sdspage電泳測(cè)定ppt課件-wenkub.com
2025-05-02 18:23 本頁(yè)面
【正文】 為了得到更全面的資料，還必須用其它方法測(cè)定其分子量及分子中肽鏈的數(shù)目等，與 SDS凝膠電泳的結(jié)果互相參照。例如組蛋白 F1，它本身帶有大量正電荷，因此，盡管結(jié)合了正常比例的 SDS，仍不能完全掩蓋其原有正電荷的影響，它的分子量是 21,000，但SDS凝膠電泳測(cè)定的結(jié)果卻是 35,000。 ? 6．染色及脫色 將染色液倒入培養(yǎng)皿中，染色 1h左右 ，用蒸餾水漂洗數(shù)次，再用脫色液脫色，直到蛋白區(qū)帶清晰，即用直尺分別量取各條帶與凝膠頂端的距離。 ? 5．電泳 將直流穩(wěn)壓電泳儀開關(guān)打開，開始時(shí)將電流調(diào)至 10mA。處理好的樣品液如經(jīng)長(zhǎng)期存放，使用前應(yīng)在沸水浴中加熱 1分鐘，以消除亞穩(wěn)態(tài)聚合。 （ 2）濃縮膠的制備：按表配制 10ml 3%濃縮膠，混勻后用細(xì)長(zhǎng)頭滴管將濃縮膠加到已聚合的分離膠上方，直至距離短玻璃板上緣約 ，輕輕將樣品槽模板插入濃縮膠內(nèi)，避免帶入氣泡。本實(shí)驗(yàn)采用 SDSPAGE不連續(xù)系統(tǒng)，按下表的配制分離膠和濃縮膠。 實(shí)驗(yàn)步驟 ? 1． 安裝夾心式垂直板電泳槽：目前，夾心式垂直板電泳槽有很多型號(hào)，雖然設(shè)置略有不同，但主要結(jié)構(gòu)相同，且操作簡(jiǎn)單，不易泄漏。 （ 9）樣品溶解液：取 SDS 100mg，巰基乙醇 ，甘油 1mL，溴酚藍(lán) 2mg， ， ，加重蒸水至 10mL（遇液體樣品濃度增加一倍配制）。 （ 4） 10%濃縮膠貯液：稱 Acr 10g及 Bis ，溶于重蒸水中，最后定容至 100mL，過濾后置棕色試劑瓶中， 4℃ 貯存?？膳渲瞥蓡我坏鞍踪|(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液，也可配成混合蛋白質(zhì)標(biāo)
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