【正文】 等部位的皮疹或皰疹等特征。引發(fā)手足口病的腸道病毒有20多種（型），均屬微小核糖核酸病毒科、人腸道病毒屬。目前國(guó)內(nèi)手足口病的病原體以柯薩奇病毒A組16性（CoxA16）和腸道病毒71型（EV71）為主[1]，兩者所致的手足口病在臨床上難以區(qū)別，但EV71感染除了引起手足口病外，還能夠引起無(wú)菌性腦膜炎、腦干腦炎、急性弛緩性癱瘓等多種與神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)的疾病[2]。為了解池州地區(qū)手足口病病原體的分布特征，探索相應(yīng)的防治策略和應(yīng)對(duì)措施，對(duì)2010年收集的133例臨床診斷疑似病例標(biāo)本采用分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)行EV71和CoxA16病毒核酸檢測(cè)，為該地區(qū)手足口病的診斷、預(yù)防和控制措施的制定提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。1 材料與方法 材料 標(biāo)本來(lái)源選取2010年池州地區(qū)各大醫(yī)院臨床診斷為手足口病部分病例的咽拭子標(biāo)本保存于病毒保存液中，4℃冷鏈運(yùn)輸。70℃保存?zhèn)溆谩?主要儀器和試劑儀器：AB2720擴(kuò)增儀、DYY6C型水平電泳儀、Gel Doc XR凝膠成像儀。試劑：德國(guó)Qiangen公司的RNeasy Mini Kit(貨號(hào)74104）和One step RTPCR Kit(貨號(hào)210212)，引物由安徽省疾控中心提供。引物核酸序列：腸道病毒通用引物PE2(上游)：5,TCCGGCCCCTAGATGCGGCTAATCC3， 腸道病毒通用引物PE1(下游)：5,ACACGGACACCCAAAGTAGTCGGTCC3,。EV71S(上游)：5,GCAGCCCAAAAGAACTTCAC3， EV71A(下游):5,ATTTCAGCAGCTTGGAGTGC3,。CoxA16S(上游):5,ATTGGTGCTCCCACTACAGC3， CoxA16A(下游):5,TCAGTGTTGGCAGCTGCAGG3,。 方法 核酸提取采用德國(guó)Qiangen公司的試劑盒，按照說(shuō)明書(shū)操作，最終收集RNA模板50ul備用。 RTPCR 采用德國(guó)Qiangen公司的試劑盒，按照說(shuō)明書(shū)配制。反應(yīng)體系25ul,每次實(shí)驗(yàn)均設(shè)置陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照。擴(kuò)增程序：60℃1min, 42℃10min, 50℃30min, 95℃15min；94℃30s, 52℃30s, 72℃1min,40個(gè)循環(huán)；72℃7min；4℃保存。 擴(kuò)增產(chǎn)物檢測(cè)TBE緩沖液配制2%瓊脂糖凝膠，上樣后100V恒壓電泳40分鐘，用凝膠成像儀分析相應(yīng)PCR產(chǎn)物條帶，紫外燈下觀察特異性核酸條帶。以DL2000marker作參照，有目的片段條帶出現(xiàn)即判為陽(yáng)性。2 結(jié)果 RTPCR核酸檢測(cè)結(jié)果133例臨床診斷病例標(biāo)本總腸道病毒陽(yáng)性79例，%，其中EV71陽(yáng)性28例，%；CoxA16陽(yáng)性24例，%；非EV、CoxA16其他腸道病毒陽(yáng)性27例，%.133例中，男性73例，總腸道病毒41例，%；女性60例，總腸道病毒38例，%。見(jiàn)表1。 臨床診斷病例年齡別腸道病毒陽(yáng)性率133例中，最小年齡6個(gè)月，最大12歲，以1歲至4歲患兒為主。見(jiàn)表2。來(lái)自不同縣區(qū)病例的檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表3。 不同病情程度病例的病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果133例病例中，輕型病例127例，EV71陽(yáng)性24例，CoxA16陽(yáng)性24例，非EV7CoxA16其他腸道病毒26例；重癥病例6例，EV71陽(yáng)性4例，非EV7CoxA16其他腸道病毒1例。見(jiàn)表4。3討論手足口病是嚴(yán)重危害兒童健康的全球性疾病，世界大部分國(guó)家和地區(qū)均有此病流行的報(bào)道。1957年新西蘭首次報(bào)道，1958年加拿大Robinson和Rhodes首次從患者中分離出柯薩奇病毒[3]，1959年提出HFMD命名。已知引起手足口病的腸道病毒有20多種（型），其中以CoxA16和EV71最為常見(jiàn)。