【正文】 而葉柄和莖的多糖含量差異不顯著。莖中總黃酮含量差異顯著；各器官中多糖含量均未達(dá)到顯著水平。；總黃酮含量依次為花柄葉花葉柄莖果果莢種子根，其中花柄中的總黃酮含量最高，％，根中的黃酮含量最少，％，總黃酮含量最高和最低的器官相差達(dá)近12倍；多糖含量依次為根花果葉花柄種子果莢莖；％，顯著高于其他器官，葉柄中的多糖含量最少，％。％。5結(jié)論：提取次數(shù)提取溫度乙醇用量；用70%的乙醇作為提取溶劑，以20倍的用量。生物產(chǎn)量和多糖含量?jī)蓚€(gè)因素也要兼顧。多糖含量在不同器官的分布與黃酮明顯不同，多糖含量最高的器官是根，%，顯著高于其他器官，而根卻是黃酮含量最低的器官：辣木多塘含量較高的器官是花、果實(shí)和葉片：葉柄中的多糖含量最少，％，與其他器官差異極顯著。要兼顧生物量和黃酮含量?jī)蓚€(gè)方面。從葉片中提取黃酮是要注意選擇45d左右的壯齡葉，擴(kuò)展中的幼葉和開始老化的葉黃酮含量都會(huì)下降。今后應(yīng)對(duì)辣木多糖的藥理功效等作進(jìn)一步深入研究。溫度稍高則變性，喪失或減低水溶性，影響生物活性。因此對(duì)多糖提取分離過程產(chǎn)生一定的影響。因此，在辣木多塘的提取中應(yīng)避免長(zhǎng)時(shí)間高溫抽提。本研究結(jié)果表明，陳瑞嬌、其測(cè)定結(jié)果與本研究有較大差異，原因可能與測(cè)定方法、辣木產(chǎn)地、辣木葉采集時(shí)間、采集部位等因素有關(guān)。不同植物的黃酮種類不同，應(yīng)用價(jià)值也可不相同，關(guān)于辣木黃酮的功效及其在臨床上的應(yīng)用需進(jìn)一步深入研究。乙醇濃度對(duì)總黃酮提取的影響是乙醇的濃度越高，總黃酮的得率越低，％的乙醇兼有極性、。水浴溫度對(duì)總黃酮得率的影響表明，并非水浴溫度越高，總黃酮得率就越高。實(shí)驗(yàn)中辣木中黃酮類化舍物是用醇和酮等溶劑提取的，考慮到保持溶劑的一致性，減少實(shí)驗(yàn)誤差，采用NaNO2 Al（NO3）3NaOH顯色體系。以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品。對(duì)于評(píng)價(jià)和監(jiān)測(cè)黃酮含量往往采用分光光度法，分光光度法白20世紀(jì)90年代以來由于其成本低、便于操作等特點(diǎn)，一直廣泛用于植物中黃酮類化臺(tái)物含量的測(cè)定，是一種快捷有效的方法。由表22的結(jié)果可以看出：同一器官不同朝向的多糖含量葉、葉柄、莖均沒有顯著性差異，比較辣木同朝向不同器官的多糖含量發(fā)現(xiàn)，葉的多糖含量顯著大于葉柄和莖的含量，而葉柄和莖的多轄含量差異不顯著。177。177。 注：表中縱向的大寫一母代表同一管理水平不同器官的多糖含量的極顯著性，橫向的大寫字母代表同一器官不同管理水平的辣木多糖含量的極顯著性。177。177。其中葉的多糖含量投顯著大于葉柄和莖的多糖含量。極顯著大于9月采收的辣木葉多糖含量：而葉柄和莖的多糖含量在各采收期中差異不顯著，因此，該種植地的辣木最佳采收期是11月。177。 Dd10177。 Dd177。177。aA種子177。bB花柄177。即充分展開的45d壯齡葉中的多糖含量顯著高于幼齡葉和老齡葉.3 2 表18不同器官辣木多糖含量的變化（n=3）器官多糖含量/%葉177。bAB45177。其測(cè)定結(jié)果與本研究有一定差異。園此，辣木多糖的最佳提取條件為A2B1C3D3，即提取3次，溶劑用量15倍，90℃水浴，每次120min。辣木葉多糖量呈先上升后下降的趨勢(shì)。從圖13可以看出：隨著提取時(shí)間的增加，辣木葉多糖量增加，提取時(shí)間達(dá)到120min時(shí)，多糖量達(dá)到最大，當(dāng)提取時(shí)間繼續(xù)加長(zhǎng)時(shí)，多糖的量明顯下降。 提取溫度對(duì)辣木葉多糖量的影響圖12 不同提取溫度下提取的辣木葉多糖量條件：5g，20倍的蒸餾水，回流3次，每次120min其他條件一定時(shí)，溫度對(duì)辣木葉多糖量的影響如圖12所示。 