【正文】 過篩而己，不能完全代替人工鏡檢。根據(jù)1987年我赴日本考察時(shí)，日本對(duì)三分群儀器白細(xì)胞分類是不收費(fèi)的，而且每一例仍然需要涂片染色，在顯微鏡下重新分類后才能報(bào)告。1989年Coulter公司制定了復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)，調(diào)查了11個(gè)床位及性質(zhì)不同的醫(yī)療單位，它們均使用該公司的三分群血細(xì)胞分析儀，根據(jù)該公司的復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)，其復(fù)檢率為15%～60%，平均為40%，使手工分類減少40～85%，平均減少了60%，也就是說用節(jié)省下來的時(shí)間好好為40%需要分類的病人服務(wù)。最近日本名古屋大學(xué)醫(yī)學(xué)部附屬醫(yī)院報(bào)告，他們用SysmexXE2100（五分類）%.再次證明當(dāng)前最先進(jìn)血細(xì)胞分析儀也不能完全替代人工檢查。由于沒有復(fù)檢而產(chǎn)生的漏檢白血病、異常淋巴細(xì)胞、瘧原蟲，還有EDTA依賴性血小板假性降低等己引起的醫(yī)療糾紛，應(yīng)該引起我們深思。二、復(fù)檢內(nèi)涵尚待統(tǒng)一有人認(rèn)為“復(fù)檢”就是要在鏡下重新進(jìn)行白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)而己，這是偏面的。復(fù)檢內(nèi)涵應(yīng)包據(jù)：對(duì)血細(xì)胞分析儀測定的全部結(jié)果進(jìn)行評(píng)估，必要時(shí)包括原標(biāo)本重查，或重新用人工復(fù)查等。因此血常規(guī)手工操作不能丟；2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試臨檢基礎(chǔ)知識(shí)輔導(dǎo)：精液檢查的具備條件受檢者，經(jīng)歷一段經(jīng)常排精過程后，禁房事5－7天（上次排精到取標(biāo)本間隔時(shí)間至少不得少于100小時(shí)）；備大口有蓋清潔干燥容器一個(gè)，以手淫方式獲取精液，一次全部射入容器，蓋上蓋，記錄標(biāo)本離體時(shí)間；貼身保溫，30分鐘內(nèi)送到化驗(yàn)室，并向檢驗(yàn)員提供標(biāo)本取出時(shí)間。精液常規(guī)觀察：精液總?cè)萘浚ê辽?，精子活?dòng)情況，精子密度（個(gè)/毫升），精液液化時(shí)間（標(biāo)本取出到精液液化的時(shí)間），不動(dòng)精子（個(gè)/高倍視野）等。見不動(dòng)精子，須染色方可區(qū)分：不活動(dòng)的精子、死精子、未成熟精子等。找不到精子必須離心后檢驗(yàn)，仍然找不到精子；方可報(bào)告無精。經(jīng)三次取樣化驗(yàn)，結(jié)果仍然找不到精子方可確認(rèn)無精子癥。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試免疫檢驗(yàn)輔導(dǎo)：血漿的鑒別方法血漿是血液的液體成分，血細(xì)胞懸濁于其中。人體含有27503300毫升血漿，約占血液總體積的55%.血漿的絕大部分是水（體積的90%），其中溶解的物質(zhì)主要是血漿蛋白，還包括葡萄糖、無機(jī)鹽離子、激素以及二氧化碳。血漿的主要功能是運(yùn)載血細(xì)胞，同時(shí)也是運(yùn)輸分泌產(chǎn)物的主要媒介。將新鮮血液離心，使血細(xì)胞沉降，上層淡黃色清液即是血漿。血漿與血清的區(qū)別是血清中不含纖維蛋白原等凝血因子。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試免疫檢驗(yàn)輔導(dǎo)：血漿的主要作用提供基本營養(yǎng)物質(zhì)：氨基酸、維生素、無機(jī)物、脂類物質(zhì)、核酸衍生物等，是細(xì)胞生長必須的物質(zhì)。