【正文】 （單糖、雙糖、多糖） 注意：不宜分析含羰基的化合物，流動相也不能含羰基。 2. 反相液液色譜 ①固定相極性 流動相極性； ②主要用于分離油溶性化合物； ③流出順序：極性大的組分先流出，極性小的 組分后流出。 來表示溶劑的洗脫強(qiáng)度。 2)外標(biāo)單點法 實際應(yīng)用，只配制一個標(biāo)準(zhǔn)溶液，但其濃度盡量與被測物接近 C樣 =（ A樣 /A標(biāo) ） C標(biāo) 對內(nèi)標(biāo)物的要求 1. 純度高； 2. 不是試樣中的組分； 3. 與各組分完全分離（且保留時間與待測組分接近） 4. 與樣品混溶性好 5. 化學(xué)結(jié)構(gòu)與待測組分相似 內(nèi)標(biāo)法特點 ? 優(yōu)點 ： 1）不是所有組分都出峰； 2）定量結(jié)果重復(fù)性好，操作要求不嚴(yán)格 ? 缺點 ： 內(nèi)標(biāo)物尋找困難 內(nèi)標(biāo)法計算 ? 在樣品中加入一種純物質(zhì)作內(nèi)標(biāo)物，則待測組分 i的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為： mis ：內(nèi)標(biāo)物質(zhì)量， m：樣品質(zhì)量 fi′：組分 i的相對校正因子， fis′：內(nèi)標(biāo)物的相對校正因子 Ai ：組分 i的峰面積， Ais：內(nèi)標(biāo)物的峰面積 %1 0 0( % )39。)(39。 ? 做法：在樣品和標(biāo)準(zhǔn)品中分別加入同一種基準(zhǔn)物 s，將樣品的 ?i,s和標(biāo)準(zhǔn)品的 ?i,s相比較，來確定樣品中是否含有 i組分。s1 （ P） 1011 g ?良好的檢測器其噪聲與漂移都應(yīng)很小 靈敏度 靈敏度 （ S） ： 待分析樣品通過檢測器時 ， 物質(zhì)量的變化對響應(yīng)信號的變化率 。降低柱溫可在一定程度內(nèi)改善分離； 升高柱溫可加快分析速度。 第六節(jié) 氣相色譜儀 1. 氣路系統(tǒng) 2. 進(jìn)樣系統(tǒng) 3. 色譜柱系統(tǒng) 4. 檢測系統(tǒng) 5. 數(shù)據(jù)處理和控制系統(tǒng)（含溫控系統(tǒng)） GC分析流程 氣相色譜儀組成 氣路系統(tǒng) ? 提供高純、流速穩(wěn)定、封閉的載氣； ? 包括氣源、凈化器和載氣流速控制器； ? 凈化器： ? 載氣流速控制：壓力表、流量計、針形穩(wěn)壓閥，控制載氣流速恒定。 用途： 有機(jī)物中痕量水 ， 多元醇 、 脂肪酸 、 胺類 。 E. 在高流速區(qū) ,傳質(zhì)阻力項占主導(dǎo) ,流動相使用輕載氣 。)(16)( 塔板理論的成功與不足 塔板理論能成功解釋色譜峰的形狀 （ 高斯分布曲線 ） 及評價柱效 （ 計算 n） 。 調(diào)整保留時間（ tR ＇）： tR＇ = tR－ tM (2) 用體積表示的保留值 保留體積 （ VR） ： VR = tR F0 （ F0為色譜柱出口處的載氣流量， 單位： m L / min。 ? 添加劑 熒光指示劑 硝酸銀溶液 制板、活化 點樣 ； ； ； ； :內(nèi)徑 定量分析 :微量注射器 6. TLC:原點直徑最大不超過 5mm,一般 3mm。 – 樣品處理 ? TLC要求沒有 HPLC嚴(yán)格。 ? 70年代中后期發(fā)展了高效薄層色譜。 不足之處 ： 被分離組分的定性較為困難 。 