫球蛋白與 18A或 IgGl反應(yīng)區(qū)結(jié)合。樣品于 4C過夜，用結(jié)合堿性磷酸酶的免抗牛 Ig抗血清檢測(cè)抗體。 （摘自：放射免疫學(xué)雜志， 2020（ 17）， 3， 205206） ２６ 用測(cè)定口咽液中抗體的方法檢測(cè)口蹄疫病毒感染牛 張香麗 目的： 建立一種現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè) FMDV感染的可靠方法。標(biāo)準(zhǔn)曲線參數(shù)的監(jiān)測(cè)結(jié)果其變異系數(shù)基本控制在 10%以內(nèi) ,說明檢測(cè)系統(tǒng)穩(wěn)定 ,被測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。 討論： : 應(yīng)用質(zhì)控血清監(jiān)測(cè)法評(píng)價(jià)批內(nèi)精密度、批間重現(xiàn)性和檢測(cè)偏差是內(nèi)部質(zhì)量控制主要內(nèi)容。 CEA3種質(zhì)控血清實(shí)測(cè)值與靶值偏差（ %）為 , , 。質(zhì)控方法采用質(zhì)控血清檢測(cè)法和標(biāo)準(zhǔn)曲線參數(shù)檢測(cè)法。該 ELISA 反應(yīng)體系能檢出 H5N3 標(biāo)準(zhǔn)株和所有 20株國內(nèi) H5 亞型 AIV 分離株 ,而與其他 14 個(gè)血凝素亞型的 AIV 標(biāo)準(zhǔn)株、 15 個(gè) H9 亞型 AIV 分離株和 2 個(gè) H7 亞型 AIV分離株均無交叉反應(yīng)。 生物素標(biāo)記單抗工作濃度的選擇 : 用健康雞胚尿囊液和稀釋至 32HA 的 H7N2AIV 尿囊液做對(duì)照 ,在包被有純化單抗的板孔中加入經(jīng)過倍比稀釋的 H5N1 病毒 ,同上孵育洗滌之后加入經(jīng)過倍比稀釋的生物素標(biāo)記單抗 ,37 ℃孵育 2 h , PBST 洗板 5次 ,每孔加入 100μ l 1∶ 1 000 稀釋的 HRP 標(biāo)記鏈酶親和素 ,37 ℃孵育 30 min ,PBST 洗板 5 次 ,顯色反應(yīng)同上 ,測(cè)定 A450 nm 讀數(shù)。 再將 H5N1 AIV 尿囊液、 H7N2 AIV 尿囊液用 PBST 稀釋至 32 個(gè)血 凝單位 (32HA) ,同時(shí)用健康雞胚尿囊液 1∶ 5 稀釋后作為對(duì)照 ,分別加入到包被有上述抗體的板孔中 ,100μ l/孔 ,37 ℃孵育 2 h ,PBST洗板 5 次 。 用。流感病毒捕獲 EIA 技 術(shù)在國外已有相關(guān)報(bào)道 ,用于檢測(cè) A 型流感病毒 ,但不能直接鑒定 H5亞型禽流感病毒 ,而國內(nèi)僅有用 ELISA 檢測(cè)病毒抗體的報(bào)道。血清學(xué)診斷和監(jiān)測(cè)方法 ,包括瓊脂凝膠擴(kuò)散試驗(yàn)和紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn) ,在國內(nèi)普遍實(shí)行免疫接種的情況下已經(jīng)失 去作用。甲肝、乙肝和丙肝患者均可重疊感染戊型肝炎病毒。結(jié)果：散發(fā)性急性肝炎中戊型肝炎感染率為 %，急性爆發(fā)肝炎病人中戊肝感染率為 %，沒有顯著性差異，流行特點(diǎn)為散發(fā)； 31例（占 100%）戊型肝炎病人均有接觸肝炎病人史和不潔飲食史；與甲肝混合感染率高，為%；男女發(fā)病比例為 1:，發(fā)病平均年齡為 ，大于甲肝的發(fā)病年齡。 快速進(jìn)行免疫反應(yīng)，較酶聯(lián)免疫法大大縮短了時(shí)間，提高了工作效率。發(fā)光信號(hào)檢測(cè)的寬線性加上獨(dú)特的標(biāo)記物本身循環(huán)發(fā)光，使電化學(xué)發(fā)光檢２２ 測(cè)的線性范圍更寬。