【導讀】{ "error_code": 17, "error_msg": "Open api daily request limit reached" }

　　

【正文】 百分含量 （ %） 標準 偏差 a b 平均值 c d RSD（％） e 表 22 為金絲桃素重復性試驗結(jié)果， RSD 值為 %，說明該方法的重復性良好。 穩(wěn)定性試驗 表 23 金絲桃素穩(wěn)定性試驗結(jié)果 The result of stability test 時間 （ h） 峰面積 測得 量 （ μg） 標準偏差 0 平均值 5 RSD（％） 10 表 23 為金絲桃素穩(wěn)定性試驗結(jié)果，結(jié)果表明在 10 小時內(nèi)， RSD 值為 %，該方法在10 小時內(nèi)該方法穩(wěn)定性良好。 加樣回收試驗 表 24 金絲桃素加樣回收試驗結(jié)果 The result of recovery test 樣品 樣品 含量（ μg） 加入量（ μg） 實測值 （ μg） 回收率 (%) 標準偏差 a b 平 均值 c d RSD（ ％ ） e 表 24 金絲桃素加樣回收試驗結(jié)果， 表明該提取和檢測方法精密度良好。 偽金絲桃素 HPLC 定量的方法學研究 線性關系考察 得到偽金絲桃素標準曲線，如圖 28： 偽金絲桃素標準曲線 y = 1475x + R2 = 1050010001500202125000 1 偽金絲桃素質(zhì)量(ug )峰面積 圖 28 偽金絲桃素的標準曲線 The calibration curve of Pseudohypericin 圖 29 為 偽 金絲桃素的標準曲線圖，可以得到 偽 金絲桃素的線性回歸方程： Y=1475x+， R2=1。 偽金絲桃素進樣量在 。 精密度試驗 表 25 偽金絲桃素精密度試驗結(jié)果 The result of precision test 次數(shù) 峰面積 測得 量 （ μg） 標準偏差 1 2 平均值 3 4 5 6 RSD（％） 7 表 25 為偽金絲桃素精密度試驗結(jié)果， RSD 為 %，說明該方法精密度良好。 重復性試驗 表 26 偽金絲桃素重復性試驗結(jié)果 The result of reproducibility test 樣品 編號 樣品量 （ mg） 峰面積 測得 量 （ μg） 偽金絲桃素 百分含量 (%) 標準 偏差 a b 平均值 c d RSD（％） e 表 26 為偽金絲桃素重復性試驗結(jié)果， RSD 值為 %，說明該方法的重復性良好。 穩(wěn)定性試驗 表 27 偽金絲桃素穩(wěn)定性試驗結(jié)果 The result of stability test 時間 峰面積 測得 量 （ μg） 標準偏差 0 h 平均值 RSD（％） 10h 表 27 為 偽金絲桃素穩(wěn)定性試驗結(jié)果，在 10 小時內(nèi)， RSD 值為 %，說明在 10 小時內(nèi)該方法穩(wěn)定性良好。 加樣回收試驗 表 28 偽金絲桃 素加樣回收試驗結(jié)果 The result of recovery test 樣品 樣品含量（ μg） 加入量（ μg） 實測值 （ μg） 回收率 (%) 標準 偏差 a b 平均值 c d RSD（ %） e 表 28 為偽金絲桃素加樣回收試驗結(jié)果，表明該提取和檢測方法精密度良好。 貫葉連翹浸膏的定量分析 所測得結(jié)果取平均值，市售貫葉連翹浸膏（寧波神馬公司）中金絲桃素含量為 ％，偽金絲桃素含量為 ％。 本章小結(jié) （ 1） 本章采用薄層層析法建立了金絲桃素和偽金絲桃素的定性檢測方法。以硅膠 GF254高效預制板為固定相，氯仿 :甲醇＝ :；石油醚 :乙酸乙酯 :甲醇 =5:20:2；二氯甲烷 :甲醇 =9:1為流動相進行展開，在紫外 366nm 下進行觀察，結(jié)果金 絲桃素和偽金絲桃素顯出明顯的紅色熒光，無其他物質(zhì)干擾，效果良好。 （ 2） 采用 HPLC 法對金絲桃素和偽金絲桃素進行定量檢測。