提供激素和各種生長因子：胰島素、腎上腺皮質(zhì)激素（氫化可的松、地塞米松）、類固醇激素（雌二醇、睪酮、孕酮）等。生長因子如成纖維細(xì)胞生長因子、表皮生長因子、血小板生長因子等。提供結(jié)合蛋白：結(jié)合蛋白作用是攜帶重要地低分子量物質(zhì)，如白蛋白攜帶維生素、脂肪、以及激素等，轉(zhuǎn)鐵蛋白攜帶鐵。結(jié)合蛋白在細(xì)胞代謝過程中起重要作用。提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷。對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用：有一些細(xì)胞，如內(nèi)皮細(xì)胞、骨髓樣細(xì)胞可以釋放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。這種作用是偶然發(fā)現(xiàn)的，現(xiàn)在則有目的的使用血清來終止胰蛋白酶的消化作用。因?yàn)橐鹊鞍酌敢呀?jīng)被廣泛用于貼壁細(xì)胞的消化傳代。血清蛋白形成了血清的粘度，可以保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷，特別是在懸浮培養(yǎng)攪拌時(shí)，粘度起到重要作用。血清還含有一些微量元素和離子，他們?cè)诖x解毒中起重要作用，如SeO3，硒等。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：離心技術(shù)的工具離心機(jī)（centrifuge）是實(shí)施離心技術(shù)的裝置。離心機(jī)的種類很多，按照使用目的，可兩類，即制備型離心機(jī)和分析型離心機(jī)。前者主要用于分離生物材料，每次分離樣品的容量比較大，后者則主要用于研究純品大分子物質(zhì)，包括某些顆粒體如核蛋白體等物質(zhì)的性質(zhì)，每次分析的樣品容量很小，根據(jù)待測物質(zhì)在離心場中的行為（可用離心機(jī)中的光學(xué)系統(tǒng)連續(xù)地監(jiān)測），能推斷其純度、形狀和相對(duì)分子質(zhì)量等性質(zhì)。兩類離心機(jī)由于用途不同，故其主要結(jié)構(gòu)也有差異。通常所使用的離心機(jī)根據(jù)轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)速大小的不同可分為普通離心機(jī)、高速離心機(jī)和超速離心機(jī)三類2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：離心技術(shù)的概況離心技術(shù)是利用物體高速旋轉(zhuǎn)時(shí)產(chǎn)生強(qiáng)大的離心力，使置于旋轉(zhuǎn)體中的懸浮顆粒發(fā)生沉降或漂浮，從而使某些顆粒達(dá)到濃縮或與其他顆粒分離之目的。這里的懸浮顆粒往往是指制成懸浮狀態(tài)的細(xì)胞、細(xì)胞器、病毒和生物大分子等。離心機(jī)轉(zhuǎn)子高速旋轉(zhuǎn)時(shí)，當(dāng)懸浮顆粒密度大于周圍介質(zhì)密度時(shí)，顆粒離開軸心方向移動(dòng)，發(fā)生沉降；如果顆粒密度低于周圍介質(zhì)的密度時(shí)，則顆粒朝向軸心方向移動(dòng)而發(fā)生漂浮。常用的離心機(jī)有多種類型，一般低速離心機(jī)的最高轉(zhuǎn)速不超過6000rpm，高速離心機(jī)在25000rpm以下，超速離心機(jī)的最高速度達(dá)30000rpm以上。根據(jù)離心原理，可設(shè)計(jì)多種離心方法，常見下列三大類型：。通過逐步增加相對(duì)離心力，使一個(gè)非均相混合液內(nèi)形狀不同的大小顆粒分步沉淀。離心前，離心管內(nèi)先裝入分離介質(zhì)（如蔗糖、甘油等），使形成連續(xù)的或不連續(xù)的密度梯度介質(zhì)，然后加入樣品進(jìn)行離心，具體又可分為：1）速度區(qū)帶離心法。