電化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)采用電促化學(xué)發(fā)光，使用非同位素金屬三聯(lián)吡啶釕作為標(biāo)記物，由電極激發(fā) ，在三丙胺的參與下，迅速穩(wěn)定發(fā)光，使得檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定可靠。 相關(guān)性：結(jié)果表明，兩法差異無顯著性，兩法相關(guān)性良好。 目 的：電化學(xué)發(fā)光與酶聯(lián)免疫檢測(cè)血清甲胎蛋白的比較 方 法： 標(biāo)本：隨機(jī)抽取 165份臨床送檢血清標(biāo)本，包括正常和異常標(biāo)本。傳統(tǒng)的肝功能實(shí)驗(yàn)僅檢測(cè) HBsAg,而不檢測(cè)其他 4項(xiàng) HBV標(biāo)記物 ,按照我們的發(fā)現(xiàn)來估計(jì) ,會(huì)有相當(dāng)量的乙肝患者的漏診 ! 個(gè)人小結(jié)： 據(jù)上述文獻(xiàn)所報(bào)道就我公司 HBeAg項(xiàng)目前所出現(xiàn)的問題來分析，造成假陽性的原因是否與上述 7種原因有關(guān)，是否說明有一些假陽性是酶標(biāo)試劑所共同存在的必然結(jié)果，針對(duì)此文摘所講述的內(nèi)容并結(jié)合目前我公司 HBeAg項(xiàng)目存在的假陽性問題，通過系統(tǒng)調(diào)整可以解決一部分假陽性問題，那么無法解決的假陽性問題是否與上述 7種原因有關(guān)，我們的假陽性問題主要還是與原料有關(guān)，原料本身所造成的假陽性解決起來有一 定難度，是否可以找一些大量的 HBeAb強(qiáng)陽性的血清進(jìn)行沉淀，純化，然后標(biāo)記再進(jìn)行檢測(cè)，若可行的話，是否可以減少原料所造成的假陽性問題。對(duì) HBV研究和檢測(cè)近年來有了迅速發(fā)展 ,但仍有許多現(xiàn)象無法解釋清楚。 有文獻(xiàn)報(bào)道 [3],高滴度的 HBsAg易發(fā)生假陰性 ,即鉤狀效應(yīng)或前帶現(xiàn)象 ,用生理鹽水稀釋后可排除干擾 ,我們做了 1∶ 10,1∶ 20,1∶ 100倍血清稀釋后 ,結(jié)果未變。對(duì)于一些免疫功能亢進(jìn)的患者 ,由于抗 HBS產(chǎn)生過早 ,中和了 HBsAg,使之無法檢測(cè)出 ,而呈現(xiàn) HBeAg陽性。據(jù)報(bào)道 ,此種血清熱聚變 IgG中和 HBeAg可轉(zhuǎn)陰 ,或用 F(ab)2片段制備的酶結(jié)合物 ,也可除去 RF的干擾。在這 6例血清中 ,當(dāng)我們送至上級(jí)醫(yī)院用 RIA法檢測(cè)時(shí) ,有 3例 HBsAg陽性。 有助于確定乙肝患者、無病狀 HBV攜帶者及孕婦的傳染性強(qiáng)弱 。 臨床資料及方法： 6例血清均來自 1997年 3月至 1998年 8月門診收檢的疑為乙型肝炎的患者。 3次檢測(cè)用同一批號(hào)試劑，嚴(yán)格按說明書方法判斷陰陽性結(jié)果。 （摘自：現(xiàn)代診斷與治療 2020年 3月第 15卷第 3期） １８ 血清反復(fù)凍融對(duì) HBsAg 和抗 HBs 抗體檢測(cè)的影響 徐美艷 一、引言 :對(duì) 183份血清標(biāo)本凍融前、凍融 3次、凍融 6次后的 HBsAg和抗 HBs進(jìn)行了檢測(cè)和分析比較。 結(jié)果 :自制的 GIFA紙條法檢測(cè) 645份血清標(biāo)本 ,與 ELISA、 RIA法作對(duì)比 ,符合率分別為 %、%、 %,最低檢測(cè)濃度分別為 2ng/ml、 1ng/ml、 1ng/ml。 如果對(duì)現(xiàn)今有關(guān) SIV和 HIV的研究作仔細(xì)的探討，總結(jié)它的地理分布、蔓延的歷史、對(duì)人類和猿猴不同的致病性以及 HIV— O的存在，可以設(shè)想還有其他 HIV變異株在傳播，發(fā)現(xiàn)引起免疫 缺陷病的 HIV變異株，在 HIV1和 HIV— 2試驗(yàn)陰性的病人技術(shù)上是簡單的，可以將這類變異株稱之為HIV— U，如果變異株不引起典型的臨床癥狀，其發(fā)現(xiàn)則甚困難。