【正文】 ? 工作曲線(xiàn)法、外標(biāo)一點(diǎn)法、外標(biāo)二點(diǎn)法 ? 進(jìn)樣量必須準(zhǔn)確，否則誤差大。 HPLC 色譜柱類(lèi)型 類(lèi) 型 內(nèi)徑 D (cm) 柱長(zhǎng) (cm) 粒徑 (181。 –優(yōu)點(diǎn)： 縮短分析周期；提高分離效果；改善峰形；增加檢測(cè)靈敏度。若使用高粘度溶劑，勢(shì)必增高壓力，不利于分離。 痕量雜質(zhì)的存在 ， 將使截止波長(zhǎng)值增加 50～ IOOnm。 對(duì)于折光率檢測(cè)器 ， 要求選擇與組分折光率有較大差別的溶劑作流動(dòng)相 ， 以達(dá)最高靈敏度 。 （ 2）溶劑要與檢測(cè)器匹配。 ? 分析酸類(lèi)物質(zhì)：用季銨鹽作離子對(duì)試劑，如四丁基銨磷酸鹽（ TBA）和溴化十六烷基三甲基銨（ CTAB）等； ? 分析堿類(lèi)物質(zhì)：用烷基磺酸鹽作離子對(duì)試劑，如正戊烷基磺酸鈉（ PICB5）、正己烷基磺酸鈉（ PICB6）等； 離子對(duì)試劑的選擇與分離機(jī)理 用途 ? 使反相色譜法得以用于有機(jī)酸 、 堿 、鹽的分離 ， 如生物堿 、 有機(jī)酸 、 磺胺類(lèi)藥物 、 某些抗生素與維生素等 。 正相色譜的溶劑極性參數(shù) P′ 溶劑 P′ 溶劑 P′ 正己烷 乙酸乙酯 乙醚 丙酮 二氯甲烷 甲醇 正丙醇 乙腈 THF 乙酸 氯仿 水 ? 二元溶劑系統(tǒng)的溶劑強(qiáng)度因子 P′ab= P′aφa+P′bφb P′a 、 P′b：純?nèi)軇?a,b的極性參數(shù) φa、 φb： 純?nèi)軇?a,b的體積分?jǐn)?shù) 2. 反相色譜法的流動(dòng)相選擇 （ 1）反相液相色譜的溶劑參數(shù)（用強(qiáng)度因子 S 值描述） 反相洗脫溶劑的強(qiáng)度因子 S值 ? 在正相洗脫時(shí)，水洗脫能力最強(qiáng)； ? 在反相洗脫時(shí)，水洗脫能力最弱； ? 沖洗能力： THF＞ 乙腈 ＞ 甲醇 ＞ 水 ? 二元溶劑系統(tǒng)的溶劑強(qiáng)度因子 Sab=Saφ a+Sbφ b Sa、 Sb：純?nèi)軇?a,b的強(qiáng)度因子 φ a、 φ b： 純?nèi)軇?a,b的體積分?jǐn)?shù) 溶劑 S值 水 0 甲醇 乙腈 丙酮 二惡烷 乙醇 異丙醇 THF （ 2）二元溶劑體系 一般以洗脫力最弱的水為底劑，再加入與水互溶的有機(jī)極性調(diào)節(jié)劑如甲醇、或乙腈，組成一定比例的甲醇 水、或乙腈 水為流動(dòng)相。 2. 中等極性鍵合相： 如鍵合醚基，可分離能形成氫鍵的化合物（如酚類(lèi)） 3. 極性鍵合相 （ 1）氨基鍵合相：分析糖類(lèi)最常用的固定相 （單糖、雙糖、多糖） 注意：不宜分析含羰基的化合物，流動(dòng)相也不能含羰基。 二、化學(xué)鍵合固定相的制備 二、化學(xué)鍵合固定相的制備 （ l） 形成 鍵 這類(lèi)是最早用于液相色譜的鍵合固定相 ， 用醇與硅羥基發(fā)生硅醚化反應(yīng) 。 2. 反相液液色譜 ①固定相極性 流動(dòng)相極性； ②主要用于分離油溶性化合物； ③流出順序：極性大的組分先流出，極性小的 組分后流出。 值 溶劑 ε176。 來(lái)表示溶劑的洗脫強(qiáng)度。 二、分離原理： 溶質(zhì)分子 與流動(dòng)相分子爭(zhēng)奪吸附劑表面活性中心 ,利用吸附劑對(duì)不同組分的吸附能力差異而實(shí)現(xiàn)分離。 2)外標(biāo)單點(diǎn)法 實(shí)際應(yīng)用，只配制一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液，但其濃度盡量與被測(cè)物接近 C樣 =（ A樣 /A標(biāo) ） C標(biāo) 對(duì)內(nèi)標(biāo)物的要求 1. 