【正文】 ④對應(yīng)用的技術(shù)有哪些改進(jìn)和建議。 ②本研究技術(shù)理論或技術(shù)成果的適用范圍以及應(yīng)用條件。 ③本研究尚未解決的問題以及對今后研究方向的設(shè)想或建議等。 ? 結(jié)論的內(nèi)容 ： ?學(xué)術(shù)性論文 ①本研究的新發(fā)現(xiàn)，揭示的新規(guī)律，得出的新理論等。 177。** 177。 177。** 177。 177。 177。 177。 177。 ? 實時熒光定量 PCR檢測 dsRNA飼喂后蚜蟲體內(nèi) P450 表達(dá) 分析 ? …… 在飼喂 P450dsRNA 6 和 8 d 后，麥長管蚜體內(nèi)細(xì)胞色素 P450 表達(dá)量依次降低了 %、 %、 %和 %，桃蚜體內(nèi)細(xì)胞色素 P450 表達(dá)量依次降低了%、 %、 %和 %（表 4），與對照（ 0 d 的表達(dá)量）相比表現(xiàn)為差異顯著 ……, 進(jìn)一步說明通過飼喂 dsRNA 能夠在麥長管蚜和桃蚜體內(nèi)引起細(xì)胞色素 P450 的RNAi 效應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞色素 P450的 表達(dá)量明顯降低，直至蚜蟲死亡。 第 2輪是兩枚漿片著生在靠近外稃的一側(cè) 。m, C和 F為 200 181。 pa: 內(nèi)稃 。 sl。 F: 典型的的 mf1小穗的橫切面。 B: 圖 A中的小穗去掉內(nèi)外稃后的形態(tài) 。 材料 Material 株高 Plant height (cm) 每穗粒數(shù) Grain number per panicle 每穗實粒數(shù) Filled grain number per panicle 結(jié)實率 Seed setting rate (%) 千粒重 1000grain weight (g) WT dh2 ** ** ** 農(nóng)藝性狀調(diào)查 農(nóng)藝性狀調(diào)發(fā)現(xiàn) ， 和野生型相比 ， dh2突變體在株高和每穗粒數(shù)上面沒有顯著的變化， 但是其每穗實粒數(shù)極顯著降低 ， 相較于野生型的 %的結(jié)實率 ， 突變體僅為 %。 野生型水稻小穗由一對副護(hù)穎 、一對護(hù)穎 、 一對內(nèi)外 稃 、 兩枚漿片 、 6枚雄蕊 和 1枚雌蕊 組成 (圖 1A, B和 C)。 ? 結(jié)果書寫要求： ② 要 清晰具體 能量化的結(jié)果一定要量化，少用不確定的詞語 對于一些形象化的結(jié)果，要轉(zhuǎn)化成具體的文字 野生型水稻的小穗從基部到頂部依次由一對副護(hù)穎 (退化的苞片 )、 一對護(hù)穎 (退化的側(cè)生小花 , 僅有不育外稃 ) 和一個正常的頂生小花構(gòu)成 (圖 1A, B和 C)。 ? 結(jié)果書寫要求： ?要簡明扼要 ?要具體清晰 ?要注意邏輯順序 ?表格、圖片要有自明性，要避免與文字的重復(fù) ?研究者的評論、評價、分析和推理要適當(dāng) ?不要夾雜以前和他人的工作 ?不要使用原始實驗數(shù)據(jù) ? 結(jié)果書寫要求： ① 要簡明扼要 mf1突變體的遺傳分析 在抽穗期 , 調(diào)查 mf1和 12個恢復(fù)系及其雜交組合的 F1和 F2群體的表型 , 發(fā)現(xiàn)所有組合的 F1植株都表現(xiàn)正常 , 而在所有組合的 F2 群體中 , 野生型和突變型出現(xiàn) 3︰ 1分離 (表 1), 表明 mf1突變性狀受控于隱性單基因。 