【正文】 壓化學(xué)電離LCMS/MS測(cè)定牛尿中7種糖皮質(zhì)激素。 Van de Hauwe等報(bào)道了采用電噴霧電離LCMS/MS分析牛肝中11種糖皮質(zhì)激素。,第五十四頁(yè)，共六十七頁(yè)。,（二）同化(t243。nghu224。)激素分析方法,生物樣品中同化激素類的分析(fēnxī)主要采用色譜法,包括薄層色譜法、氣相色譜法和液相色譜法。,第五十五頁(yè)，共六十七頁(yè)。,薄層(b225。o c233。nɡ)色譜法,薄層色譜法具有快速、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn),適合殘留分析的初篩。 例如,用于雌激素的多殘留篩選。 為了提高薄層色譜分析的靈敏度和選擇性,在顯色劑研究上做了大量的工作(gōngzu242。),一些與雌酮、雌二醇、己烯雌酚、玉米赤霉醇和玉米赤霉烯醇發(fā)生顯色反應(yīng)的染料被相繼報(bào)道。 重氮基染料與雌激素反應(yīng),形成重氮基衍生物、酚基和二羥基苯甲酸內(nèi)酯類的雌激素衍生物,它們的色澤強(qiáng)度各不相同。 此外,科林斯紅和快藍(lán)BB與激素反應(yīng)成鹽后,具有很強(qiáng)的色澤。,第五十六頁(yè)，共六十七頁(yè)。,氣相色譜法,在20世紀(jì)70年代GCMS已被用于同化激素的分析。 20世紀(jì)80年代出現(xiàn)的毛細(xì)管GC使GCMS結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)化、儀器成本下降。毛細(xì)管GC和SIM檢測(cè)方式使GCMS發(fā)展成為一種成熟的、集高效分離、高靈敏度檢測(cè)和結(jié)構(gòu)鑒定為一體的分析技術(shù)。 目前,GCMS已成為同化激素殘留分析中普遍(pǔbi224。n)采用的方法。,SIM檢測(cè)： 選擇(xuǎnz233。)離子監(jiān)測(cè)技術(shù),第五十七頁(yè)，共六十七頁(yè)。,同化激素及其代謝產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)中含有多個(gè)羥基或酮基等極性基團(tuán),為高極性、難揮發(fā)、熱穩(wěn)定差的化合物,GC法難以直接分析,因此需衍生化使形成易揮發(fā)、熱穩(wěn)定性好的衍生物,以提高其色譜性能(x236。ngn233。ng)。 由于它們的結(jié)構(gòu)中含羥基和酮基,常用的衍生方法包括硅烷化、酰化和肟化。,第五十八頁(yè)，共六十七頁(yè)。,例子(l236。 zi)：,1992年,Daeseleire等報(bào)道了GCMS法測(cè)定牛肉和牛尿中多種同化激素(去甲睪酮、睪酮、雌二醇、炔雌醇、孕酮、群勃龍、玉米赤霉醇、己烯雌酚、去氫睪酮、美雄酮、甲睪酮、醋酸(c249。 suān)甲地孕酮、醋酸(c249。 suān)氯地孕酮、醋酸(c249。 suān)甲羥孕酮、氯睪酮、醋酸(c249。 suān)氯睪酮)的殘留。 樣品用葡萄糖苷酸/芳基硫酸酯混合酶水解,經(jīng)液液萃取和固相萃取柱凈化,再通過HPLC純化,分別收集含分析物的五段餾分,衍生后GCMS檢測(cè)。,第五十九頁(yè)，共六十七頁(yè)。,1997年,Hartmann等報(bào)道了GCMS法測(cè)定牛肉組織中類固醇激素,包括雄烯二酮、雄酮、睪酮 、孕酮、雌酮、雌二醇、脫氫(tuō qīnɡ)表雄酮、二氫睪酮、表睪酮、羥孕酮、孕烯醇酮、雌三醇、甲基睪酮和甲羥孕酮。 2003年,Dickson等采用GCMS法篩選和確證牛尿中己烯雌酚、雙烯雌酚、己烷雌酚和玉米赤霉醇的殘留。 2005年,Seo等報(bào)道了GCMS法同時(shí)測(cè)定肌肉中多種促生長(zhǎng)激素(雌二醇及其代謝物、睪酮、孕酮、玉米赤霉醇、已烯雌酚)。,第六十頁(yè)，共六十七頁(yè)。,液相色譜法,HPLC比GC更常用(ch225。nɡ y242。nɡ)于激素的分析。 雌性激素的分析： 分析極性較大的雌激素結(jié)合物常采用陰離子交換色譜法或反相離子對(duì)色譜法,尤其是后者分離效果更好。 環(huán)糊精色譜也被用于雌激素的分析,該法能有效地分離結(jié)構(gòu)異構(gòu)的雌激素結(jié)合物。 