離心前，離心管內(nèi)先裝入蔗糖、甘油、CsCl、Percoll等密度梯度介質(zhì)，待分離樣品鋪在梯度液的頂部，離心管底部或梯度層中間，同梯度液一起離心，利用各顆粒在梯度液中沉降速度或漂浮速度的不同，使具有不同沉降速度的顆粒處于不同密度的梯度層內(nèi)，達(dá)到彼此分離的目的。本法可分離各種細(xì)胞、病毒、染色體、脂蛋白、DNA和RNA等生物樣品。2）預(yù)制梯度等密度離心法。要求在離心前預(yù)先配制管底濃而管頂稀的密度梯度介質(zhì)，常用介質(zhì)有蔗糖、CsCl、Cs2SO4等，待分離樣品一般鋪在梯度液頂上，如需挾在梯度液中間或管底部，則需調(diào)節(jié)樣品液密度。離心后，不同密度的樣品顆粒到達(dá)與自身密度相等的梯度層，即達(dá)到等密度的位置而獲得分離。3）自成梯度等密度離心法。某些密度介質(zhì)經(jīng)過離心后會(huì)自成梯度，例Percoll，可迅速形成梯度，CsCl、Cs2SO4和三碘甲酰葡萄糖胺經(jīng)長時(shí)間離心后也可產(chǎn)生穩(wěn)定的梯度。需要離心分離的樣品可和梯度介質(zhì)先均勻混合，離心開始后，梯度介質(zhì)由于離心力的作用逐漸形成管底濃而管頂稀的密度梯度，與此同時(shí)，可以帶動(dòng)原來混合的樣品顆粒也發(fā)生重新分布，到達(dá)與其自身密度相等的梯度層里，即達(dá)到等密度的位置而獲得分離。根據(jù)被分離物質(zhì)的浮力密度差別進(jìn)行分離，所用的介質(zhì)起始密度約等于被分離物質(zhì)的密度，介質(zhì)在離心過程中形成密度梯度，被分離物質(zhì)沉降或上浮到達(dá)與之密度相等的介質(zhì)區(qū)域中停留并形成區(qū)帶。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：離心技術(shù)的概況離心技術(shù)是利用物體高速旋轉(zhuǎn)時(shí)產(chǎn)生強(qiáng)大的離心力，使置于旋轉(zhuǎn)體中的懸浮顆粒發(fā)生沉降或漂浮，從而使某些顆粒達(dá)到濃縮或與其他顆粒分離之目的。這里的懸浮顆粒往往是指制成懸浮狀態(tài)的細(xì)胞、細(xì)胞器、病毒和生物大分子等。離心機(jī)轉(zhuǎn)子高速旋轉(zhuǎn)時(shí)，當(dāng)懸浮顆粒密度大于周圍介質(zhì)密度時(shí)，顆粒離開軸心方向移動(dòng)，發(fā)生沉降；如果顆粒密度低于周圍介質(zhì)的密度時(shí)，則顆粒朝向軸心方向移動(dòng)而發(fā)生漂浮。常用的離心機(jī)有多種類型，一般低速離心機(jī)的最高轉(zhuǎn)速不超過6000rpm，高速離心機(jī)在25000rpm以下，超速離心機(jī)的最高速度達(dá)30000rpm以上。根據(jù)離心原理，可設(shè)計(jì)多種離心方法，常見下列三大類型：。通過逐步增加相對(duì)離心力，使一個(gè)非均相混合液內(nèi)形狀不同的大小顆粒分步沉淀。離心前，離心管內(nèi)先裝入分離介質(zhì)（如蔗糖、甘油等），使形成連續(xù)的或不連續(xù)的密度梯度介質(zhì)，然后加入樣品進(jìn)行離心，具體又可分為：1）速度區(qū)帶離心法。離心前，離心管內(nèi)先裝入蔗糖、甘油、CsCl、Percoll等密度梯度介質(zhì)，待分離樣品鋪在梯度液的頂部，離心管底部或梯度層中間，同梯度液一起離心，利用各顆粒在梯度液中沉降速度或漂浮速度的不同，使具有不同沉降速度的顆粒處于不同密度的梯度層內(nèi)，達(dá)到彼此分離的目的。本法可分離各種細(xì)胞、病毒、染色體、脂蛋白、DNA和RNA等生物樣品。2）預(yù)制梯度等密度離心法。要求在離心前預(yù)先配制管底濃而管頂稀的密度梯度介質(zhì)，常用介質(zhì)有蔗糖、CsCl、Cs2SO4等，待分離樣品一般鋪在梯度液頂上，如需挾在梯度液中間或管底部，則需調(diào)節(jié)樣品液密度。離心后，不同密度的樣品顆粒到達(dá)與自身密度相等的梯度層，即達(dá)到等密度的位置而獲得分離。3）自成梯度等密度離心法。