篩選 親本及基因池 間表現(xiàn) 多態(tài) 性的 SSR標(biāo)記 ， 經(jīng)單株驗證表現(xiàn)與突變性狀連鎖后用于 分析 F2群體中的 所有 突變單株 ， 將具有 mf1突變親本帶型的單株記為 B, 具有正常親本 IR24帶型的單株記為A, 具有雜合帶型的單株記為 H, 用軟件 MMQTX18計算 連鎖標(biāo)記與突變位點(diǎn)之間的 遺傳距離并構(gòu)建遺傳圖譜 。 94 ℃ 變性 30 s, 55℃ 退火 30 s, 72℃ 復(fù)性 1 min, 35個循環(huán) 。 篩選 親本及基因池 間表現(xiàn) 多態(tài) 性的 SSR標(biāo)記 ， 經(jīng)單株驗證表現(xiàn)與突變性狀連鎖后用于 分析 F2群體中的 所有 突變單株 ， …… 連鎖標(biāo)記與突變位點(diǎn)之間的 注意 過于簡化 水稻多小花小穗突變體 mf1的鑒定與基因定位 DNA的提取與 SSR分析 按 CTAB法提取親本和基因池 DNA[15], 按堿煮法提取群體 DNA[16]。 72℃ 延伸 10 min。 SSR引物序列參照 /microsat/, 由上海生工生物技術(shù)公司合成 。 自制試劑 低磷脅迫水稻根部基因表達(dá)譜研究 microarray 熒光探針的標(biāo)記、雜交、洗脫和掃描 中早 18 處理和對照材料 mRNA 各取 μg 作為模板 , 在 400 U SuperscriptⅡ 反轉(zhuǎn)錄酶 (Invitrogen, Carlsbad, CA)催化下加入 μg Oligo dT(18)(Takara, Japan), 40 μL 反應(yīng)體系中包含 10 mmol/L DTT, 40 U RNase 抑制劑 (Promega, Madison, Wisconsin, USA), dATP, dCTP 和 dGTP 各 500 μmol/L, dTTP 和 aadUTP各 200 μmol/L (Sigma, St. Louis, Missouri, USA) 以及 1 第一鏈合成緩沖液 . 在 42℃ 反應(yīng) 3 h 合成 cDNA 第一鏈 , 隨后 94℃ 變性3 min 終止反應(yīng) , 加入 RNaseH(Promega, Madison, WI), 然后 37℃ 反應(yīng) 15 min 去除 mRNA, 酚 /氯仿抽提反應(yīng)混合物 , YM30 柱 (Millipore,USA) 純化產(chǎn)物 . …… 縮寫： cDNA合成體系 40 μL， 包含 μg mRNA， …… .。 DHβE(N), 尼古丁和抑制劑組 : 小鼠皮下注射抑制劑 ( mg/kg/天 )15 min后皮下注射尼古丁( mg/kg /天 )[17]. 動物每日注射尼古丁 ( mg/kg/天 )或生理鹽水連續(xù)不同時間 . 擬南芥 Fbox基因 FOA1參與 ABA信號轉(zhuǎn)導(dǎo) ABA 和 NaCl 處理 、 種子萌發(fā)及根長分析 將擬南芥種子用 75%酒精浸泡 30 s, 然后用 10%NaClO 浸泡 10 min, 無菌水清洗 4~6 次后 , 置于 4℃ 黑暗環(huán)境春化 4 天 , 分別用于 ABA 和 NaCl 處理 、 種子萌發(fā)及根長分析 . (1) ABA和 NaCl 處理 . 用 %的瓊脂糖懸浮種子 , 均勻點(diǎn)播于 MS 固體培養(yǎng)基 (含 %瓊脂 )上 , 轉(zhuǎn)移至溫度為 22~23℃ , 光強(qiáng)為 50 μmol s 1 m 2 的全日照培養(yǎng)箱 . 