雌二醇和雌三醇在200nm處有一中等強(qiáng)度的較尖的紫外吸收峰,在280nm處有一較寬的弱吸收峰。,第六十一頁(yè)，共六十七頁(yè)。,此外,雌二醇和雌三醇還具有天然熒光。濃度較高的生物樣品,采用紫外檢測(cè)能獲得足夠的靈敏度,也可利用天然熒光的特性而采用熒光檢測(cè),后者尤其適合測(cè)定較低的殘留量, 但因雌酮無法利用熒光檢測(cè),實(shí)際工作中常(zhōngch225。ng)將紫外檢測(cè)器與熒光檢測(cè)器結(jié)合使用以提高檢測(cè)能力。 可食動(dòng)物組織中雌激素的濃度較低,采用電化學(xué)檢測(cè)可獲得較高的靈敏度。 將激素進(jìn)行化學(xué)衍生化后可采用熒光檢測(cè)或化學(xué)發(fā)光檢測(cè)。,第六十二頁(yè)，共六十七頁(yè)。,孕酮和睪酮在240nm處有較強(qiáng)紫外吸收,紫外檢測(cè)RPHPLC法是分析生物樣品的主要方法。 一般紫外檢測(cè)可獲得足夠的靈敏度,但熒光檢測(cè)更適合于組織樣品的測(cè)定。 動(dòng)物組織中的玉米赤霉醇和己烯雌酚的殘留量通常(tōngch225。ng)為181。g/kg級(jí),為獲得足夠的檢測(cè)靈敏度,可采用電化學(xué)檢測(cè)或質(zhì)譜檢測(cè)。,第六十三頁(yè)，共六十七頁(yè)。,雄性激素的HPLC分析(fēnxī)：,RPHPLC和NPHPLC均被用于雄激素的分析。 體液中睪酮含量較高時(shí),可采用紫外檢測(cè)。否則,可將睪酮與衍生化試劑反應(yīng)制備成熒光衍生物后再用紫外檢測(cè),或采用高靈敏度的熒光檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)。 甲睪酮的分析常用RPHPLC法,一般情況下,采用紫外檢測(cè)能獲得足夠的靈敏度,但肌肉組織中甲睪酮代謝物殘留量通常為181。g/kg級(jí),且甲睪酮代謝物的分子結(jié)構(gòu)中無生色團(tuán),無法利用紫外檢測(cè),有報(bào)道采用柱后固定化酶衍生化結(jié)合熒光檢測(cè)的方法(fāngfǎ),其定量限為1181。g/kg。此,HPLCMS法在睪酮分析中也有應(yīng)用。,第六十四頁(yè)，共六十七頁(yè)。,Lagana等報(bào)道LC法檢測(cè)雞肉、牛肉和牛肝中9種同化激素(群勃龍、睪酮、孕酮、雌二醇、己烯雌酚、左環(huán)十四酮酚、玉米(y249。mǐ)赤霉烯醇、玉米(y249。mǐ)赤霉烯酮、玉米(y249。mǐ)赤霉醇)殘留。 Andresen等報(bào)道了LC法測(cè)定脂肪中醋酸美侖孕酮、醋酸甲地孕酮和醋酸氯地孕酮的殘留量。 萬美梅等采用LC電化學(xué)檢測(cè)法測(cè)定動(dòng)物組織中己烯雌酚殘留量。 Davoli等報(bào)道了在線萃取液相色譜/快速原子轟擊質(zhì)譜法測(cè)定鼠和牛尿中己烯雌酚的殘留。,第六十五頁(yè)，共六十七頁(yè)。,Fang等報(bào)道了LCMS/MS法測(cè)定雞和兔肝中玉米赤霉醇?xì)埩袅俊?秦燕等建立了不同動(dòng)物肌肉中類固醇同化激素(jī s249。)(表睪酮、丙酸睪酮、19去甲基睪酮、甲基睪酮、孕酮、甲羥孕酮、雌二醇、雌三醇、炔雌醇、雌酮)多殘留的LCMS/MS分析方法。,第六十六頁(yè)，共六十七頁(yè)。,內(nèi)容(n232。ir243。ng)總結(jié),第六章 獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)。近年來人工合成的一些衍生物,其雄激素作用大為減弱,而同化作用則保留或增強(qiáng),這些衍生物稱同化激素。作用與黃體酮相似,孕激素活性強(qiáng),無雌激素和雄激素活性,有抗雌激素作用。激素污染對(duì)人類以外的其他動(dòng)物影響更為顯著,如魚、鳥和哺乳動(dòng)物的大量死亡(sǐw225。ng),雌雄異變,生育和發(fā)育紊亂,免疫力下降等現(xiàn)象,可能均與此有關(guān)。環(huán)糊精色譜也被用于雌激素的分析,該法能有效地分離結(jié)構(gòu)異構(gòu)的雌激素結(jié)合物,第六十七頁(yè)，共六十七頁(yè)。