層析法理論ppt課件-wenkub.com
2025-04-30 22:12 本頁面
【正文】 對分離含量極少又不穩(wěn)定的活性物質尤為有效。 親和層析 具有專一親和力的生物分子對主要有：抗原與抗體、 DNA與互補 DNA或 RNA、酶與它的底物或競爭性抑制劑、激素（或藥物）與它們的受體、維生素和它的特異結合蛋白、糖蛋白與它相應的植物凝集素等 舉例 ： mRNA的分離 原理 ： ? 以總 RNA為起始材料，利用核酸的 堿基配對原理 ，通過寡聚（ dT）纖維素或者寡聚（ U）瓊脂糖 親合層析 從大量的 RNA中分離 mRNA。 Vt = 1/4 πd2h ?外水體積 V0：層析柱內凝膠顆粒間隙的總容積。 強酸型： R— SO3H pH 014 不受酸度限制 33R SO H N a R SO N a H????交換 洗脫 弱酸型： R— COOH pH4 R— OH pH 選擇性好 , 可分離各種有機堿及氨基酸 強堿型： R — N(CH3)3Cl pH 014 弱堿型： R — NH2 ， R— NHCH3 pH 07 R— N(CH3)2 pH 螯合樹脂： 含有特殊的螯合活性基團 + +33R N H OH C l R N H C l OH? ? ???交換 洗脫 +2 2 3R N H H O R N H OH?? 水化作用 陰離子交換樹脂 : 含堿性活性基團的樹脂 樹脂對離子的親和力順序 強酸型陽離子交換樹脂 對一價陽離子 Li+ H+ Na+ NH4+ K+ Rb+ Cs+ Ag+ Tl+ 對二價陽離子 Mg2+ Ca2+ Sr2+ Ba2+ Fe2+ Co2+ Ni2 +Cu2+ Zn2+ 水合離子半徑越小親和力越大 強堿型陰離子交換樹脂 F OH Ac HCOO H2PO4 Cl NO3 HSO4 CrO42 SO42 對不同價態(tài)離子 Na+ Ca2+ Fe3+ Th4+ 電荷數越高親和力越大 四、凝膠層析 （ Gel chromatography） 凝膠層析是指混合物隨流動相流經裝有凝膠作為固定相的層析柱時，混合物中 各物質因分子大小不同 而被分離的技術。 （ 3）多孔性，表面積大，交換容量大，回收率高，可用于分離和制備。 固定相 —— 濾紙上的吸附水 流動相 —— 溶劑（乙醇、丙醇、丙酮及與水不相溶 的溶劑） 分離示意圖 Rf ， A、 B可分離 . 12f1f2fxRyxRyxRy???比移值溶劑前沿 起始線 （原點） 展開劑 y x2 x1 層析缸 層析紙 與標樣比較可定性鑒定 ?如果兩種氨基酸的遷移速率相近，或者氨基酸的 Rf值相同，如何來分離？ 氨基酸的 Rf值
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