14 天后 , 將野生型 Col0 幼苗的根泡在含 ABA(10 μmol/L)或 NaCl(100 mmol/L)的MS液體培養(yǎng)基中分別處理 0, 1, 2, 4, 6 和 8 h, 用于分析外源 ABA和 NaCl 對 FOA1 基因表達(dá)的調(diào)節(jié) 。 ThL, L茶氨酸低劑量組 : 小鼠皮下注射 L茶氨酸 (250 mg/kg/天 )。 乙酰膽堿受體 AChR4 (sc74519), AChR2 (sc11372), AChR7 (sc11372), TH (sc25269), cFOS (sc52)和 Actin (sc1616R) 抗體購自 Santa Cruz Biotechnology (SantaCruz, CA, USA)。 2NBDG 購自 Invitrogen Co. (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)。 圖譜構(gòu)建 將具有 mf1突變親本帶型的單株記為 B，具有正常親本 IR24帶型的單株記為 A，具有雜合帶型的單株記為 H，用軟件 MMQTX18計算遺傳距離并構(gòu)建遺傳圖譜。 SSR引物序列參照 由上海生工生物技術(shù)公司合成 。 切片厚度為 10 181。 將 mf1與12個恢復(fù)系雜交 , F1和 F2用于遺傳分析 。如對原法做了修改，只寫出方法名稱和修改部分，并解釋為什么進(jìn)行了修改； ?對作者自行設(shè)計和創(chuàng)造的新方法應(yīng)詳細(xì)描述。 水稻多小花小穗突變體 mf1的鑒定與基因定位 ? 沒有明確的研究意義 水稻花器官發(fā)育的基因調(diào)控已成為近年來的研究熱點(diǎn)。擬南芥 …… ， 然而，由于禾本科植物本身有著一些獨(dú)特的花或花序結(jié)構(gòu)，人們對這些物種的花發(fā)育調(diào)控仍然了解得不夠深入。 研究 表明，棉鈴蟲腸道中特異 P450 可提高棉鈴蟲幼蟲對棉花次生代謝物質(zhì)和棉酚的耐受性，利用表達(dá)棉鈴蟲 P450 dsRNA的轉(zhuǎn)基因煙草和棉花葉片飼喂棉鈴蟲幼蟲，可導(dǎo)致幼蟲體內(nèi) P450 的表達(dá)量下降、發(fā)育受阻，表現(xiàn)出抗棉鈴蟲性能 [89]。 【前人研究進(jìn)展】 植物介導(dǎo)的 RNAi 技術(shù)已成為農(nóng)作物抗蟲基因工程的熱點(diǎn)之一，通過寄主植物表達(dá)相應(yīng)昆蟲特異基因的 dsRNA，昆蟲取食植物后沉默其相應(yīng)的基因從而達(dá)到控制害蟲危害的 目的。 【擬解決的關(guān)鍵問題】本研究利用體外合成的麥長管蚜和桃蚜的細(xì)胞色素 P450保守序列 dsRNA 結(jié)合人工飼料飼喂麥長管蚜和桃蚜，觀察 dsRNA 飼喂?jié)舛群蜁r間對蚜蟲的生長發(fā)育和死亡率影響，通過 RTPCR 分析取食后蚜蟲細(xì)胞色素 P450 表達(dá)水平的變化情況，為利用 RNAi 技術(shù)創(chuàng)制抗蚜蟲小麥和蔬菜提供依據(jù)。迫切需要挖掘和鑒定新型抗蚜基因并通過基因工程育種提高小麥和蔬菜抗蚜特性 。 RNAi現(xiàn)象其作用過程是雙鏈 RNA（ dsRNA）進(jìn)入生物體內(nèi)，被 Dicer 酶切割成 21— 23 nt 的 siRNA[34]， siRNA 與 RNA 誘導(dǎo)沉默復(fù)合物結(jié)合，與互補(bǔ)序列的靶 mRNA結(jié)合，被 Dicer 識別，造成靶基因表達(dá)量的下降 [5]。近年來， …… 其危害日趨嚴(yán)重 [2]。已經(jīng)克隆到的昆蟲 P450 超過了 1 000 個 [13]。 …… 棉鈴蟲腸道中特異 P450 可提高棉鈴蟲