dna重組和基因轉(zhuǎn)移-資料下載頁
2025-01-08 01:52本頁面
【正文】 光微束引起細胞膜可逆性穿孔的原理，在熒光顯微鏡下找出合適的細胞，然后用激光光源代替熒光光源，聚焦后發(fā)出激光微束脈沖，造成膜穿孔，處于細胞周圍的外源 DNA分子隨之進入細胞。 基本原理：是利用低聲強脈沖超聲波的物理作用，擊穿細胞膜造成通道，使外源 DNA進入細胞。 利用 超聲波處理可避免脈沖高壓對細胞的損傷作用，有利于原生質(zhì)體的存活，是一種有潛力的轉(zhuǎn)化途徑。 （ 6）離子束法 離了束作用在生物表面后可引起電子濺射，離子束的濺射好象一把手術(shù)刀，對生物體進行微細加工，使生物體表面層層剝離，原來不連通的通道在一定距離內(nèi)連通，后來的離子就可穿行較長的距離，落在預(yù)定的位置上。 2．化學(xué)方法 （ 1） PEG法 是細胞融合劑，它可以使細胞膜之間或 DNA與膜之間形成分子橋，促使相互之間的接觸和粘連；還可以引起膜表面電荷的紊亂，干擾細胞間的識別，從而有利于細胞膜之間的融合和外源 DNA進入原生質(zhì)體。 (2)脂質(zhì)體法 脂質(zhì)體是由人工構(gòu)建的磷脂雙分子層組成的膜結(jié)構(gòu)，可將DNA包在其內(nèi)，并通過脂質(zhì)體與原生質(zhì)體的融合或由于原生質(zhì)體的吞噬過程，把外源 DNA轉(zhuǎn)運到細胞內(nèi)。 早期：絲氨酸磷酸 +膽固醇 第二代：二油酰乙醇胺磷脂 +膽固醇 +軟脂酸 種質(zhì)系統(tǒng)法 (germ line transformation system) （ 1）花粉管通道法（ pollentube pathway） 在顯花植物中利用花粉在柱頭上萌發(fā)進入胚囊所留下的通道，將外源基因滲入到胚囊中的基因直接轉(zhuǎn)移方法。 （ 1） 受體是整株水平，無須離體培養(yǎng)，突破了宿主范圍的限制，可應(yīng)用于任何開花植物。 （ 2）轉(zhuǎn)化可用于重組 DNA， 甚至是總 DNA。 （ 3） 操作技術(shù)條件寬容。 （ 4）轉(zhuǎn)化率高。 優(yōu)點： （ 2） 浸漬法 該法是用外源 DNA溶液直接來浸種、浸苗、浸穗等手段來誘導(dǎo)受體產(chǎn)生變異的基因直接導(dǎo)入法。 優(yōu)點：操作簡單，受體廣泛。 缺點：缺乏理論依據(jù)。 如：萬文舉用玉米 (CYB)DNA浸泡水稻 (XR)干胚，后代出現(xiàn)廣譜分離，在遺傳上，出現(xiàn)有 8％左右的 1． 5m以上的接近供體玉米植株高度的個體，干粒重、生育期都出現(xiàn)了相當(dāng)程度的分離。選出的優(yōu)良株系，形態(tài)上具有典型的C4葉光合結(jié)構(gòu)， 生理上 ， C4光合關(guān)鍵酶 PEP高于原親本，更高于水稻； 生化上 ，后代出現(xiàn)有唯玉米 CYB才有的兩條酶帶 (過氧化物酶同工酶和脂酶同工酶 )； 栽培上 ，表現(xiàn)出抗病、抗高溫、耐低溫，產(chǎn)量相當(dāng)于雜交稻，起名為遺傳工程稻 GRE— 1” 。 （ 3）胚囊和子房注射法 三、重組 DNA導(dǎo)入動物細胞的方法 胚囊、子房注射法是指用顯微注射儀把外源 DNA溶液注入子房或胚囊中，由于子房或胚囊中產(chǎn)生高的壓力及卵細胞的吸收使外源 DNA進入受精的卵細胞中，從而獲得轉(zhuǎn)基因植株。 磷酸鈣轉(zhuǎn)染技術(shù) 其原理是：磷酸鈣可以同被轉(zhuǎn)染的 DNA形成一種 DNA磷酸鈣沉淀物。這種沉淀物黏附到培養(yǎng)的動物單層細胞表面后，會迅速地被細胞捕獲，從而使外源 DNA分子進入動物細胞中。 DEAE葡萄糖轉(zhuǎn)染技術(shù) 電穿孔轉(zhuǎn)染技術(shù) 二乙胺乙基葡萄糖（ diethylaminoethyldextrac， DEAEdextran） 是一種高分子量的多聚陽離子試劑，能促進動物細胞捕獲外源 DNA。 但其作用的機理尚不清楚，可能是其與 DNA結(jié)合從而抑制核酸酶的作用或與細胞結(jié)合而促進 DNA的內(nèi)吞作用。 4．脂質(zhì)體載體法 5．細胞核的顯微注射法 演講完畢，謝謝觀看！
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