【正文】 孢體毒素，由兩種蛋白質(zhì)P51和P42組成，其相應(yīng)的編碼基因，即p51和p42，已經(jīng)證實(shí)定位于染色體上。 單獨(dú)的P51和P42對(duì)蚊幼蟲無毒，二者相互(xiāngh249。)協(xié)同，才能發(fā)揮最大的毒殺作用。 Mtx毒素現(xiàn)在已發(fā)現(xiàn)有三種，即Mtx、Mtx2和Mtx3，Mtx毒素是從Bs SSII1中分離出來的，由870個(gè)氨基酸組成，分子量為100kDa。Mtx2和Mtx3是從Bs SSII1中分離得到的30.8和35.8kDa蛋白，Mtx毒素能被蚊幼蟲腸道蛋白酶作用而酶解為27kDa和70kDa兩個(gè)片段，相當(dāng)于N端和C端區(qū)。27kDa片段包含的一個(gè)短區(qū)域?qū)?yīng)于轉(zhuǎn)膜功能域；70kDa片段包括3個(gè)約90個(gè)氨基酸的重復(fù)區(qū)，但功能不詳。,第七十八頁，共九十頁。,3. 球形芽孢桿菌的致病機(jī)理 （1）致病機(jī)理： 是通過毒素或與孢子囊有關(guān)(yǒuguān)的毒素或芽孢實(shí)現(xiàn)的。 球形芽孢桿菌對(duì)敏感幼蟲的作用包括以下幾個(gè)階段： ① 孢晶混合物被蚊幼蟲吞食； ② 伴孢晶體在蚊中腸蛋白酶和高pH的雙重作用下溶解，釋放出P51（51.4kDa）和P42（41.9kDa）的蛋白； ③ P51和P42原毒素蛋白被進(jìn)一步降解為43kDa和39kDa的活性多肽； ④ 毒性肽與胃盲囊和中腸后段上皮細(xì)胞結(jié)合； ⑤ 毒素進(jìn)入上皮細(xì)胞通過目前尚不清楚的方式實(shí)現(xiàn)毒殺作用。 （2）組織和細(xì)胞病理：致倦庫蚊感染了C34l菌株，組織病理變化主要發(fā)生在胃盲囊、中腸前段和后段。中腸前段上皮細(xì)胞脫落、膨脹，進(jìn)而破裂瓦解，而中腸后段上皮細(xì)胞病變則是脫落、膨脹，而后出現(xiàn)空泡，最后由于細(xì)胞脫落和破壞，中腸僅剩下完整的基底膜。胃盲囊的病變發(fā)生較遲，中腸中段細(xì)胞無明顯的病變。,第七十九頁，共九十頁。,五、金龜子乳狀病芽孢(y225。 bāo)桿菌,日本金龜子芽孢桿菌（Bacillus popilliae）和緩死芽孢桿菌（Bacillus lentimorbus）是引起日本金龜子（Popillia japonica）等幼蟲乳狀病（Milky disease）的兩種專一性殺蟲芽孢桿菌，屬芽孢桿菌屬（Bacillus）。由于感染后菌體在幼蟲血淋巴中進(jìn)行繁殖并形成芽孢，而使病蟲蟲體呈不透明的乳白色，刺破蟲體，流出的血淋巴為乳白色，故稱之“乳狀病”。 乳狀菌在世界上分布很廣，北美、澳洲、亞洲以及歐洲均有發(fā)現(xiàn)。 我國自1974年以來進(jìn)行金龜子芽孢桿菌的研究，先后在河北、河南、山東、山西、陜西、黑龍江、福建等省陸續(xù)(l249。x249。)發(fā)現(xiàn)和分離到我國自己的菌株和若干新變種，如從華北大黑金龜子幼蟲分出的山東變種（B. p. var. shandong）、從鰓金龜分出的蓬萊變種（B. p. var. penglai）、從麗金龜分出蒙古變種（B. l. var. mongolica）、從棕金龜分出鰓金龜變種（B. p. var. holotrichiae）等。 同時(shí)進(jìn)行了寄主范圍、菌劑制作、應(yīng)用技術(shù)和離體培養(yǎng)等方面的研究。,第八十頁，共九十頁。,（一）形態(tài)(x237。ngt224。i)特征和生物學(xué)特性,1. 形態(tài)特征(t232。zhēng) 日本金龜子芽孢桿菌營養(yǎng)體桿狀，兩端近圓形，單生或成對(duì)，不運(yùn)動(dòng)，活營養(yǎng)體大小為0.5～0.8 μm1.3～5.2 μm。革蘭氏陽性。形成芽孢時(shí)營養(yǎng)體逐漸呈紡錘形，芽孢卵圓形，大小為0.9～1.3 μm1.8～2.4 μm。在形成芽孢的同時(shí)還形成一個(gè)具折光性的伴孢體，或稱副孢（Paraspore）。伴孢體呈半球形、近立方形、三角形、菱形或不定形，大小為0.5 μm0.5 μm。 緩死芽孢桿菌的營養(yǎng)體大小為1.0 μm5.0 μm，芽孢囊近似梭形，大小為1.4 μm3.9 μm，芽孢則為0.9 μm0.8 μm，沒有伴孢體。 2. 生物學(xué)特征 對(duì)營養(yǎng)要求苛刻，兩菌很難在營養(yǎng)肉湯中生長形成有侵染力的芽孢。