我國(guó)自1980年開(kāi)始有HFMD的報(bào)道[4]。1985年前CoxA16是我國(guó)手足口病的主要病原體，但最近的研究結(jié)果顯示EV71在HFMD病原學(xué)中占有越來(lái)越重要的位置。2008年3月安徽阜陽(yáng)發(fā)生較大規(guī)模的EV71感染暴發(fā)流行[5]，引起國(guó)內(nèi)外的高度關(guān)注。與CoxA16相比，EV71更易導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥，它可引發(fā)致死性腦病、腦出血甚至心肌炎猝死[6,7]。但EV71在不同時(shí)間和地區(qū)流行的臨床癥狀各異，與CoxA16難以區(qū)別，且CoxA16往往伴隨EV71流行[8]。本研究對(duì)池州地區(qū)各大醫(yī)院臨床診斷病例的133份咽拭子標(biāo)本進(jìn)行了病原學(xué)檢測(cè)，結(jié)果顯示133份標(biāo)本呈現(xiàn)總腸道病毒陽(yáng)性79份，%，其中EV71陽(yáng)性28份，%，CoxA16陽(yáng)性24份，%，非EV、CoxA16其他腸道病毒陽(yáng)性27例，%。從性別分布來(lái)看，男女比例為無(wú)差別。從年齡分布來(lái)看，4歲以下兒童是手足口病發(fā)病的主要人群（%），故應(yīng)加大對(duì)托幼機(jī)構(gòu)及學(xué)校傳染病防控工作的指導(dǎo)，大力普及手足口病防治知識(shí)，增強(qiáng)群眾自我保健意識(shí)，尤其要積極做好4歲以下嬰幼兒的個(gè)人防護(hù)，減少疾病的發(fā)生[9]。從縣區(qū)發(fā)表來(lái)看，石臺(tái)縣雖然地偏人稀、人口密度較低，但病例陽(yáng)性率較高，這除與采樣技術(shù)和送檢要求等影響因素有關(guān)外，是否與所在地區(qū)的地理氣候和氣溫有關(guān)，有待進(jìn)一步研究。133例手足口病例中，有6例重癥病例，其中4例為EV71型病毒，這進(jìn)一步證明了EV71病毒感染性強(qiáng)，致病率高，易引起神經(jīng)毒性，侵犯肺心腦，使一些患兒病情較重，甚至死亡[10]。由于手足口病至今仍無(wú)有效的疫苗和特異的治療手段，因此加強(qiáng)疫情監(jiān)測(cè)，及時(shí)掌握病原感染特征，早發(fā)現(xiàn)，早隔離，早治療是預(yù)防和控制本病流行的關(guān)鍵[11]。加強(qiáng)對(duì)實(shí)驗(yàn)室建設(shè)，建立市級(jí)手足口病網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室，規(guī)范手足口病標(biāo)本采集和檢測(cè)技術(shù)，提供對(duì)手足口病病原體快速而準(zhǔn)確的檢測(cè)，對(duì)手足口病的防治和動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)具有重要的作用。4參考文獻(xiàn)［1］朱汝南，錢(qián)淵，鄧潔，[J].中華流行病學(xué)雜志，2007，28（10）：10041008 ［2］ 楊秀惠，[J].傳染病信息，2008，21（3）：129131 ［3］HSUEH C,JUNG M,SHIH S R,et encephalomyelitis during an outbreak of enterovirus type 71 infection in Taiwan:report of an autopsy case with pathologic,immunofluorescence and molecular studies[J].Modern Pathology,2000,13(11)12001205 ［4］何家鑫，[J].海峽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2001，7（3）：2224 ［5］[EB/OL].[20080620]. ［6］牛錄青，董曉君，[J].中國(guó)綜合臨床，2000，16（3）：219 ［7］[J].中華傳染病雜志，2000，（12）12：246247 ［8］Brown BA，Kilpatrick D R,Oberste M S,et specific identification of enterovirus 71 by PCR[J].J Clin Virol,2000,16(2):107112 ［9］ 檀曉娟，[J].中國(guó)疫苗和免疫，2008，4（4）：361367 ［10］張紅，黃一偉，劉運(yùn)芝，[J].實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2008，15（6）：19331935 ［11］ （2008年版）[M].2008.