純度高； 2. 不是試樣中的組分； 3. 與各組分完全分離（且保留時(shí)間與待測(cè)組分接近） 4. 與樣品混溶性好 5. 化學(xué)結(jié)構(gòu)與待測(cè)組分相似 內(nèi)標(biāo)法特點(diǎn) ? 優(yōu)點(diǎn) ： 1）不是所有組分都出峰； 2）定量結(jié)果重復(fù)性好，操作要求不嚴(yán)格 ? 缺點(diǎn) ： 內(nèi)標(biāo)物尋找困難 內(nèi)標(biāo)法計(jì)算 ? 在樣品中加入一種純物質(zhì)作內(nèi)標(biāo)物，則待測(cè)組分 i的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為： mis ：內(nèi)標(biāo)物質(zhì)量， m：樣品質(zhì)量 fi′：組分 i的相對(duì)校正因子， fis′：內(nèi)標(biāo)物的相對(duì)校正因子 Ai ：組分 i的峰面積， Ais：內(nèi)標(biāo)物的峰面積 %1 0 0( % )39。面積歸一化法 ? 優(yōu)點(diǎn) ： A. 不需要標(biāo)準(zhǔn)品； B. 對(duì)操作要求不嚴(yán)。)(39。)(39。 ? 做法：在樣品和標(biāo)準(zhǔn)品中分別加入同一種基準(zhǔn)物 s，將樣品的 ?i,s和標(biāo)準(zhǔn)品的 ?i,s相比較，來(lái)確定樣品中是否含有 i組分。 據(jù)經(jīng)驗(yàn)式定性 :碳數(shù)規(guī)律 ? 在一定溫度下 ， 同系物的調(diào)整保留時(shí)間的對(duì)數(shù)與分子中碳原子數(shù)成線(xiàn)性關(guān)系 ， 即： （ n≥3） 式中 ， A和 C是常數(shù) ， n為分子中的碳原子數(shù) CAnt R ??39。s1 （ P） 1011 g 線(xiàn)性范圍 熱導(dǎo) 氫火焰 電子俘獲 火焰光度 分類(lèi) 通用 準(zhǔn)通用 選擇型 選擇型 響應(yīng)類(lèi)型 濃度型 質(zhì)量型 濃度型 質(zhì)量型 檢出限 108 g ?良好的檢測(cè)器其噪聲與漂移都應(yīng)很小 靈敏度 靈敏度 （ S） ： 待分析樣品通過(guò)檢測(cè)器時(shí) ， 物質(zhì)量的變化對(duì)響應(yīng)信號(hào)的變化率 。 質(zhì)量型檢測(cè)器： 檢測(cè)信號(hào)值與單位時(shí)間內(nèi)進(jìn)入檢測(cè)器組分的質(zhì)量成正比。降低柱溫可在一定程度內(nèi)改善分離； 升高柱溫可加快分析速度。 ? 毛細(xì)管色譜的優(yōu)越性還表現(xiàn)在對(duì)痕量物質(zhì)的分析上，其檢測(cè)限已達(dá)到 Pg以下。 第六節(jié) 氣相色譜儀 1. 氣路系統(tǒng) 2. 進(jìn)樣系統(tǒng) 3. 色譜柱系統(tǒng) 4. 檢測(cè)系統(tǒng) 5. 數(shù)據(jù)處理和控制系統(tǒng)（含溫控系統(tǒng)） GC分析流程 氣相色譜儀組成 氣路系統(tǒng) ? 提供高純、流速穩(wěn)定、封閉的載氣； ? 包括氣源、凈化器和載氣流速控制器； ? 凈化器： ? 載氣流速控制：壓力表、流量計(jì)、針形穩(wěn)壓閥，控制載氣流速恒定。 裂解氣相色譜 基本原理及方法 基本原理 ： 在一定條件下 ， 高分子及非揮發(fā)性有機(jī)化合物遵循一定的裂解規(guī)律 ， 即特定的樣品能夠產(chǎn)生特征的裂解產(chǎn)物及產(chǎn)物分布 ， 采用氣相色譜分析鑒定裂解產(chǎn)物 ， 據(jù)此可對(duì)原樣品進(jìn)行表征 。 用途： 有機(jī)物中痕量水 ， 多元醇 、 脂肪酸 、 胺類(lèi) 。 ? 氣－液色譜固定相 ： 固定液 + 載體（ 擔(dān)體 ） ? 