但在一些成分復(fù)雜的培養(yǎng)基，如Myp GP培養(yǎng)基上則可以生長。糖類是生長的能源物質(zhì)，還需要11種氨基酸、硫胺素、巴比妥酸等，但不需要嘌呤和嘧啶。 該菌?；院軓?qiáng)，能在被感染的蠐螬體內(nèi)進(jìn)行營養(yǎng)生長，并形成芽孢。芽孢可在體外存活多年，在干燥蠐螬體液涂片上保存芽孢，經(jīng)過42個(gè)月后，加水濕潤，洗下芽孢制成懸液，注射到健康蠐螬體內(nèi)仍有高度致病力，但營養(yǎng)體在任何基質(zhì)中都很快死亡。,第八十一頁，共九十頁。,第八十二頁，共九十頁。,第八十三頁，共九十頁。,（二）金龜子乳狀病芽孢桿菌的分類 分類一直存在不同的意見，是兩個(gè)獨(dú)立的種還是亞種，曾引起廣泛爭論。 最初，日本金龜子芽孢桿菌和緩死芽孢桿菌由Dutky（1940）命名，區(qū)別為兩個(gè)種的主要依據(jù)是罹病幼蟲的體色和孢子囊有無伴孢體。 《伯杰氏鑒定細(xì)菌學(xué)手冊(cè)》第八版中確立了以伴孢體有無為重要依據(jù)的乳狀菌分類方法(fāngfǎ)，把金龜子芽孢桿菌和緩死芽孢桿菌列為兩個(gè)獨(dú)立的種。芽孢和伴孢體的大小、形狀及著生位置在不同變種中是不同的，所有變種可歸為4個(gè)亞群或組： （1）A1：芽孢大，伴孢體通常是小的，并與芽孢不分離，這一亞群包括日本金龜子芽孢桿菌等4個(gè)變種； （2）A2：芽孢大，伴孢體也大，并與芽孢分離，代表者為“RM12”乳狀菌； （3）B1：無伴孢體，芽孢大、中生，屬于這一亞群的有緩死芽孢桿菌，“RM9”乳狀菌等； （4）B2：無伴孢體，孢子囊大，芽孢小，通常不是中生，包括了新西蘭乳狀菌II等變種。 我國分離的十多株乳狀菌中，從華北大黑金龜子（Holotriehia oblita）幼蟲分出的魯乳1號(hào)定為山東變種（B. popilliae var. shandong），另一個(gè)從蒙古麗金龜（Anomala mongolica）分離的菌株定為緩死芽孢桿菌蒙古變種（B. lentimorbus var. mongolica）。,第八十四頁，共九十頁。,（三）金龜子乳狀病芽孢(y225。 bāo)桿菌的侵染,1. 致病過程 自然條件下日本金龜子芽孢桿菌可通過蠐螬的消化道而侵染。當(dāng)蠐螬吞食帶有細(xì)菌芽孢的植物根、莖、種子或土壤中的腐生物質(zhì)后，芽孢在中腸內(nèi)萌發(fā)生成桿狀的營養(yǎng)細(xì)胞，營養(yǎng)細(xì)胞通過吞噬作用進(jìn)入中腸細(xì)胞。萌發(fā)的營養(yǎng)細(xì)胞有一個(gè)箭頭狀結(jié)構(gòu)，這種結(jié)構(gòu)可能在細(xì)菌的營養(yǎng)細(xì)胞入侵到體腔時(shí)起作用。細(xì)菌最初在中腸再生細(xì)胞區(qū)域增殖，并穿過腸壁侵人體腔。細(xì)菌在血腔中大量繁殖，并形成芽孢。 由于病蟲或死蟲體內(nèi)有大量芽孢使血淋巴(l237。n bā)混濁，使被感染的蠐螬呈現(xiàn)乳白色。 病蟲行動(dòng)遲緩，對(duì)外界刺激反應(yīng)遲鈍，如將胸足扯斷，傷口滲出乳白色液，取此體液涂片鏡檢可見大量桿菌芽孢，而健體的體液清亮或僅稍帶混濁。 2. 致病機(jī)制 金龜子乳狀病的致病機(jī)制目前尚不清楚，主要有兩種觀點(diǎn)：第一種觀點(diǎn)認(rèn)為是由于細(xì)菌在生長過程中利用了昆蟲的大量營養(yǎng)物質(zhì)和多種生長素，致使昆蟲不能正常發(fā)育；第二種觀點(diǎn)認(rèn)為是破壞了昆蟲的某種酶系統(tǒng)，從而抑制了寄主昆蟲的生活機(jī)能。,第八十五頁，共九十頁。,第八十六頁，共九十頁。,第八十七頁，共九十頁。,第八十八頁，共九十頁。,第八十九頁，共九十頁。,內(nèi)容(n232。ir243。ng)總結(jié),第五章 昆蟲病原細(xì)菌。Bucher（1960）曾把昆蟲病原細(xì)菌分為4個(gè)類型，但實(shí)際上這些類型可以大致劃分為3類：。該菌的殺蟲活性與其(yǔq237。)伴胞體無關(guān)，而與其(yǔq237。)細(xì)胞壁和原生質(zhì)膜有關(guān)。實(shí)際上菌素B是菌素A的γ—內(nèi)脂。世界上第一批蘇云金桿菌(Bt)制劑的工業(yè)產(chǎn)品于1958年誕生于美國。許多殺蟲蛋白基因不能通過接合作用進(jìn)入一個(gè)新的受體細(xì)胞，因?yàn)椴⒉皇敲恳环N質(zhì)粒都可以通過接合進(jìn)行轉(zhuǎn)移。2. 致病機(jī)制,第九十頁，共九