【正文】 ）使用前要求用酸液（稀HNO3）浸泡24h洗滌；②測(cè)有機(jī)物玻璃、塑料（不能用橡膠和添加染料的橡膠）冷凍保存不能用玻璃儀器；樣品的運(yùn)輸與保存；采樣記錄①編號(hào)②檢驗(yàn)項(xiàng)目③受試者信息④采樣信息：時(shí)間、地點(diǎn)、環(huán)境、過(guò)程。⑤采樣人及記錄人信息（二）樣品采集與保存尿樣1）尿樣的校正：(1)比重校正法 ? ?校正公式C校正=（）/（)*c=kc ?～(2)（mg/g肌酐）=實(shí)測(cè)濃度（mg/L）/肌酐濃度（g/L），肌酐含量 2)采樣.?采集尿液不少于50ml,?，?記錄2人上次排光膀胱的時(shí)間及采集樣的終點(diǎn)時(shí)間。3).?反腐 ?測(cè)尿中汞或揮發(fā)性有機(jī)物要盡快測(cè)定?要保存5天以上的，最好冷凍血樣1）采集（1）、全血；要抗凝（2）、血清（血漿）或紅細(xì)胞2)注意事項(xiàng) ??（取下）再擠出針管時(shí)不能太快?取末梢血要避免擠壓采集部位，自然流出棄去第一滴血④有三種情況不宜采集l 3)血樣的運(yùn)輸與保存 ?避免振動(dòng)和溫度的改變 ?血樣冷凍肯定溶血采集血清或血漿時(shí)，應(yīng)分離再保存 ?臨時(shí)存放4℃過(guò)夜，長(zhǎng)時(shí)間保存要冷凍④測(cè)酶活性要采集后盡快分析）采集方法：?先深呼吸2~3次，再恢復(fù)正常呼吸時(shí)采集呼出氣?采集肺泡氣只收集末端呼出氣2）注意事項(xiàng)：?受檢者必須時(shí)肺功能正常者 ?要選擇對(duì)被測(cè)物吸附小的容器 ?要在正常呼吸狀態(tài)下收集樣品呼出過(guò)程不能有阻力 ④采樣的時(shí)機(jī)要依被測(cè)物代謝速度決定三、生物材料樣品的預(yù)處理原則（一）無(wú)機(jī)物分析的樣品處理）.常用的稀釋劑。1)稀硝酸液（尿），2）TntonX—100表面活性劑3）基體改進(jìn)劑溶液 2）.常用機(jī)體改進(jìn)劑：硝酸鹽（NH4+ Ni2+ Ca2+）磷酸鹽（Na+ NH4+）3）.應(yīng)用實(shí)例 :?磷酸銨，硝酸銨和TritonX100可改善血清中銅鋅的測(cè)定 ?磷酸氫胺，硝酸銨測(cè)定血鉛可提高灰化溫度至1000℃?硝酸鎳可使測(cè)定砷和Se的灰化溫度到1000℃④磷酸銨可使測(cè)定Cd的灰化溫度增至800℃酸提取法。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)被測(cè)成分的含量是已知的2，鹽酸提取3，三氯乙酸（固體）。鐵（有效）提取+2價(jià)鐵礦物化法（無(wú)機(jī)法處理）（二）有機(jī)物分析的樣品處理（p11）第五節(jié)鉛一、接觸途徑：鉛礦，開(kāi)采，冶煉二、代謝物和生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)（一）、吸收1）呼吸道：鉛塵煙蒸汽2)消化道：鉛塵3）皮膚，無(wú)機(jī)物不吸收有機(jī)鉛化合物可被吸收（四乙基鉛）分析：起始分布在血中有95%與紅細(xì)胞結(jié)合最終主要以磷酸鹽沉積于管中，其次是肝腎腦等生物效應(yīng)：抑制血紅蛋白的合成1）抑制5—氨基乙酰丙酸脫水酶，導(dǎo)致血尿中δALA增加 2）抑制糞川啉元氧化酶3）抑制亞鐵螯合酶排除：吸收的鉛主要經(jīng)尿排出，尿鉛生物半減期較長(zhǎng)。