色譜法的出現(xiàn) 色譜法 利用混合物中各組分在兩相間分配系數(shù)的不同 ,當(dāng)兩項作相對位移時，各組分在兩相間經(jīng)過反復(fù)多次的分配平衡，使得各組分被固定相保留的時間不同，從而獲得分離（各組分按一定次序由固定相中流出）。 （ 3） 分析速度快 一般在幾分鐘或幾十分鐘內(nèi)可以完成一個試樣的分析 。 溶劑的極性 ? 溶劑的極性 :與介電常數(shù)大小一致 ? ? 環(huán)己烷 ? 苯 ? 無水乙醚 ? 氯仿 極性遞增 ? 乙酸乙酯 ? 乙醇 ? 甲醇 ? 水 ? ◆ 按照 極性增強(qiáng) 順序，常用混合洗脫溶劑 ? 體系如下： ? (己烷 /苯 ) → (苯 /乙醚 ) → ( 苯 /乙酸乙酯 ) ? → ( 氯仿 /乙醚 ) → ( 氯仿 /乙酸乙酯 ) → ? (氯仿 /甲醇 ) → ( 丙酮 /水 ) → （甲醇 /水） 三要素的相互關(guān)系 第三章 平面色譜法 ? 第一節(jié) TLC的特點、技術(shù)參數(shù) ? 第二節(jié) TLC的制板、點樣、展開、顯色 ? 第三節(jié) TLC的定性與定量分析 ? 第四節(jié) TLC的應(yīng)用 ? 第五節(jié) 紙色譜簡介 第一節(jié) 概 述 ? 1938年俄國人首先實現(xiàn)了在氧化鋁薄層上分離一種天然藥物。 缺點： ? 分離效率較低；不適用揮發(fā)性試樣分離；定性定量不便。 薄層強(qiáng)度差。 4. GC的選擇性主要取決于固定相和組分分子間的作用，所以可通過改變固定相來改變 GC的選擇性。 可由保留時間計算出容量因子 ， 兩者有以下關(guān)系： mmmk s ?? 組分在流動相中的質(zhì)量組分在固定相中的質(zhì)量三、塔板理論 ? 塔板理論把色譜柱看成一個精餾塔，沿用精餾塔中塔板的概念來描述組分在兩相（固定相與流動相）間的分配行為，并引入理論塔板數(shù)作為衡量柱效高低的指標(biāo)。 由于柱中存在著濃度差 ， 產(chǎn)生縱向擴(kuò)散： 3. 傳質(zhì)阻力項 — Cu 組分在氣相和液相兩相間進(jìn)行反復(fù)分配時，遇到阻力。一般常用 60~80目、80~100目。 方法 ： 樣品置于裂解器中 ， 在嚴(yán)格控制的條件下 ， 快速加熱 ，使之迅速分解成為可揮發(fā)的小分子產(chǎn)物 ， 然后直接將裂解產(chǎn)物送入色譜柱中進(jìn)行分離 ， 獲得定性定量數(shù)據(jù) 。 柱溫的選擇 ； 柱溫 過高，易造成固定液流失、檢測器噪聲變大、基線漂移。 通用型檢測器： 對所有物質(zhì)有響應(yīng) 選擇型檢測器： 對特定物質(zhì)有高靈敏響應(yīng) 對檢測器的要求 1. 穩(wěn)定性好、噪聲低； 2. 靈敏度高； 3. 線性范圍寬； 4. 死體積小，響應(yīng)快 噪聲和漂移 ?噪聲（ N） ：在沒有樣品進(jìn)入檢測器時，基線在短期內(nèi)發(fā)生的波動。mL1 1013 glg 據(jù)經(jīng)驗式定性 :沸點規(guī)律 ? 同族具有相同碳數(shù)的異構(gòu)體 ， 其調(diào)整保留時間的對數(shù)和它們的沸點呈線性關(guān)系 ，即： 式中， A和 C均為常數(shù)， Tb為組分的沸點（ K）。)(39。 ? 缺點 ： A. 所有組分必須全部出峰； B. 所有組分必須知道相對校正因子 ? 面積歸一化的計算公式： %1 0 0)(( % )139。 