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正文內(nèi)容

動物細(xì)胞培養(yǎng)-wenkub.com

2024-08-11 15:15 本頁面
   

【正文】 終止消化的方法為:加培養(yǎng)液,用吸管頭輕輕地、有序地吹打瓶壁細(xì)胞(從瓶底到瓶口,從瓶的一側(cè)到另一側(cè),注意吹打邊角細(xì)胞),細(xì)胞從支持物上脫落,并彼此分離懸浮于水中,液體混濁。將貼壁疏松的有絲分裂球形細(xì)胞振人培養(yǎng)液內(nèi),最后移入離心管中)。根據(jù)細(xì)胞生長特點(diǎn),傳代方法有三種:懸浮生長細(xì)胞傳代;半懸浮生長細(xì)胞傳代;貼壁生長細(xì)胞傳代。原代培養(yǎng)的首次傳代稱為第二代,是建立細(xì)胞系的關(guān)鍵時(shí)期。傳代培養(yǎng)可獲得大量細(xì)胞供實(shí)驗(yàn)所需。,配平離心,700rpm離心10min,吸取10ml培養(yǎng)液至培養(yǎng)瓶中。胸廓暴露后,可見心臟和粉紅色肺。實(shí)驗(yàn)材料:材料;4周齡新生乳鼠藥品:DMEM培養(yǎng)液,小牛血清(FCS),%胰蛋白酶,器材:培養(yǎng)瓶,培養(yǎng)皿1套/組,移液槍,剪子1把/組,鑷子2把/組,濾器,酒精燈設(shè)備:離心機(jī)、二氧化碳培養(yǎng)箱、倒置顯微鏡、超凈工作臺、二氧化碳培養(yǎng)箱實(shí)驗(yàn)步驟: 將4周齡新生乳鼠斷髓后,將尾巴提起,鼠身浸入75%酒精的燒杯中旋轉(zhuǎn)3 s左右(默數(shù)5下),取出放在滅菌的培養(yǎng)皿中,移入工作臺內(nèi)。原代細(xì)胞離體時(shí)間短,具有二倍體遺傳性,在一定程度上能反映體內(nèi)的生長特性,很適合作藥物測試、細(xì)胞分化和轉(zhuǎn)化等實(shí)驗(yàn)研究。融化后的液體置4℃保存。盡量減少試劑在空氣中的暴露時(shí)間。%,作用溫度37℃或室溫。(二)胰蛋白酶液 胰蛋白酶是一種黃白色粉末,水解蛋白質(zhì)時(shí)作用于與賴氨酸或精氨酸相連接的肽健,除去細(xì)胞間粘蛋白及糖蛋白,影響細(xì)胞骨架.從而使細(xì)胞分離。橡皮手套和儲在小瓶內(nèi)的溶液都不應(yīng)超過15分鐘。 為防止已消毒品
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