（二）鉛接觸的生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)血鉛：直接反映近期接觸鉛的情況尿鉛：反應(yīng)機(jī)體中鉛的負(fù)荷量，是鉛中毒的輔助診斷指標(biāo)生物效應(yīng)指標(biāo)：1）尿中σ—ALA2）血中鉛原卟啉三、樣品的采集與保存——用于尿鉛血鉛的測(cè)定.①采樣時(shí)間的限定②隨即采集一次尿樣③按1%比例加HNO3，4℃可保存兩周。）末梢血40 μL2）靜脈血四、尿鉛和血鉛的測(cè)定——石墨爐原子吸收法（一）尿鉛的測(cè)定原理：尿樣用基體改進(jìn)劑液稀釋后直接進(jìn)行測(cè)定，基體改進(jìn)劑液NH4H2PO4+抗壞血酸石墨爐升溫程序——適用涂銅石墨管①干燥~70℃,40S ②灰化 450℃,30S ③原子化2000℃ 5S（停氣）④清除 2200℃ 3S石墨管涂鉬處理，向石墨管中加20μL鉬酸銨液，石墨爐升溫程序①~③并重復(fù)10次升溫，石墨管內(nèi)壁呈灰白色標(biāo)準(zhǔn)系列液配置①鉛標(biāo)準(zhǔn)系列液②基體改進(jìn)劑液（混合液）③正常人混合尿 ：沒(méi)有接觸鉛的健康人的尿，取2份，，說(shuō)明 ： 1）基體改進(jìn)劑液的作用 ：本法選用4%磷酸二氫銨6%抗壞血酸作為基體改進(jìn)劑，能有效地克服基體干擾2）背景吸收的扣除①背景校正器扣除背景吸收，氘燈背景校正②石墨管涂鉬可降低背景吸收（二）血鉛的測(cè)定樣品處理：全血用TritonX100液稀釋，稀HNO3酸化，進(jìn)樣測(cè)定石墨爐升溫程序:①干燥：75℃100℃,10S（斜坡升溫）②灰化450℃500℃30S 保持10S（斜坡）③原子化2400℃7S④清除2500℃3S標(biāo)準(zhǔn)系列液： ①鉛標(biāo)準(zhǔn)液②TritonX100液③正常人血五、生化指標(biāo)的測(cè)定（一）尿中σ—ALA的測(cè)定原理：①σ—ALA可與乙酰乙酸乙酯縮合生成吡咯化合物②用乙酸乙酯萃取吡咯化合物③顯色，加對(duì)一二甲氨基苯甲酸生成紅色化合物λmax=554nm操作要點(diǎn)： ①兩份經(jīng)稀釋尿樣——加PH=6緩沖液②樣品管加乙酰乙酸乙酯③尿樣空白管補(bǔ)充緩沖液④各沸水浴10min⑤各加4mL乙酸乙酯萃?、揠x心、靜置、分層⑦取清夜顯色10min后測(cè)定（二）全血中游離原卟啉的測(cè)定原理：①用乙酸乙酸乙酯破壞紅細(xì)胞②鹽酸萃取原卟啉，測(cè)定熒光強(qiáng)度樣品處理： 1）樣品：20μL血+2）加硅藻土懸浮液，乙酸乙酯—乙酸液、振搖、破壞紅細(xì)胞3）離心，取上清液加鹽酸萃取第三節(jié)、鎘一、接觸途徑：①鋅礦的開(kāi)采及冶煉②工業(yè)上含鎘材料的生產(chǎn)③農(nóng)業(yè)上也有鎘化合物的應(yīng)用二、代謝和生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)（一）代謝 、急性中毒靶器官：肺慢性中毒靶器官：肺、腎、骨，屬于蓄積性元素（二）生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)尿鎘：只反映長(zhǎng)期接觸情況2血鎘：只反映近期接觸情況三、鎘接觸指標(biāo)的測(cè)定——石墨爐原子吸收法（一）尿鎘的測(cè)定原理：用磷酸氫二銨液稀釋，直接標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量石墨爐升溫順序1）干燥0~100℃30S（斜坡）2）灰化100~200℃20S（斜坡）400℃ 