動物細(xì)胞培養(yǎng)-wenkub.com
2024-08-11 15:15 本頁面
【正文】 終止消化的方法為：加培養(yǎng)液，用吸管頭輕輕地、有序地吹打瓶壁細(xì)胞(從瓶底到瓶口，從瓶的一側(cè)到另一側(cè)，注意吹打邊角細(xì)胞)，細(xì)胞從支持物上脫落，并彼此分離懸浮于水中，液體混濁。將貼壁疏松的有絲分裂球形細(xì)胞振人培養(yǎng)液內(nèi)，最后移入離心管中）。根據(jù)細(xì)胞生長特點(diǎn)，傳代方法有三種：懸浮生長細(xì)胞傳代；半懸浮生長細(xì)胞傳代；貼壁生長細(xì)胞傳代。原代培養(yǎng)的首次傳代稱為第二代，是建立細(xì)胞系的關(guān)鍵時(shí)期。傳代培養(yǎng)可獲得大量細(xì)胞供實(shí)驗(yàn)所需。，配平離心，700rpm離心10min，吸取10ml培養(yǎng)液至培養(yǎng)瓶中。胸廓暴露后，可見心臟和粉紅色肺。實(shí)驗(yàn)材料：材料；4周齡新生乳鼠藥品：DMEM培養(yǎng)液，小牛血清(FCS)，%胰蛋白酶，器材：培養(yǎng)瓶，培養(yǎng)皿1套/組，移液槍，剪子1把/組，鑷子2把/組，濾器，酒精燈設(shè)備：離心機(jī)、二氧化碳培養(yǎng)箱、倒置顯微鏡、超凈工作臺、二氧化碳培養(yǎng)箱實(shí)驗(yàn)步驟： 將4周齡新生乳鼠斷髓后，將尾巴提起，鼠身浸入75％酒精的燒杯中旋轉(zhuǎn)3 s左右(默數(shù)5下)，取出放在滅菌的培養(yǎng)皿中，移入工作臺內(nèi)。原代細(xì)胞離體時(shí)間短，具有二倍體遺傳性，在一定程度上能反映體內(nèi)的生長特性，很適合作藥物測試、細(xì)胞分化和轉(zhuǎn)化等實(shí)驗(yàn)研究。融化后的液體置4℃保存。盡量減少試劑在空氣中的暴露時(shí)間。％，作用溫度37℃或室溫。（二）胰蛋白酶液 胰蛋白酶是一種黃白色粉末，水解蛋白質(zhì)時(shí)作用于與賴氨酸或精氨酸相連接的肽健，除去細(xì)胞間粘蛋白及糖蛋白，影響細(xì)胞骨架．從而使細(xì)胞分離。橡皮手套和儲在小瓶內(nèi)的溶液都不應(yīng)超過15分鐘。 為防止已消毒品
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