某些密度介質(zhì)經(jīng)過離心后會(huì)自成梯度，例Percoll，可迅速形成梯度，CsCl、Cs2SO4和三碘甲酰葡萄糖胺經(jīng)長時(shí)間離心后也可產(chǎn)生穩(wěn)定的梯度。需要離心分離的樣品可和梯度介質(zhì)先均勻混合，離心開始后，梯度介質(zhì)由于離心力的作用逐漸形成管底濃而管頂稀的密度梯度，與此同時(shí)，可以帶動(dòng)原來混合的樣品顆粒也發(fā)生重新分布，到達(dá)與其自身密度相等的梯度層里，即達(dá)到等密度的位置而獲得分離。根據(jù)被分離物質(zhì)的浮力密度差別進(jìn)行分離，所用的介質(zhì)起始密度約等于被分離物質(zhì)的密度，介質(zhì)在離心過程中形成密度梯度，被分離物質(zhì)沉降或上浮到達(dá)與之密度相等的介質(zhì)區(qū)域中停留并形成區(qū)帶。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：動(dòng)脈血?dú)鈽?biāo)本采集方法一、抗凝劑的配制首先推薦使用市場上有售的專用采血針，愿意自己配制抗凝采血針的用戶，%NS50ml+肝素鈉針劑2支（12500U）配制成肝素稀釋液備用，并做好無菌儲(chǔ)藏。每抽血?dú)馇埃?ml注射器抽取肝素稀釋液2ml，完全濕潤整個(gè)針管后棄去肝素液，殘留在針頭及針管頭部死腔內(nèi)的肝素液即可起到抗凝作用?？鼓齽┥倭藭?huì)使血液凝集，堵塞血?dú)夥治鰞x的流路系統(tǒng)，抗凝劑多了會(huì)影響血?dú)夂碗x子的檢測結(jié)果，大劑量的抗凝劑會(huì)嚴(yán)重使離子鈣偏低，誤導(dǎo)臨床。二、采血方法的選擇成人：用肝素化的玻璃注射器或一次性注射器穿刺，采血部位首選橈動(dòng)脈，次選股動(dòng)脈小兒：首選用顳淺動(dòng)脈或頭皮小動(dòng)脈，嚴(yán)格消毒后，用肝素化的5號(hào)頭皮針連接2ml注射器，待動(dòng)脈血流至注射器乳頭時(shí)，立即用小止血鉗分別夾住頭皮針?biāo)芰宪浌苁孜矁啥耍ǎ缓蟀纬鲠橆^立即混勻送檢。用肝素化的注射器穿刺，采血部位首選小兒橈動(dòng)脈，小嬰兒可用顳淺動(dòng)脈取血，取完血一定要密封。因技術(shù)條件限制，不能反復(fù)動(dòng)脈穿刺時(shí)，早產(chǎn)兒與小嬰兒可在足后跟用肝素化毛細(xì)管采取動(dòng)脈化毛細(xì)血管的血亦可。動(dòng)脈化毛細(xì)血管采血，用不超過42～45℃的濕巾熱敷采血部位皮膚5～15分鐘，使血液增加，血流加速，達(dá)到動(dòng)脈化，然后穿刺，穿刺要深，使血流快速自動(dòng)流出，棄去第一滴血，不能擠壓，用肝素化的毛細(xì)管吸?。ńㄗh采用廠家配套提供的專用毛細(xì)管），吸滿后一定要密封，混勻后立即送檢。未充分動(dòng)脈化的毛細(xì)管血的PO2偏低，對(duì)PH、PCO2和HCO3—的測定結(jié)果影響不明顯。三、采血后處理采血后針尖或毛細(xì)吸血管兩端立即用橡皮帽或橡皮泥封住，防止空氣氣泡進(jìn)入，并立即充分混勻達(dá)到抗凝目的，并立即送檢，從采血到送檢不宜超過20分鐘，以免血細(xì)胞代謝耗氧，使PO2和PH值下降PCO2升高。若不能立即測定，應(yīng)將血?dú)鈽?biāo)本保存在2～8℃容器內(nèi)，但即使這樣待測時(shí)間也不宜超過2小時(shí)。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：VC影響血糖尿糖檢測解放軍總醫(yī)院檢驗(yàn)中心主任叢玉隆指出，維生素c（vc）可以還原尿糖檢測試劑中的酶，會(huì)導(dǎo)致尿糖檢測的結(jié)果失真，對(duì)于糖尿病患者來說，服用維生素要謹(jǐn)慎。第一次遇到尿糖檢測失真是在1984年，叢玉隆還是醫(yī)院檢驗(yàn)科的檢驗(yàn)員。一天晚上急診科一患者化驗(yàn)的結(jié)果是血糖8毫克。急診醫(yī)生一看檢驗(yàn)報(bào)告馬上產(chǎn)生疑問：怎么會(huì)是8毫克？