10S（階梯）3）原子化1800℃5S4）清除2000℃3S標(biāo)準(zhǔn)系列液：①鎘標(biāo)準(zhǔn)液②空白尿液③基體改進(jìn)劑液④1%NH3（二）血鎘測(cè)定原理：血樣加稀HNO3離心，取上清液測(cè)定，標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量標(biāo)準(zhǔn)系列液①鎘血標(biāo)準(zhǔn)液 ：抗凝小牛全血+鎘標(biāo)準(zhǔn)液②4%HNO3第七節(jié)：汞一、接觸機(jī)會(huì)①礦的開(kāi)采與冶煉 ②電器和儀表制造 ③化學(xué)工業(yè)二、代謝和生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)（一）動(dòng)力學(xué)過(guò)程 無(wú)機(jī)汞主要是腎、其次肝、腦 有機(jī)汞主要是腦 其次肝、胃 尿汞 生物半減期2~3個(gè)月（二）生物監(jiān)測(cè)指標(biāo) ：反映近期接觸無(wú)機(jī)汞的量 ：用于診斷汞中毒觀察驅(qū)汞療效三、樣品采集、保存 ：①隨機(jī)取一次尿樣 ②加堿NaOH使?jié)舛冗_(dá)到40g/L，4℃可保存2周 樣 ①周末血 ②抗凝 4℃可以保存數(shù)天四、尿汞的測(cè)定——冷原子吸收法（一）堿性氯化亞錫還原法：在堿性條件及有Cd存在條件下，高濃度的SnCl2將有機(jī)汞及無(wú)機(jī)汞還原成元素，用測(cè)氯儀測(cè)定 ①汞標(biāo)準(zhǔn)液 ②基體尿液 正常人混合尿 ③NaOH液 ④DL半胱氨酸 將上述標(biāo)準(zhǔn)系列液加1滴磷酸三酯，加SnCl2CdSO4液立即通入空氣測(cè)定（載氣）：①磷酸三酯 消泡②Cd2+催化作用③DL半胱氨酸起穩(wěn)定劑的作用，防止無(wú)機(jī)汞吸附揮發(fā)；還可使有機(jī)汞不分解④測(cè)定讀數(shù)：讀取最大吸光度值（二）酸性SnCl2還原法：用KMnO4和濃H2SO4分解尿樣，使汞都轉(zhuǎn)化成Hg2+，用SnCl2還原成Hg，吹空氣導(dǎo)入測(cè)汞儀：尿液和標(biāo)準(zhǔn)系列液同樣用KMnO4和濃H2SO4分解：1）KMnO4和濃H2SO4加入的順序：先加KMnO4液再加濃H2SO4 2）測(cè)定前先對(duì)氣路系統(tǒng)進(jìn)行凈化；加SnCl2（酸性）測(cè)定空白水、吹氣觀察到儀器的響應(yīng)值為零為止 每次測(cè)定都使響應(yīng)值為0再測(cè)第二份第三章：非金屬化合物及其代謝產(chǎn)物 第一節(jié)：CO一、代謝及生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)： 呼吸道：進(jìn)入機(jī)體與血紅蛋白結(jié)合形成碳氧血紅蛋白（HbCO）形式導(dǎo)致機(jī)體組織缺O(jiān)2CO+Hb219。HbCO： 血液中HbCO形式 呼出氣 約有1%被氧化成CO2 1）血中碳氧血紅蛋白 2）呼出氣中CO三、樣品的采集與保存：1）采集班中（3h后）或班末呼出氣2）收集終末呼出氣：1）采集班中（3h后）或接觸最高濃度時(shí)的血2）抗凝3）密閉保存 4℃ 11周 4）最好取靜脈血 5）受試者不抽煙四、血中碳氧血紅蛋白的測(cè)定——分光光度法+原理：1）血中血紅蛋白的四種成分：Hb、HbOHbCO、HbMetSO2）HbCO，HbMet190。