獼猴的分支形成白面猴、狒狒和山魈，與 HIV— 2／ SIV— 2有緊密的聯(lián)系，人科 (黑猩猩與人類 )則伴有 HIV— 1／ SIV— l感染，亞洲猿 (馬來猩猩、長臀猿和獼猴 )不感染 SIV，同樣南美猿也不受感染，這些種系顯然是在 3000萬年前，從共同的靈長目分支出來的，亞洲的獼猴如同狒狒群體一樣，伴有 STLV— l感染，這是一種與 HTLV— l相似的致癌性逆轉(zhuǎn)錄病毒。 展望 根據(jù)長期保留的非洲的血清分析， H1V是一新近的傳染病，人類的傳播在扎伊爾始于 1959年，烏千達(dá)始于 1972年，馬拉維始于 1974年， HIV— 2似乎在相同的時(shí)間出現(xiàn)相應(yīng)流行， 1988年之后在象牙海岸的首府阿比讓， 265例艾滋病病人中至少 11例，確診為單純 HIV— 2感染，與 H1V相似的病毒也在猿猴中傳播， 例如 SIV— 1在黑猩猩， SIV— 2在白面猴或長尾猴中傳播，這些種系是自然感染的，而不是在與人類接觸后或在飼養(yǎng)過程中被感染的，但是獼猴是一個(gè)例外，是在飼養(yǎng)后感染SIV— 2的。另一方法是在提供的免疫印跡試驗(yàn)試劑中加入具有反應(yīng)性的保守區(qū)肽，這樣可排除抗 HIV— O標(biāo)本的漏檢。 競(jìng)爭 ELISA 有兩種試劑，采用自然和重組 HIV— 1抗原，競(jìng)爭歐洲和美國感染者的抗 HIV。純化 HIV制備的試劑現(xiàn)今已不再應(yīng)用。比利時(shí)已有 5例，法國 14例。在與喀麥隆接壤的中非共和國地區(qū)，迄今尚未鑒定出 HIV— O，其他的非洲國家尚無研究報(bào)道。另外，間接法在操作上采用兩步加樣，而夾心法為一步加樣，避免了加樣誤差。此外，北京試劑能以較高的 S/CO值檢出美國 BBI HTLV Panel全部陽性血清，說明其靈敏度明顯高于國外試劑。 3 結(jié)論 進(jìn)行獻(xiàn)血者 HTLV感染的篩查必須具備合適的檢測(cè)試劑盒。三種間接 酶免法試劑的陽性率經(jīng)配對(duì)統(tǒng)計(jì)處理χ 2=， P﹥ ，均無差異。 血清盤考核 為進(jìn)一步驗(yàn)證比較試劑質(zhì)量 ,分別用 Genelabs試劑和北京試劑檢測(cè)美國BBI HTLV參比血清。 1 材料與方法 血清標(biāo)本 標(biāo)本 797份采自來本站獻(xiàn)血的獻(xiàn)血者。 單克隆抗體的進(jìn)一步篩選。從定性到定量，快速診斷應(yīng)該更多的用于現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)測(cè)，而 RTPCR，免疫熒光， ＮＡＳＢＡ檢測(cè)方法 更適用于實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)實(shí)驗(yàn)。但是需要注意的是如何避免和降低標(biāo)本中出現(xiàn)的假陽性） 問題。 IFT最早用于病毒的鑒定和定位病毒感染細(xì)胞中特異性抗原，主要是核內(nèi)熒光；用 MP抗原的熒光抗體主要出現(xiàn)胞質(zhì)熒光，核內(nèi)也有部分熒光。 在技術(shù)流程方面，主要包括樣本采集和制備，反應(yīng)體系準(zhǔn)備，熒光定量 PCR反應(yīng)及檢測(cè)等幾個(gè)部分。 酶標(biāo)檢測(cè)比金標(biāo)試劑盒具有更高的靈敏度，可達(dá)到 1： 10000的檢出率，而且指針對(duì) H5型流感病毒?？蓹z測(cè)的標(biāo)本包括排泄物、口鼻腔分泌物、雞胚培養(yǎng)的完整病毒或裂解病毒等。 酶標(biāo)法 H5型流感病毒 HA抗原原理： 本試劑盒采用雙抗體夾心法檢測(cè)標(biāo)本中的 H5型流感病毒