【正文】 壓化學電離LCMS/MS測定牛尿中7種糖皮質激素。 Van de Hauwe等報道了采用電噴霧電離LCMS/MS分析牛肝中11種糖皮質激素。,第五十四頁，共六十七頁。,（二）同化(t243。nghu224。)激素分析方法,生物樣品中同化激素類的分析(fēnxī)主要采用色譜法,包括薄層色譜法、氣相色譜法和液相色譜法。,第五十五頁，共六十七頁。,薄層(b225。o c233。nɡ)色譜法,薄層色譜法具有快速、經濟等優(yōu)點,適合殘留分析的初篩。 例如,用于雌激素的多殘留篩選。 為了提高薄層色譜分析的靈敏度和選擇性,在顯色劑研究上做了大量的工作(gōngzu242。),一些與雌酮、雌二醇、己烯雌酚、玉米赤霉醇和玉米赤霉烯醇發(fā)生顯色反應的染料被相繼報道。 重氮基染料與雌激素反應,形成重氮基衍生物、酚基和二羥基苯甲酸內酯類的雌激素衍生物,它們的色澤強度各不相同。 此外,科林斯紅和快藍BB與激素反應成鹽后,具有很強的色澤。,第五十六頁，共六十七頁。,氣相色譜法,在20世紀70年代GCMS已被用于同化激素的分析。 20世紀80年代出現的毛細管GC使GCMS結構簡化、儀器成本下降。毛細管GC和SIM檢測方式使GCMS發(fā)展成為一種成熟的、集高效分離、高靈敏度檢測和結構鑒定為一體的分析技術。 目前,GCMS已成為同化激素殘留分析中普遍(pǔbi224。n)采用的方法。,SIM檢測： 選擇(xuǎnz233。)離子監(jiān)測技術,第五十七頁，共六十七頁。,同化激素及其代謝產物的結構中含有多個羥基或酮基等極性基團,為高極性、難揮發(fā)、熱穩(wěn)定差的化合物,GC法難以直接分析,因此需衍生化使形成易揮發(fā)、熱穩(wěn)定性好的衍生物,以提高其色譜性能(x236。ngn233。ng)。 由于它們的結構中含羥基和酮基,常用的衍生方法包括硅烷化、酰化和肟化。,第五十八頁，共六十七頁。,例子(l236。 zi)：,1992年,Daeseleire等報道了GCMS法測定牛肉和牛尿中多種同化激素(去甲睪酮、睪酮、雌二醇、炔雌醇、孕酮、群勃龍、玉米赤霉醇、己烯雌酚、去氫睪酮、美雄酮、甲睪酮、醋酸(c249。 suān)甲地孕酮、醋酸(c249。 suān)氯地孕酮、醋酸(c249。 suān)甲羥孕酮、氯睪酮、醋酸(c249。 suān)氯睪酮)的殘留。 樣品用葡萄糖苷酸/芳基硫酸酯混合酶水解,經液液萃取和固相萃取柱凈化,再通過HPLC純化,分別收集含分析物的五段餾分,衍生后GCMS檢測。,第五十九頁，共六十七頁。,1997年,Hartmann等報道了GCMS法測定牛肉組織中類固醇激素,包括雄烯二酮、雄酮、睪酮 、孕酮、雌酮、雌二醇、脫氫(tuō qīnɡ)表雄酮、二氫睪酮、表睪酮、羥孕酮、孕烯醇酮、雌三醇、甲基睪酮和甲羥孕酮。 2003年,Dickson等采用GCMS法篩選和確證牛尿中己烯雌酚、雙烯雌酚、己烷雌酚和玉米赤霉醇的殘留。 2005年,Seo等報道了GCMS法同時測定肌肉中多種促生長激素(雌二醇及其代謝物、睪酮、孕酮、玉米赤霉醇、已烯雌酚)。,第六十頁，共六十七頁。,液相色譜法,HPLC比GC更常用(ch225。nɡ y242。nɡ)于激素的分析。 雌性激素的分析： 分析極性較大的雌激素結合物常采用陰離子交換色譜法或反相離子對色譜法,尤其是后者分離效果更好。 