分子生物學(xué)技術(shù)(1)-wenkub.com
2025-01-10 07:55 本頁(yè)面
【正文】 ?依據(jù)是 ddNTP核糖的第三位位碳原子上不含羥基，不能與下一核苷酸反應(yīng)形成磷酸二酯鍵，致使 DNA合成反應(yīng)終止。新合成的 DNA分子作為下一輪合成的模板，經(jīng)多次循環(huán)（ 25～ 30次）后即可達(dá)到擴(kuò)增 DNA片段的目的。 ? 原理 :以目的 DNA分子為模板，以一對(duì)分別與模板 5’末端和 3’末端互補(bǔ)的寡核苷酸片段為 引物 ，在 DNA聚合酶的作用下，按照 半保留復(fù)制 的機(jī)制沿著模板鏈延伸直至完成新的 DNA合成。 轉(zhuǎn)移完成后 ， 加熱使 DNA固定于 NC膜上 ， 用于雜交反應(yīng)可進(jìn)行 DNA印漬 。 ? 核酸研究中的應(yīng)用十分廣泛 。 ＤＮＡ的復(fù)性 ? 變性ＤＮＡ在適當(dāng)條件下 ， 兩條互補(bǔ)鏈可重新配對(duì) ， 恢復(fù)天然的雙螺旋構(gòu)象 ，這一現(xiàn)象稱為復(fù)性 。常用分子生物學(xué)技術(shù)的 原理和應(yīng)用 ＤＮＡ的變性 ? 在某些理化因素作用下 ， DNA分子互補(bǔ)堿基對(duì)之間的氫鍵斷裂 ， 使ＤＮＡ雙螺旋結(jié)構(gòu)松散 ， 變成單鏈 ， 即為ＤＮＡ 變性 。 ? 熱變性的ＤＮＡ經(jīng)緩慢冷卻后即可復(fù)性 ，又稱退火 。 探針技術(shù) ? 探針是經(jīng)過特殊標(biāo)記的核酸片段，具有特定的序列，能夠與待測(cè)的核酸片段互補(bǔ)結(jié)合，因
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