【正文】 ： 顯微注射法 電穿孔法 基因槍技術(shù) 化學(xué)法： 磷酸鈣沉淀法 DEAE葡萄糖法 脂質(zhì)體法 融合法 病毒感染法 基因的轉(zhuǎn)移 轉(zhuǎn)染細胞后的篩選： 方法： 標記基因篩選法： 基因缺陷型受體細胞的選擇性 基因共轉(zhuǎn)染技術(shù) 分子生物學(xué)方法 : 原位雜交 Southern雜交 斑點雜交 目的基因或標記基因作為探針。 方法： （目的基因和標記基因的表達） 原位雜交、 Nouthern雜交、 RNA點雜交 （檢測 mRNA的轉(zhuǎn)錄） 免疫組化染色（檢測基因翻譯出的蛋白質(zhì) ) 外源基因表達的檢測： 回輸體內(nèi) 將治療性基因修飾的細胞通過不同方式回輸 入體內(nèi)，以發(fā)揮治療效果。 如： 淋巴細胞經(jīng)靜脈回輸入血 造血細胞經(jīng)自體骨髓移植 皮膚成纖維細胞經(jīng)膠原包裹后埋入皮下組織 肝專一性表達： 磷酸烯醇式丙酮酸羧基酶啟動子 肌肉專一性表達：肌苷激酶的調(diào)控片段 乳腺專一性表達： β酪蛋白，乳清酸蛋白 黑色素專一性表達 : 酪氨酸和酪氨酸相關(guān)蛋白（ TRP) 膠質(zhì)瘤專一性表達：鞘磷酸堿性蛋白基因上游片段 肺癌專一性表達： 人表面活性蛋白 A 與目的基因一起重組入反轉(zhuǎn)錄病毒，用于基因靶向表達。 組織專一性表達的調(diào)節(jié)片段 : 基因治療的應(yīng)用及展望 應(yīng)用治療： ? 遺傳病（學(xué)友病、囊性纖維病、家族性高血壓 ? 惡性腫瘤 ? 心血管疾病 ? 感染性疾?。?AIDS、類風(fēng)濕等） 呈待解決的問題： ? 外源基因表達效率 ? 外源基因表達調(diào)控 ? 遺傳性疾病面臨的免疫問題 ? 反轉(zhuǎn)錄病毒載體隨機插入的外源基因，若插入不當(dāng)，可能破壞另一個基因的表達或激活其它基因（潛在的危險）。 使用巢式引物進行連續(xù)多輪擴增可以提高特異性和靈敏度。第一輪是 15 到 20 個循環(huán)的標準擴增。將一小部分起始擴增產(chǎn)物稀釋 100 到 1000 倍加入到第二輪擴增中進行 15 到 20個循環(huán)?；蛘?，也可以通過凝膠純化將起始擴增產(chǎn)物進行大小選擇。在第二輪擴增中使用一套巢式引物，其可以同第一套引物內(nèi)側(cè)的靶序列結(jié)合。巢式 PCR 的使用降低了擴增多個靶位點的可能性，因為同兩套引物都互補的靶序列很少。而使用同樣的引物對進行總數(shù)相同的循環(huán)（ 30 到 40）會擴增非特異性靶位點。巢式PCR 可以增加有限量靶序列（如稀有 mRNA）的靈敏度，并且提高了困難 PCR（如 539。 RACE）的特異性。 巢式 PCR 靜夜四無鄰，荒居舊業(yè)貧。 , January 23, 2023 雨中黃葉樹，燈下白頭人。 12:06:3212:06:3212:061/23/2023 12:06:32 PM 1以我獨沈久，愧君相見頻。 :06:3212:06Jan2323Jan23 1故人江海別，幾度隔山川。 12:06:3212:06:3212:06Monday, January 23, 2023 1乍見翻疑夢，相悲各問年。 :06:3212:06:32January 23, 2023 1他鄉(xiāng)生白發(fā)，舊國見青山。 2023年 1月 23日星期一 下午 12時 6分 32秒 12:06: 1比不了得就不比，得不到的就不要。 2023年 1月 下午 12時 6分 :06January 23, 2023 1行動出成果，工作出財富。 2023年 1月 23日星期一 12時 6分 32秒 12:06:3223 January 2023 1做前，能夠環(huán)視四周；做時，你只能或者最好沿著以腳為起點的射線向前。 下午 12時 6分 32秒 下午 12時 6分 12:06: 沒有失敗，只有暫時停止成功！。 , January 23, 2023 很多事情努力了未必有結(jié)果，但是不努力卻什么改變也沒有。 12:06:3212:06:3212:061/23/2023 12:06:32 PM 1成功就是日復(fù)一日那一點點小小努力的積累。 :06:3212:06Jan2323Jan23 1世間成事，不求其絕對圓滿，留一份不足，可得無限完美。 12:06:3212:06:3212:06Monday, January 23, 2023 1不知香積寺，數(shù)里入云峰。 :06:3212:06:32January 23, 2023 1意志堅強的人能把世界放在手中像泥塊一樣任意揉捏。 2023年 1月 23日星期一 下午 12時 6分 32秒 12:06: 1楚塞三湘接，荊門九派通。 2023年 1月 下午 12時 6分 :06January 23, 2023 1少年十五二十時，步行奪得胡馬騎。 2023年 1月 23日星期一 12時 6分 32秒 12:06:3223 January 2023 1空山新雨后，天氣晚來秋。 下午 12時 6分 32秒 下午 12時 6分 12:06: 楊柳散和風(fēng)，青山澹吾慮。 , January 23, 2023 閱讀一切好書如同和過去最杰出的人談話。 12:06:3212:06:3212:061/23/2023 12:06:32 PM 1越是沒有本領(lǐng)的就越加自命不凡。 :06:3212:06Jan2323Jan23 1越是無能的人，越喜歡挑剔別人的錯兒。 12:06:3212:06:3212:06Monday, January 23, 2023 1知人者智，自知者明。勝人者有力，自勝者強。 :06:3212:06:32January 23, 2023 1意志堅強的人能把世界放在手中像泥塊一樣任意揉捏。 2023年 1月 23日星期一 下午 12時 6分 32秒 12:06: 1最具挑戰(zhàn)性的挑戰(zhàn)莫過于提升自我。 2023年 1月 下午 12時 6分 :06January 23, 2023 1業(yè)余生活要有意義，不要越軌。 2023年 1月 23日星期一 12時 6分 32秒 12:06:3223 January 2023 1一個人即使已登上頂峰，也仍要自強不息。 下午 12時 6分 32秒 下午 12時 6分 12:06: MOMODA POWERPOINT Lorem ipsum dolor sit, eleifend nulla ac, fringilla purus. Nulla iaculis tempor felis amet, consectetur adipiscing elit. Fusce id urna blanditut cursus. 感謝您的下載觀看 專家告訴