三、固定相 酸性：硅膠、硅酸鎂 極性吸附劑 （表面 PH≈5） 堿性：氧化鋁、氧化鎂 固定相 （表面 PH10～ 12） 非極性吸附劑：活性碳 2. 硅膠 （ 1）薄殼型（表面多孔型）， 60年代初，在直徑30～ 40μm的玻璃珠表面涂布一層 1 ～ 2μm厚的硅膠微粒。 溶劑 ε176。 制法： 缺點：易水解 、 熱穩(wěn)定性差 ， 現(xiàn)少用 。 甲醇 /水體系 ：對易形成氫鍵的極性樣品選擇性 高，沖洗能力強(qiáng)； 乙腈 /水體系 ：對含有雙鍵的樣品選擇性高和分 離效率高； THF/水體系 ：對其他樣品和非極性化合物沖洗 能力強(qiáng) （ 3）多元溶劑體系 ①在甲醇 水、或乙腈 水體系中加入少量的THF，常能改善某些難分離的物質(zhì)對的分離度； ②若某些色譜峰拖尾，可加入減尾劑，如三乙胺等； ③用水、甲醇、乙腈、 THF組成四元溶劑體系，并進(jìn)行優(yōu)化，選出最佳溶劑體系 Synder溶劑分組 Synder溶劑分組 組別 溶 劑 Ⅰ 脂肪醚、甲基叔丁基醚 、四甲基胍、 六甲基磷酰胺、三烷基胺 質(zhì)子受體溶劑 Ⅱ 脂肪醇（ 甲醇 ） Ⅲ 吡啶衍生物、 THF、酰胺（除甲酰胺）、 乙二醇醚、亞砜 Ⅳ 乙二醇、芐醇、 乙酸 、甲酰胺 Ⅴ 二氯乙烷 、 二氯甲烷 、 偶極作用力溶劑 Ⅵ 脂肪酮和酯、聚醚、 二惡烷 、砜、腈 (乙腈 ) Ⅶ 芳烴、 甲苯 、鹵代芳烴、硝基化合物、芳醚 Ⅷ 氟代醇、間甲苯酚、水、 氯仿 質(zhì)子給予體溶劑 五、分離機(jī)制 疏溶劑理論 A. 當(dāng)溶質(zhì)分子被流動相推動與固定相接觸時，溶 質(zhì)分子中的非極性部分會將非極性固定相上附 著的溶劑膜排擠開，并與之形成締合物； B. 這種疏溶劑的斥力作用是可逆的，當(dāng)流動相極 性減小時，這種疏溶劑斥力下降，發(fā)生解締， 并將溶質(zhì)分子釋放下來。對于紫外吸收檢測器，應(yīng)注意選用檢測器波長比溶劑的紫外截止波長要長。 （ 4） 化學(xué)穩(wěn)定性好 。 –缺點： 有時引起基線漂移；重復(fù)性不佳。 內(nèi)標(biāo)法（內(nèi)標(biāo)物的選擇） ? 工作曲線法 ? 內(nèi)標(biāo)一點法 ? 內(nèi)標(biāo)二點法 ? 內(nèi)標(biāo)對比法（最常用） ? 校正因子法 優(yōu)點：使用內(nèi)標(biāo)法可抵消儀器穩(wěn)定性差、進(jìn)樣量不夠準(zhǔn)確帶來的誤差。 低壓梯度 : 一臺高壓泵 , 通過比例調(diào)節(jié)閥 ,將兩種或多種不同極性的溶劑按一定的比例抽入高壓泵中混合。 (5)低粘度。表 202列出了一些常用溶劑的紫外截止波長。 反相離子對色譜法定義 反相離子對色譜法： 把 離子對試劑 加入極性流動相中 ， 被分析的樣品離子在流動相中與離子對試劑的反離子生成 不荷電的中性離子對 (離子對模式說 )， 從而增加了樣品離子在非極性固定相中的溶解度 ，使分配系數(shù)增加 ， 改善分離效果 。 三、化學(xué)鍵合相種類 1. 非極性鍵合相： 如鍵合 C1 C苯基等，其中十八烷基（ ODS或C18）鍵合相是常用的代表，可完成 HPLC分析任務(wù)的 80%。 二、分類： 1. 正相液液色譜 ①固定相極性 流動相極性； ②主要用于分離極性化合物； ③流出順序：極性小的組分先流出，極性大的 組分后流出。 ? 液 固色譜中常用溶劑強(qiáng)度參數(shù) ε 176。??????niiiiiiAfAfw外標(biāo)法特點 優(yōu)點