環(huán)糊精色譜也被用于雌激素的分析,該法能有效地分離結構異構的雌激素結合物。 雌二醇和雌三醇在200nm處有一中等強度的較尖的紫外吸收峰,在280nm處有一較寬的弱吸收峰。,第六十一頁，共六十七頁。,此外,雌二醇和雌三醇還具有天然熒光。濃度較高的生物樣品,采用紫外檢測能獲得足夠的靈敏度,也可利用天然熒光的特性而采用熒光檢測,后者尤其適合測定較低的殘留量, 但因雌酮無法利用熒光檢測,實際工作中常(zhōngch225。ng)將紫外檢測器與熒光檢測器結合使用以提高檢測能力。 可食動物組織中雌激素的濃度較低,采用電化學檢測可獲得較高的靈敏度。 將激素進行化學衍生化后可采用熒光檢測或化學發(fā)光檢測。,第六十二頁，共六十七頁。,孕酮和睪酮在240nm處有較強紫外吸收,紫外檢測RPHPLC法是分析生物樣品的主要方法。 一般紫外檢測可獲得足夠的靈敏度,但熒光檢測更適合于組織樣品的測定。 動物組織中的玉米赤霉醇和己烯雌酚的殘留量通常(tōngch225。ng)為181。g/kg級,為獲得足夠的檢測靈敏度,可采用電化學檢測或質譜檢測。,第六十三頁，共六十七頁。,雄性激素的HPLC分析(fēnxī)：,RPHPLC和NPHPLC均被用于雄激素的分析。 體液中睪酮含量較高時,可采用紫外檢測。否則,可將睪酮與衍生化試劑反應制備成熒光衍生物后再用紫外檢測,或采用高靈敏度的熒光檢測器進行檢測。 甲睪酮的分析常用RPHPLC法,一般情況下,采用紫外檢測能獲得足夠的靈敏度,但肌肉組織中甲睪酮代謝物殘留量通常為181。g/kg級,且甲睪酮代謝物的分子結構中無生色團,無法利用紫外檢測,有報道采用柱后固定化酶衍生化結合熒光檢測的方法(fāngfǎ),其定量限為1181。g/kg。此,HPLCMS法在睪酮分析中也有應用。,第六十四頁，共六十七頁。,Lagana等報道LC法檢測雞肉、牛肉和牛肝中9種同化激素(群勃龍、睪酮、孕酮、雌二醇、己烯雌酚、左環(huán)十四酮酚、玉米(y249。mǐ)赤霉烯醇、玉米(y249。mǐ)赤霉烯酮、玉米(y249。mǐ)赤霉醇)殘留。 Andresen等報道了LC法測定脂肪中醋酸美侖孕酮、醋酸甲地孕酮和醋酸氯地孕酮的殘留量。 萬美梅等采用LC電化學檢測法測定動物組織中己烯雌酚殘留量。 Davoli等報道了在線萃取液相色譜/快速原子轟擊質譜法測定鼠和牛尿中己烯雌酚的殘留。,第六十五頁，共六十七頁。,Fang等報道了LCMS/MS法測定雞和兔肝中玉米赤霉醇殘留量。 秦燕等建立了不同動物肌肉中類固醇同化激素(jī s249。)(表睪酮、丙酸睪酮、19去甲基睪酮、甲基睪酮、孕酮、甲羥孕酮、雌二醇、雌三醇、炔雌醇、雌酮)多殘留的LCMS/MS分析方法。,第六十六頁，共六十七頁。,內容(n232。ir243。ng)總結,第六章 獸藥殘留檢測技術。近年來人工合成的一些衍生物,其雄激素作用大為減弱,而同化作用則保留或增強,這些衍生物稱同化激素。作用與黃體酮相似,孕激素活性強,無雌激素和雄激素活性,有抗雌激素作用。激素污染對人類以外的其他動物影響更為顯著,如魚、鳥和哺乳動物的大量死亡(sǐw225。ng),雌雄異變,生育和發(fā)育紊亂,免疫力下降等現象,可能均與此有關。環(huán)糊精色譜也被用于雌激素的分析,該法能有效地分離結構異構的雌激素結合物,第六十七頁，共六十七頁。