Na190。190。190。174。Hb 3）測(cè)定Hb和HbCO吸光度，最大吸收波長(zhǎng)分別為223432nm和420nm測(cè)定方法：1）摩爾吸光系數(shù)的測(cè)定：用吸光系數(shù)代替（1）過(guò)飽和HbO2液的制備，血樣用水和Tris液適量稀釋通入O2 30min（2）飽和HbO2液的制備：?。?）中2份通入N2（3）飽和HbCO液制備 取（1）中2份，通入CO 10min（4）HbCO和Hb液制備 在（2）和（3）的溶液中加Na2S2O4固體（2）174。Hb（3）174。Hb，HbCO（5）分別測(cè)定420nm和430nm吸光度作為吸光常數(shù)（有四個(gè)值）SO2）血樣測(cè)定 稀釋血樣190。Na190。190。190。174。224HbHbCO 分別測(cè)420nm和430nm的吸光度3．計(jì)算 ：碳氧血紅蛋白（%）=A430K2A420K4A420(K2K4)A430(K1K3)A420：血樣在420nm吸光度 ；A430血樣在430nm吸光度 KK2是HbCO在420nm、430nm的吸光常數(shù) KK4是Hb在420nm、430nm的吸光常數(shù)：（1）所用氮?dú)夂脱鯕鈶?yīng)為高純度氮和高純度氧，不純氮和氧氣中含微量的CO，能干擾測(cè)定結(jié)果（2）連二亞硫酸鈉遇水易分解，在空氣中容易被氧化失效，應(yīng)以小瓶分裝使用，避免接觸空氣和水分（3）測(cè)定吸光系數(shù)必須采用新鮮血液，一次測(cè)定值在儀器波長(zhǎng)穩(wěn)定的情況下可以使用一段時(shí)間，但還應(yīng)定期核檢。（4）測(cè)試液應(yīng)盡量避免接觸空氣，及時(shí)測(cè)定，否則會(huì)造成結(jié)果偏低第二節(jié)CS2二、代謝及生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)（一）代謝吸收：呼吸道、皮膚生物轉(zhuǎn)化1）吸收后約70~90%轉(zhuǎn)化為多種代謝產(chǎn)物2）目前，接觸者中尿中已確認(rèn)的有3種：TTCA、2巰基2噻唑啉酮5，硫脲（其中TTCA研究較少，生減期為2h）3）排出： ~30%以原形從呼吸道排出%以原形從尿中排出（二）生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)尿中TTCA：班末尿呼出氣中CS2,目前研究較少三、樣品采集與保存四、尿中TTCA的測(cè)定——HPLC法樣品的處理：A、取離心后的尿樣 B、稀HCL酸化：乙醚提取C、離心分層，去上層醚液于試管中D、40℃用N2吹干加20ul甲醇定容說(shuō)明：A、尿樣經(jīng)離心后取上層尿液，易于分離B、此法從國(guó)外引進(jìn)，將原來(lái)的梯度洗脫改為等度洗脫。