4溶劑用量對(duì)辣木葉多精量的影響圖11 不同溶劑用量下提取的辣木葉多糖量條件：5g，80℃，蒸餾水，回流3次，每次120min如圖11所示，隨溶劑用量的增加，辣木葉多糖的量呈先增后降的變化趨勢(shì)。莖177。張濤等測(cè)定結(jié)果與本研究一致。A為吸光度值，x為多糖含量(mg).～，與吸收度呈良好的線性關(guān)系?！ブg，其中超聲波提取法測(cè)得的多糖量最高，回流法次之，水提法多糖量最低，五種方法間多糖量的差異均達(dá)到了極顯著水平。將樹冠分為向陽(yáng)和背陽(yáng)兩部分。177。177。葉柄和莖在低水平的管理?xiàng)l件下總黃酮含量比在中等和高管理水平條件下的高，總黃酮含量依次為低中高，葉在中等管理水平下多糖含量最高(見表11，圖9)。 注：表中縱向的大寫一母代表同一管理水平不同器官的總黃酮含量的極顯著性，小寫字母代表同一管理水早不同器官總黃酮含量的顯著性；橫向的大寫字母代表同一器官不同管理水平的辣木總黃酮含量的極顯著性。177。177。8月份炎熱多雨，不利于辣木的生長(zhǎng)，葉片的擴(kuò)展變緩，因此，黃酮的含量較高；進(jìn)入9月份，氣溫趨于涼爽，雨水減少，很適于辣木的生長(zhǎng)，生長(zhǎng)速度快于黃酮的形成速度，使各器官的總黃酮含量都達(dá)到了最低水平；到11月份，氣溫逐漸降低，辣木的生長(zhǎng)幾乎趨于停頓，此時(shí)，黃酮的合成速度快于辣木的生長(zhǎng)速度，黃酮的積累量達(dá)到了最高。177。10177。177。177。其中11月采收的辣木葉總黃酮含量與其他4個(gè)月采收的差異極顯著：10月采收的辣木葉總黃酮含量間差異不顯著；它們都顯著高于9月采收的辣木葉總黃酮含量。gG種子177。cC花柄177。表8不同器官辣木總黃酮含量的變化（n=3）器官總黃酮含量/%葉177。因此。abAB30177。表5 辣木葉總黃酮提取條件的正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)號(hào)總黃酮量/%ABCD111112122231333421235223162312731328321393321K1K2K3X1X2X3R表6 不同提取條件下辣木葉總黃酮量的方差分析誤差來源離差平方和自由度方差方差比F臨界值SsfsFA2=B2=C2=D2誤差8 表7的結(jié)果表明：隨著葉齡的增長(zhǎng)，辣木葉片的總黃酮含量呈不規(guī)律變化，當(dāng)葉齡增長(zhǎng)到45d時(shí)，葉片的總黃酮含量達(dá)最高，％；其次為生長(zhǎng)15d的幼齡葉和60d的老齡葉，％~％之間；生長(zhǎng)30d的壯齡葉的總黃酮含量最低，％。但最佳提取條件為：用70%的乙醇作為提取溶劑。各因素的最佳組合水平為A3B2C1D3，即辣木總黃酮的最佳提取條件為：用70%的乙醇作為提取溶荊，提取溫度80℃，乙醇用量20倍，提取時(shí)間90min，提取次數(shù)3次。當(dāng)提取次數(shù)到4次時(shí)，總黃酮量變化不大，說明提取4次以后，有效成分已基本溶出。乙醇用量越大，濃度梯度越大，物質(zhì)溶出越多，所以20倍的乙醇用量是一個(gè)平衡點(diǎn)。圖2 不同乙醇濃度下提取的辣木葉總黃酮量條件：5g，70℃，乙醇用量20倍，回流3次，每次120min 如圖3所示，隨乙醇用量的增加，辣木葉總黃酮量呈梯度變化。從經(jīng)濟(jì)、安全、實(shí)用方面考慮，乙醇回流法是最適合辣木總黃酮的提取方法?；亓鞣ǖ奶崛∪軇┮砸掖甲詈?，甲醇次之，丙酮最差。因此，在本試驗(yàn)選擇的測(cè)定時(shí)間內(nèi)，黃酮類化合物與鋁離子生成的絡(luò)合物顯色是穩(wěn)定的。 本研究以最小二乘法作線形回歸方程，得蘆丁質(zhì)量濃度C(mg／m1)與吸光度A的關(guān)系為：A=，相關(guān)系數(shù)r= mg／ml范圍內(nèi)。