親和層析ppt課件-wenkub.com
2025-01-11 06:07 本頁面
【正文】 3. 配體應(yīng)具備哪些條件？ 海南大學(xué)農(nóng)學(xué)院 wss55 2022/2/11 ，親和層析與吸附層析、離子交換層析、凝膠層析有哪些異同點？ A、 B、 C、 D四種蛋白質(zhì)組分的混合液中，A和 B均為含有葡萄糖鏈的糖蛋白，其 pI分別為 ，而 C和 D分子量分別是 40000和 50000，試設(shè)計用層析法分離它們的方案。 ↓ ↓ ↓ 固定化NAD柱 海南大學(xué)農(nóng)學(xué)院 wss51 2022/2/11 ? 染料樹脂 ? 不專一的親和介質(zhì) ? 優(yōu)點 : ? 穩(wěn)定、和許多類型的酶結(jié)合，但又不被酶所作用、價格低廉。 ? 緊鄰結(jié)合位點的位置加入蛋白酶切割位點 ，以便在用親和層析純化之后，將多余的蛋白質(zhì)片段去掉 。D DiscPAGE A B C = D 以 凝膠電 泳 鑒 定 親 和 層 析 操作 過 程各步 驟 的 樣 本 → Chitin 海南大學(xué)農(nóng)學(xué)院 wss47 2022/2/11 ? 由于受體蛋白在激素與其互補(bǔ)的膜結(jié)合中的重要作用，同時其含量極低，使研究受阻。它們具有不同的糖結(jié)合專一性。 海南大學(xué)農(nóng)學(xué)院 wss39 2022/2/11 親和吸附劑：基質(zhì) 間隔臂 抗體 (抗原 )組成，用于鑒定、分離、純化樣品中的抗原(抗體 ) 、抗體的純化 海南大學(xué)農(nóng)學(xué)院 wss40 2022/2/11 Protein A對 IgG類物質(zhì)有較大的束縛力，加之免疫球蛋白被束縛之后仍保留了 IgG束縛抗原的特性。 海南大學(xué)農(nóng)學(xué)院 wss35 2022/2/11 三、減少結(jié)合鍵增加配體與蛋白質(zhì)的互補(bǔ)效應(yīng) ? 以蛋白質(zhì)與多肽為配體時，以最少的共價鍵連接至載體，利于保護(hù)蛋白質(zhì)的高級結(jié)構(gòu)及生物活性； ? 控制偶聯(lián)反應(yīng)的 pH，減少蛋白質(zhì)分子與基質(zhì)連接的鍵；位點的減少，可以結(jié)合更多的蛋白質(zhì)，提高結(jié)合容量。因此，通過在 載體與配體之間引 入適當(dāng)長度的“手 臂”減少載體的空 間位阻，增加配 體的活動度。游離配體濃度若與配體濃度相同，則可直接從基質(zhì)上洗脫小結(jié)合的酶。 海南大學(xué)農(nóng)學(xué)院 wss21 2022/2/11 常用配體 分離對象 酶蛋白 基質(zhì)類似物、抑制劑、輔酶、底物、產(chǎn)物等 抗 體 抗原、病毒、細(xì)胞 外源凝集素 多糖、糖蛋白、細(xì)胞表面受體、結(jié)合蛋白 核 酸 互補(bǔ)堿基序列、組蛋白、核酸聚合酶、結(jié)合蛋白 激素及維生素 受體、載體蛋白 細(xì) 胞 細(xì)胞表面特異性蛋白、外源凝集素 專一性結(jié)合的生物體系 海南大學(xué)農(nóng)學(xué)院 wss22 2022/2/11 配體 待純化的蛋白質(zhì) 配體 待純化的蛋白質(zhì) 抗原 特定單克隆抗體或多克隆抗體 肝素 凝聚因子、脂酶、結(jié)締組織蛋白酶、 DNA聚合酶 單克隆抗體 特定抗原 膽固醇 膽固醇受體、膽固醇結(jié)合蛋白 蛋白質(zhì) A/蛋白質(zhì) G 免疫球蛋白 脂肪酸 脂肪酸結(jié)合蛋白、白蛋白 蛋白酶抑制劑 蛋白酶 核苷酸 核苷酸結(jié)合蛋白、需核苷酸的酶 磷酸 磷酸酶 苯基硼酸鹽 糖蛋白 三嗪染料 脫氫酶、激酶、聚合酶、限制酶、干擾
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