凝膠層析ppt課件-wenkub.com
2025-04-30 18:09 本頁(yè)面
【正文】 =）n A、 an B、 bn C、 cn D、 d2022年中科院考研題2022年上海師范大學(xué)考研題n 指出從分子排阻層析柱上洗脫下來(lái)下列蛋白質(zhì)時(shí)的洗脫順序，為什么？分離蛋白質(zhì)的范圍是5,000400,000。特點(diǎn)：簡(jiǎn)便實(shí)用，所需樣品量較少 三、測(cè)定分子質(zhì)量① pH6~8的范圍內(nèi)，曲線線性才比較好；而在極端 pH時(shí)，由于變性等原因易偏高 ② 一般 適用于球狀 pro的分子量測(cè)定，而纖維狀 pro不合適③ 糖蛋白中若 糖的比例 ＞ 5％時(shí)，測(cè)定結(jié)果偏大④ 不受 變性劑 如尿素和鹽酸胍的影響⑤ 有些酶類不適用。④ Ve： 洗脫體積 a－ dKav+Kav 半縮法：是過(guò)度法，用 60%70%的乙醇使凝膠部分脫水，然后封口， 4 ℃ 保存。洗脫 凝膠柱的再生及保存 （ 1）、 再生 僅使用過(guò)一次的凝膠柱，通常進(jìn)行更新平衡后即可再次使用；但使用過(guò)多次后，由于凝膠床體積變小、流動(dòng)速度降低或污染雜質(zhì)過(guò)多等原因，致使其正常性能受到影響。 一般來(lái)說(shuō)，加樣量越少，分辨率越高。加樣量與層析柱床體積及檢測(cè)方法的靈敏度有關(guān)。將出口打開(kāi)，使表面的蒸餾水流出，直至恰好與表面相平（不可使床面干掉），關(guān)緊出口，用滴管將上述樣品緩緩地加到床表面，注意盡量 不要使平整的床表面攪動(dòng) ，然后打開(kāi)出口，讓樣品進(jìn)入床內(nèi)，直至床面恰好露出，用上法不斷加蒸餾水洗滌 柱床體積穩(wěn)定；167。 不得有氣泡和分層 凝膠層析法分離蛋白質(zhì) [操作 ]1. 裝柱： 在層析柱的底部出口套上乳膠塑料管，向?qū)游鲋鶅?nèi)加蒸餾水趕走在層析柱的死體積和接口處的氣泡，在蒸餾水高度約占體積的 1/3時(shí)，關(guān)閉下端出口，自頂部緩緩加入已處理好的 Sephadex七 .應(yīng)用：柱短而粗 ,則易使樣品稀釋 ,柱長(zhǎng)而窄 ,則柱的管壁效應(yīng)較大 ,會(huì)造成拖尾現(xiàn)象。選擇何種凝膠以及它的型號(hào) ,這需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件 ,溶質(zhì)的分子量的大小和分離工作的目的而定 ,每種型號(hào)凝膠都有一定分離溶質(zhì)分子量的范圍 ,選擇的型號(hào)凝膠要能滿足實(shí)驗(yàn)要求。 該凝膠具有良好的分子篩特性和物理、化學(xué)穩(wěn)定性。 化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定： 它在所有的溶劑中不 溶解 ，化學(xué)降解也很少；它可在 pH2— 11范圍 內(nèi)使用，當(dāng) pH低時(shí)，葡聚糖鏈發(fā)生少許水解作用；在 中 (室溫 )處理 100h，對(duì)其低流速和多孔性沒(méi)有明顯影響 。 不為微生物利用，易保存。后面的數(shù)字再乘1000就相當(dāng)于該凝膠的排阻限度。 2B、 4B、 6B分別表示瓊脂糖濃度為 2% 、 4% 、 6% 。瓊脂糖凝膠不帶電荷 ,不受微生物作用而降解 ,但對(duì)熱不穩(wěn)定 ,易受 pH影響 (只在 范圍內(nèi)穩(wěn)定 . 瓊脂糖凝膠的 機(jī)械強(qiáng)度和篩孔的穩(wěn)定性 都比葡聚糖凝膠好，分離范圍大。因此進(jìn)行葡聚糖凝膠層析時(shí)，常用 含有 NaCl的緩沖液作洗脫液。 但是，當(dāng)暴露于 強(qiáng)酸或氧化劑 溶液時(shí)，則容易使 糖苷鍵水解斷裂 ，因此，要避免與其接觸。耐熱耐堿不耐酸 。時(shí)控制加入交聯(lián)劑的百分比決定 .交聯(lián)劑的百分比高 ,交聯(lián)度大 ,網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)愈緊密 ,孔隙愈小 ,吸水后膨脹也愈小 ,機(jī)械強(qiáng)度高 ,分離物質(zhì)的分子量也小。OH ,3環(huán)丙烷使葡聚糖之間通過(guò)醚鍵 (COCH2CHCH2O)交聯(lián)四 .凝膠的結(jié)構(gòu)與性能 對(duì)某些溶質(zhì)分子具有吸附作用 ,如化。質(zhì)不穩(wěn)定的物質(zhì)也很少被破壞。學(xué)反應(yīng)。構(gòu)穩(wěn)定 ,所以凝膠 本身不與樣品發(fā)生化 三 .凝膠層析的特點(diǎn) （一）優(yōu)點(diǎn)= 當(dāng) 0＜ Kav＜ 1時(shí) ， Ve=Vo+ Kav（ Vi ＋ Vg ）。 當(dāng) Kav=1時(shí) ， Ve=Vo+Vi組分分子量越大，則洗脫更容易（排阻越多）， 越小， 越小 各組分間的 值差異越大，分離效果越好； 差異越小 ,則分離效果很差，或根本無(wú)法分離 流出物用部分收集器等量或等時(shí)收集，檢測(cè)后分段合并相同組分的各管流出物，得到分子量不同的各種組分 當(dāng) Kav=0時(shí) ，則 Ve=Vo V0、 Vi 、 Vg都是隨著床體積和基質(zhì)性質(zhì)變化而變化的。 Ve = V0＋＋ Kav(ＶＶ ｉｉ ＋Ｖ＋Ｖ ｇｇ ) 在薄層層析時(shí)，流動(dòng)相又稱 展層劑展層劑 。 固定相是由層析基質(zhì)組成的。三、常用術(shù)語(yǔ) 主要機(jī)理是 分子篩效應(yīng) ,當(dāng)被分離物質(zhì)流經(jīng)凝膠柱時(shí) ,因各組份的 分子大小
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1