表2多糖正交實(shí)驗(yàn)因素水平表水平ABCD提取溫度/℃溶劑用量/倍提取時(shí)間/min提取次數(shù)1801590129020120231002515033結(jié)果與分析表3多糖正交實(shí)驗(yàn)因素水平表提取方法黃酮總量/%顯著性123平均值標(biāo)準(zhǔn)差回流法aA水提法aA超聲法bB離心法cC分級(jí)法cC采用水提取、有機(jī)溶劑回流提取、有機(jī)溶劑離心提取、超聲波提取和分級(jí)沉淀提取等五種方法對(duì)辣木葉粉中總黃酮進(jìn)行了提取，提取效果如表3所示。取按標(biāo)準(zhǔn)曲線方法操作，根據(jù)回歸方程計(jì)算多糖中葡萄糖的濃度，按下式計(jì)算出換算因子f，f=W／C*D，其中w為多糖質(zhì)量(mg)，C為葡萄糖濃度(mg／m1)，D為稀釋因素。／ml范圍內(nèi)，吸光度與濃度線形關(guān)系良好。準(zhǔn)確吸取此溶液5ml，分別置于10ml具塞試管中，并用蒸餾水定容，準(zhǔn)確吸取各濃度溶液2m1分別置于10ml具塞試管中，每管加入5％(取苯酚100g，,，蒸餾收集182℃餾分。將透明的上清液定容至250ml，獲得多糖待測(cè)液，用于測(cè)定吸光度值?？紤]到上述各因素之間的互作效應(yīng)，在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用四因素三水平L9(34)進(jìn)行正交試驗(yàn)，以確定最佳提取條件組合。同時(shí)，置于10m1刻度試管中，％，在510hm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值，并按回歸方程計(jì)算樣品溶液中總黃酮含量。再加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4％的NaOH溶液4ml，搖勻，室溫放置10～15 min。、 ml。從上述提取液中準(zhǔn)確吸取5ml，置于25ml容量瓶中，分別用對(duì)應(yīng)濃度的乙醇定容至刻度，即得樣品溶液，備用。TDL5000B型低速冷凍奪冠離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)；飛穗牌JFSD100G干樣粉碎機(jī)(上海嘉定糧油儀器有限公司)：Ultrospec 2000紫外分光光度計(jì)(瑞士Amersham Pharmacia Biotech公司)等。共標(biāo)記三次。從7月29日開始采收第一次，以后每30天采收一次，一直到11月26日。從7月29日開始采收第一次，以后每30天采收一次，一直到11月26日，共采收5次。2材料與方法辣木于2000年4月28日播種，經(jīng)過整枝，修剪，土壤肥力控制等各種管理后，經(jīng)鑒定生長(zhǎng)情況良好，采樣時(shí)間為2007年711月。近年來我國(guó)廣東、云南、海南、福建等地紛紛引種種植辣木，對(duì)辣木的開發(fā)利用研究正在南方各地展開。要使更多多糖應(yīng)用于l臨床，造福于人類，這需要廣大化學(xué)家、食品學(xué)家、以顯示多糖類化臺(tái)物廣闊應(yīng)用前景。多糖作為一種重要生命物質(zhì)，具有豐富生物活性，且無毒副作用，這有利于我們進(jìn)一步開發(fā)新藥，并不斷擴(kuò)展其在保健品、功能性食品中應(yīng)用，這是多糖區(qū)別予其它藥物一大優(yōu)勢(shì)。植物多糖的廣泛生物活性已被人們認(rèn)知。國(guó)際上對(duì)糖類的研究日新月異，內(nèi)容包括糖生物學(xué)、糖工程等，并且相繼多次召開了有關(guān)“糖生物學(xué)和糖工程”的專題會(huì)議，1995年3月。而國(guó)外，特別是日本學(xué)者加強(qiáng)了對(duì)中藥多糖活性片段(活性決定簇)的化學(xué)結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系的系統(tǒng)研究，并在柴胡、當(dāng)歸多糖研究方面取得了突破性進(jìn)展。多糖作為一類重要的生物活性物質(zhì)。多糖在自然界分