流動相為 甲醇 Na2HPO4（ H3PO4調(diào) ） =7:1，檢測波長為 590nm，柱溫為 30℃ ，流速為 ，結(jié)果圖譜中金絲桃素和偽金絲桃素峰形尖銳，無拖尾現(xiàn)象，分離效果良好，保留分別為 和 。對該方法進行的方法學研究表明，金絲桃素和偽金絲桃素的線性范圍分別為 ，精密度、重 復性、穩(wěn)定性和加樣回收結(jié)果良好。 第三章 金絲桃素和偽金絲桃素提取方法的研究 實驗器材 主要試劑及原料 氯仿，分析純， 廣東東紅化工 廠 甲醇，分析純，廣東臺山粵僑試劑塑料有限公司 甲醇，色譜純，天津協(xié)和 醫(yī)學 科技有限公司 冰醋酸，分析純，廣州東紅化工廠 磷酸，分析純，廣州市番禺力強化工廠 Na2HPO4 12H2O，廣州化學試劑廠 金絲桃素標準品， 瑞士 Alexis Biochemicals 公司 偽金絲桃素標準品，美國 ChromaDex公司 貫葉連翹 浸膏 ， 寧波神馬公司 貫葉連翹原藥材，成都市售 儀器及設備 臺式高速離心機 ： Eppendorf Centrifuge 5415D 高效液相色譜儀： Agilent 1100 Series（四元泵，在線真空脫氣機，自動進樣器，二極管陣列檢測器， 色譜工作站） 超聲 波清洗器 ： KQ320DE，昆山市超聲儀器有限公司 pH 計： Mettler Toledo 320 PH meter 超純水儀： LABCONCO Water Pro PS 電熱恒溫鼓風 干燥箱： DHG905SA上海實驗儀器廠有限公司 PTFE 濾膜： SRP 15 μm 實驗方法 超聲提取法工藝參數(shù)的確定 針對金絲桃素的特點，主要從溶劑的種類、溶劑濃度、冷浸時間、超聲提取時間、超聲提取液固比、超聲提取次數(shù) ，超聲功率 幾個方面來考察對提取物中金絲桃素純度的影響。以下試驗每個做三次，計算平均值。 溶劑種類的選擇 精密稱取 1g貫葉連翹粉末 7份于 50ml容量瓶中，分別加入甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、甲苯、石油醚定容，避光放置半個小時后，超聲提取 30min，超聲功率 100W。補加溶劑至原體積，采用高效液相色譜法檢測金絲桃素的含量，計算提取 物中金絲桃素純度。 溶劑濃度的選擇 精密稱取 1g貫葉連翹粉末 7份于 50ml容量瓶中，分別加入 100%、 90%、 80%、 70%、 60%、50％、 40％的乙醇定容，避光放置半個小時后，超聲提取 30min，超聲功率 100W。補加溶劑至原體積，采用高效液相色譜法檢測金絲桃素的含量，計算提取物中金絲桃素純度。 冷浸時間的影響 精密稱取 1g貫葉連翹粉末 5份于 50ml容量瓶中，加入 60％乙醇定容，分別避光放置 0h、2h、 4h、 6h、 8h 后，超聲提取 30min，超聲功率 100W。補加溶劑至原 體積，采用高效液相色譜法檢測金絲桃素的含量，計算提取物中金絲桃素純度。 超聲提取時間的影響 精密稱取 1g貫葉連翹粉末 6份于 50ml容量瓶中，加入 60％乙醇定容，分別超聲提取 0min、30min、 60min、 90min、 120min、 150min，超聲功率 100W。補加溶劑至原體積，采用高效液相色譜法檢測金絲桃素的含量，計算提取物中金絲桃素純度。 超聲提取液固比的影響 精密稱取 5g、 、 1g、 、 貫葉連翹粉末于 50ml 容量瓶中，加入純 60％乙醇定容（液固比 分別為 10: 20: 50: 100: 200:1），超聲提取 90min，超聲功率 100W。補加溶劑至原體積，采用高效液相色譜法檢測金絲桃素的含量，計算提取物中金絲桃素純度。 超聲提取次數(shù)的影響 精密稱取 1g貫葉連翹粉末五份于 50ml容量瓶中，加入純乙醇定容，分別提取 5 次，每次均超聲 90min，超聲功率 100W。合并各次提取液，補加溶劑至原體積，采用高效液相色譜法檢測金絲桃素的含量，計算提取物中金絲桃素純度。 超聲功率的影響 精密稱取 1g貫葉連翹粉末五 份于 50ml容量瓶中，加入純乙醇定容，分別在 20W、 40W、60W、 80W、 100W 的功率下超聲 90min。