20xx年醫(yī)學(xué)專題—乳鐵蛋白-資料下載頁
2024-11-04 17:27本頁面
【正文】 242。ng)色譜法、超濾法、鹽析法、酸沉淀法等方法從初乳中提取乳鐵蛋白。,牛初乳經(jīng)冷凍離心機(jī)脫脂 ,35℃下加入適當(dāng)稀釋的皺胃酶液 ,分離去除酪蛋白. 微濾后即為用于超濾研究的物料. 用 MWCO為100000的超濾膜進(jìn)行首次超濾 ,透過液再用MWCO為50000的超濾膜進(jìn)行第二次超濾 ,然后用 MWCO為10000的超濾膜進(jìn)行濃縮(n243。nɡ suō) ,冷凍干燥 ,即得到Lf 的粗品.,超濾法：,第二十一頁，共二十八頁。,Lf的分離純化(chn hu224。)及檢測方法,目 前 鑒 定 乳 鐵 蛋 白 的 方 法主 要 有 ： 免 疫 雙 擴(kuò) 散 法 、酶 聯(lián) 免 疫 檢 測 法 (E L ISA ),反相高效(ɡāo xi224。o)液相色譜法等,第二十二頁，共二十八頁。,反相高效(ɡāo xi224。o)液相色譜法測定牛初乳中乳鐵蛋白含量,色譜條件 色譜柱：Kromasil C4色譜柱（250mm*4.6mm,5μm）。流動(dòng)(lid242。ng)相：乙腈水三氟乙酸（80:20:0.1)流速0.6mL/min。檢測波長:220nm,柱溫：25℃；進(jìn)樣量10.0μL,樣品溶液的制備 量取新鮮牛初乳離心除脂肪，得到的脫脂乳調(diào)pH值至4.6，離心除酪蛋白，收集(shōuj237。)乳清，然后調(diào)pH值至6.8，加硫酸銨使飽和度達(dá)到40%，離心取乳清液，用截留分子量為300Ku、100Ku、30Ku的超濾膜包進(jìn)行超濾，收集30Ku膜包超濾后的回留液進(jìn)行離子交換層析，收集洗脫峰，即為樣品溶液。,第二十三頁，共二十八頁。,精密稱取乳鐵蛋白標(biāo)準(zhǔn)品1mg,配制濃度分別(fēnbi233。)為0.0.20.120.00.025mg/mL的對(duì)照品溶液。,乳鐵蛋白進(jìn)樣量濃度(n243。ngd249。)在251000g/mL時(shí)，線性關(guān)系良好。,第二十四頁，共二十八頁。,取樣品進(jìn)行RPHPLC檢測。如圖3所示為離子交換層析(c233。nɡ xī)后收集各洗脫峰，其中峰2為未吸附蛋白流穿液，峰3為低鹽濃度洗脫液，峰4為高鹽濃度洗脫液，即提取的乳鐵蛋白洗脫液。 圖4為峰4洗脫液經(jīng)RPHPLC檢測結(jié)果。結(jié)果顯示牛初乳經(jīng)除脂肪、除酪蛋白、超濾和離子交換層析后，提取的乳鐵蛋白的平均純度為92.23%，RSD為1.3%。,第二十五頁，共二十八
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