人的正常血糖最低是80毫克，如果真是8毫克，那這個(gè)人早就死了。于是檢驗(yàn)科再次對(duì)病人的血樣化驗(yàn)，結(jié)果還是8毫克，叢玉隆仔細(xì)檢查了檢驗(yàn)程序和檢驗(yàn)設(shè)備，都沒發(fā)現(xiàn)問題，但檢驗(yàn)結(jié)果確實(shí)與病人實(shí)際病情不符。叢玉隆再仔細(xì)檢查后，發(fā)現(xiàn)在抽取病人血樣時(shí)，患者正輸著vc，結(jié)果終于弄明白了，原來是患者血樣中含有的大量vc還原了檢驗(yàn)試劑中的酶，干擾了病人的血糖檢驗(yàn)結(jié)果。vc的影響到底有多大？叢玉隆再次做了試驗(yàn)，一組人一天吃3片vc（每片100毫克），第二天檢測結(jié)果是每毫升尿含vc30毫克。一組人一天吃6片vc，第二天尿含vc90毫克。一組人一天吃了9片vc，第二天尿含vc是300毫克。叢玉隆說，假如一個(gè)糖尿病人，沒吃vc以前的尿糖是2個(gè)加號(hào)，吃了9片vc后，就可能是1個(gè)加號(hào)，甚至?xí)霈F(xiàn)陰性結(jié)果。叢玉隆進(jìn)行的另一個(gè)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，給健康人靜脈推注vc2000毫克，然后在不同時(shí)間段取尿，30分鐘后尿含vc600多毫克、1小時(shí)500多毫克、5小時(shí)后含幾十毫克（正常值），說明靜脈使用大劑量vc對(duì)糖尿病人的尿糖檢查干擾更大。試驗(yàn)也證明5個(gè)小時(shí)以后，使用vc的病人每毫升尿含vc幾十毫克，已經(jīng)屬于正常值，不再干擾檢驗(yàn)結(jié)果。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：血磷測定的參考值參考值：血清磷：～2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：血磷的測定方法血清無機(jī)磷的測定方法一般有磷鉬酸法、染料法和酶法。磷鉬酸法是血清中無機(jī)磷與鉬酸鹽結(jié)合形成磷鉬酸化合物，再用還原劑將其還原成鉬藍(lán)進(jìn)行比色測定。染料法如孔雀綠直接顯色測定法。雖非常敏感，但影響因素多，顯色不穩(wěn)定，重復(fù)性也較差，不能用于常規(guī)檢驗(yàn)。酶法是一個(gè)偶聯(lián)反應(yīng)，參與反應(yīng)的酶有糖原磷酸化酶、葡萄糖磷酸變位酶及葡萄糖6磷酸脫氫酶，反應(yīng)中使NADP+還原成NADPH，形成NADPH在340nm波長下測定其吸光度，該方法不受有機(jī)磷酸酯的干擾。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：火焰分光光度法的儀器原始的火焰光度計(jì)由霧化器、火焰燃燒嘴、濾光片和光電池檢測器組成?，F(xiàn)代的火焰分光光度計(jì)的基本框圖（見圖）示意出：試樣溶液經(jīng)霧化后噴入火焰，溶劑在火焰中蒸發(fā)，鹽粒熔融，轉(zhuǎn)化為蒸氣，離解成原子（部分電離），再由火焰高溫激發(fā)發(fā)光，發(fā)射的光經(jīng)切光器調(diào)制，并由單色器（通常是光柵）分光，選擇待測波長譜線，經(jīng)光電轉(zhuǎn)換和電信號(hào)放大后檢出。反射鏡起聚光作用?；鹧婀舛确ǔＳ玫幕鹧媸窃诖髿夂銐合陆?jīng)化學(xué)反應(yīng)而燃燒的。不同的燃料氣體和助燃?xì)饨M分，及其配比，稱助/燃比，決定該化學(xué)火焰能達(dá)到的最高溫度和化學(xué)作用性質(zhì)（見表）。這是火焰光度法應(yīng)用中要選擇的關(guān)鍵條件。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：火焰分光光度法的簡史，就是火焰分光光度法的起源，用此法發(fā)現(xiàn)了許多新元素。，并使用了參考元素技術(shù)。由于當(dāng)時(shí)使用照相方法記錄譜線，致使準(zhǔn)確定量分析工作較為繁瑣。1