合并各次提取液，補加溶劑至原體積，采用高效液相色譜法檢測金絲桃素的含量，計算提取物中金絲桃素純度。 結(jié)果與討論 溶劑種類的選擇 金絲桃素含量（％）甲醇 乙醇 丙酮 乙酸已酯 氯仿 甲苯 石油醚 圖 31 溶劑種類的選擇 The determination of solvent 從 圖 31 看，甲醇、乙醇、丙酮對金絲桃素的提取效果最好，從成本和毒性考慮，工業(yè)中不宜大量使用甲醇、丙酮，因此采用乙醇為溶劑。 溶劑 濃度的選擇 100 90 80 70 60 50 40乙醇溶度（％）金絲桃素含量（％） 圖 32 乙醇濃度的選擇 The determination of solvent concentration 從 圖 32 看， 60％、 70％、 80%的乙醇提取金絲桃素的含量相對較高，三者相差不大，根據(jù)成本高低選擇采用純 60％乙醇為溶劑。 冷浸時間的影響 2 4 6 8 10冷浸時間（h）金絲桃素含量（％） 圖 33 冷浸時間的選擇 The determination of soak time 從 圖 33 看，冷浸時間對金絲桃素的提取并沒有較顯著的影響，因此不進行冷浸。 超聲提取時 間的影響 0 30 60 90 120 150超聲時間（Min ）金絲桃素含量（％） 圖 34 超聲時間的選擇 The determination of ultrasonic time 從結(jié)果看，隨著超聲時間的增加，提取液中金絲桃素的含量隨之增加，當?shù)?90 分鐘后出現(xiàn)一個穩(wěn)定期， 120 分鐘后反而有些下降，這可能是金絲桃素的對光和熱不穩(wěn)定的緣故。 超聲提取液固比的影響 10 20 50 100 200液固比（mL/ g）金絲桃素含量（％） 圖 35 液固比的選擇 The determination of liquid to solid ratio 從結(jié)果看，隨著液固比的增加，提取液中所含的金絲桃素隨之 增加，但當液固比大于 50:1 后，增加的量很少，因此從節(jié)約角度考慮，選擇 50:1 為最佳。 超聲提取次數(shù)的影響 1 2 3 4 5超聲次數(shù)金絲桃素含量（％） 圖 36 提取次數(shù)的選擇 The determination of distill times 從結(jié)果看，一次提取后金絲桃素基本被完全提取出來，因此只需提取一次即可。 超聲功率的影響 20 40 60 80 100超聲功率（W)金絲桃素含量（％） 圖 37 提取功率的選擇 determination of distill power 從結(jié)果看，功率越高，提取效果更好，但已經(jīng)是調(diào)到超聲清洗 儀的最高功率。所以要更好 的效果，需要購買功率更大的超聲提取儀。在這里選擇 100W。 金絲桃素提取正交試驗 浸膏的超聲提取 根據(jù)文獻，影響金絲桃素提取率的因素主要有：溶劑濃度，溶劑用量，提取時間，提取溫度?？紤]到我們采用超聲提取，因此省去提取溫度這一因素。因素水平和正交表分別見下表 31和表 32： 根據(jù) 表 32 正交表進行正交試驗： ① 稱取浸膏 50ml容量瓶中，分別用 40％、 60％、 80％乙醇定容，然后分別在超聲清洗儀中超聲 60、 1 90min。 ② 稱取浸膏 1g 三份于 50ml 容量瓶中。分別用 40％、 60％、 80％乙醇定容，然后分別在超聲清洗儀中超聲 90、 60、 120min。 ③ 稱取浸膏 50ml容量瓶中。分別用 40％、 60％、 80％乙醇定容，然后分別在超聲清洗儀中超聲 1 90、 60min。 ④ 上述 9 個樣品超聲后，分別吸取上層清液，過 膜， HPLC 檢測。 表 31 因素和水平 表 31 factor and level 水平 因素 液固比 (ml/g) A 乙醇濃度 (%) B 提取時間 (min) C 1 20 40 60 2 50 60 90 3 100 80 120 表 32 正交表 (L33) Tab. 32 Orthogonal tab