國(guó)外的梯度洗脫是用兩種配比的流動(dòng)相切換洗脫C、TTCA純品需自己純化五、呼出氣中CS2測(cè)定（一）GC法樣品處理：（1）、呼出氣中CS2濃度在測(cè)定范圍內(nèi)不需要處理，直接進(jìn)樣（2）、呼出氣中CS2低于測(cè)定濃度范圍需富集，用Tenron GC管富集色譜條件：固定相：OV17；檢測(cè)器：火焰光度檢測(cè)器說(shuō)明：（1）采集終末呼出氣，最后呼出的100ml（2）TenronGC管：2,6二苯基對(duì)苯醚的多孔聚合物，用于捕集/熱解吸（3）富集測(cè)定要求做富集空白測(cè)定：用180ml氣體（沖洗氣）注入空白Tenron GC管中，熱解吸后測(cè)定（二）檢氣管法：快速檢測(cè)法根據(jù)檢氣管中形成色帶長(zhǎng)度，粗略估計(jì)濃度特點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單、快速、成本低、精度差，相對(duì)偏差達(dá)20%30%以上 第四章芳香烴及其代謝產(chǎn)物 第一節(jié)苯一、代謝及生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)吸收：主要是呼吸道，其次是皮膚代謝與排泄1）吸入的苯約50%以上以原形從肺中排出，約10%以原形儲(chǔ)存在有機(jī)組織中2）約40%進(jìn)入血液循環(huán)，在肝中代謝，代謝產(chǎn)物50%70%的苯酚，6%為間苯二酚，2%為對(duì)苯二酚，還有極少量的粘糖酸等都以結(jié)合態(tài)從尿中排出 3）有極少量的苯以原形從尿中排出生物檢測(cè)指標(biāo)：1）尿酚A、因正常人尿中很有酚且個(gè)體差異大B、尿酚不是特異性指標(biāo) C、僅用于群檢2）呼出氣中的苯：在測(cè)定尿酚以后，測(cè)定呼出氣中苯作為確認(rèn)試驗(yàn) 3）尿苯：1993年有人提出用尿苯作苯接觸的生物接觸指標(biāo)，目前，還沒(méi)納入生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)二、呼出氣中苯的測(cè)定——GC法（一）原理：用塑料袋或采樣管收集呼出氣，呼出氣用N2吹入活性炭管吸附（78℃）280℃熱解吸，用載氣（N2）導(dǎo)入色譜儀，F(xiàn)ID檢驗(yàn)，通過(guò)六通閥切換完成（二）苯標(biāo)準(zhǔn)氣的配制：注入20ul苯于100ml玻璃配氣瓶中，臨用時(shí)從中抽取一定體積注入另一配氣瓶中稀釋成20ng/ml的苯標(biāo)準(zhǔn)氣（三）測(cè)定 ： 1）取苯標(biāo)準(zhǔn)氣（、）和樣品分別注入呼吸氣的采樣管中2）將采集管37攝氏度恒溫2h3）一端與六通閥連接，一端接N4）吹入冷阱（78℃）中的活性炭管5）熱解吸導(dǎo)入色譜儀三、尿酚的測(cè)定——GC法原理：尿樣加鹽酸加熱（90℃水?。┧?，再用乙醚萃取苯酚尿樣采集與保存：班末尿50ml4℃2周樣品處理與測(cè)定： 1），1ml濃鹽酸于具塞試管中，90℃水浴1h2）、3）取上層醚液注入GC儀標(biāo)準(zhǔn)曲線：苯酚標(biāo)準(zhǔn)系列液用3ml乙醚提取色譜條件（1）液晶柱分離分離苯酚和鄰間對(duì)甲酚。（2）FFAP柱，分離苯酚和對(duì)甲酚說(shuō)明：（1）3ml乙醚萃取要避免乙醚揮發(fā)，分層后不是3ml，加乙醚補(bǔ)至3ml（2）可用內(nèi)標(biāo)志法定量四、甲苯、二甲苯（一）代謝及生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)1）代謝(1)甲苯 ①約15%~25%以原型呼出約1%從尿中排出②約80%代謝甲苯→[O]苯甲酸→馬尿酸馬尿酸排出的半減期為2~3人。(2)二甲苯①約5%原