載體 ， 亦稱(chēng)擔(dān)體 ， 是支撐固定液的惰性多孔物質(zhì) 填充柱氣相色譜用載體 作為擔(dān)體使用的物質(zhì)應(yīng)滿(mǎn)足的條件： A. 比表面積大，孔徑分布均勻； B. 化學(xué)惰性，表面無(wú)吸附性或吸附性很弱，與被分離組份不起反應(yīng)； C. 具有較高的熱穩(wěn)定性和機(jī)械強(qiáng)度，不易破碎； D. 顆粒大小均勻、適度。 E. 在高流速區(qū) ,傳質(zhì)阻力項(xiàng)占主導(dǎo) ,流動(dòng)相使用輕載氣 。s 1） 。)(16)( 塔板理論的成功與不足 塔板理論能成功解釋色譜峰的形狀 （ 高斯分布曲線(xiàn) ） 及評(píng)價(jià)柱效 （ 計(jì)算 n） 。????KVVccVVmVVmmmkmSmsmmmSSSmS ?????容量因子越大 ， 保留時(shí)間越長(zhǎng) 。 調(diào)整保留時(shí)間（ tR ＇）： tR＇ = tR－ tM (2) 用體積表示的保留值 保留體積 （ VR） ： VR = tR F0 （ F0為色譜柱出口處的載氣流量， 單位： m L / min。 3. GC中載氣是惰性的，載氣的功能僅僅是攜帶試樣、洗脫組分。 ? 添加劑 熒光指示劑 硝酸銀溶液 制板、活化 點(diǎn)樣 ； ； ； ； :內(nèi)徑 定量分析 :微量注射器 6. TLC:原點(diǎn)直徑最大不超過(guò) 5mm,一般 3mm。 無(wú)機(jī)黏結(jié)劑的優(yōu)點(diǎn)是：耐高溫，耐酸堿，但涂鋪薄板動(dòng)作要快，否則勻漿易凝固 。 – 樣品處理 ? TLC要求沒(méi)有 HPLC嚴(yán)格。 TLC特點(diǎn) 優(yōu)點(diǎn)： ? 設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便、運(yùn)行費(fèi)用低； ? 分離時(shí)間短，工作效率高； ? 展開(kāi)劑選擇范圍廣，展開(kāi)方式多樣； ? 顯色方便，檢測(cè)手段豐富； ? 既可分析，又可制備； ? 試樣一般不需要經(jīng)過(guò)嚴(yán)格預(yù)處理即可分離。 ? 70年代中后期發(fā)展了高效薄層色譜。 聚酰胺 ? 通過(guò)形成氫鍵締合而產(chǎn)生吸附； ? 分子中的酰胺羰基作為質(zhì)子受體； ? 或以酰胺鍵上的 NH作為質(zhì)子給體； ? 適用范圍：酚類(lèi)、黃酮類(lèi)、醌類(lèi) 。 不足之處 ： 被分離組分的定性較為困難 。 （ 2） 靈敏度高 可以檢測(cè)出 μ (106)級(jí)甚至 (109)級(jí)的物質(zhì)量 。 色譜法的出現(xiàn) 色譜法 利用混合物中各組分在兩相間分配系數(shù)的不同 ,當(dāng)兩項(xiàng)作相對(duì)位移時(shí)，各組分在兩相間經(jīng)過(guò)反復(fù)多次的分配平衡，使得各組分被固定相保留的時(shí)間不同，從而獲得分離（各組分按一定次序由固定相中流出）。 與適當(dāng)?shù)闹髾z測(cè)方法結(jié)合，實(shí)現(xiàn)混合物中各組分的分離與檢測(cè)。 （ 3） 分析速度快 一般在幾分鐘或幾十分鐘內(nèi)可以完成一個(gè)試樣的分析 。 氣相色譜 （ 流動(dòng)相為氣體 ） 液相色譜（ 流動(dòng)相為液體） 柱色譜 平面色譜 吸附色譜 分配色譜 離子交換色譜 排阻色譜 流動(dòng)相物態(tài) 固定相使用形式 分離過(guò)程機(jī)制 流動(dòng)相為氣體 （ 稱(chēng)為載氣） 固定相為固體吸附劑 氣相色譜 氣固色譜 氣液色譜 流動(dòng)相為氣體 （ 稱(chēng)為載氣） 固定相為液體 流動(dòng)相為液體 （淋洗液） 固定相為固體吸附劑 。 溶劑的極性 ? 溶劑的極性 :與介電常數(shù)大小一致 ? ? 環(huán)己烷 ?