【正文】 識別與 siRNA有同源序列的 mRNA，并在特異的位點將該 mRNA切斷 長雙鏈 RNA被細胞內(nèi)的雙鏈 RNA特異性核酸酶 Dicer切成 21~23個堿基對的短雙鏈 RNA，稱為小干擾性 RNA（ small interfering RNA，siRNA） 目 錄 目 錄RNA干擾機制示意圖 目 錄 研究基因功能的新工具 由于 RNA干擾技術(shù)具有高度的序列專一性和有效的干擾能力，可以使特定基因沉默或功能喪失，因此可以作為功能基因組學(xué)的一種強有力的研究工具。 RNA干擾技術(shù)能夠在哺乳動物中抑制特定基因的表達，建立多種表型；抑制基因表達的時間可以控制在發(fā)育的任何階段。 目 錄 1. 體外化學(xué)合成 。 穩(wěn)定地生成 。 siRNA的產(chǎn)生 目 錄 目 錄 四、基因治療的應(yīng)用研究 目 錄 （ 一 ） 遺傳病的基因治療研究 (一 )遺傳病基因治療必須符合以下要求 DNA水平明確其發(fā)病原因及機制； ， 而且屬隱性遺傳； ； 達并發(fā)揮其生理作用； (如不治療難以存活等 )。 可供選擇并符合上述 4條以上要求的不過只有 30余種遺傳病 。 ? 腺苷脫氨酶 (ADA)和嘌呤核苷磷酸化酶 (PNP)缺乏癥 ? 珠蛋白生成障礙性貧血和血紅蛋白病 ? 血友病和其他血漿蛋白缺乏癥 ? 苯丙酮酸尿癥和其他先天性代謝缺陷病 ? 萊 納 (LeschNyhan)綜合征 ? 家族性高膽固醇血癥 ? 囊性纖維化病 目 錄 目 錄 （二）惡性腫瘤基因治療研究 （ 1）通過基因臵換和基因補充，導(dǎo)入多種抑癌基因以抑制癌癥的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移； 腫瘤發(fā)生是一個極為復(fù)雜的過程，許多基因的突變會導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。 （ 2）抑制癌基因的活性，通過干擾癌基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯，發(fā)揮抑癌作用； （ 3）增強腫瘤細胞的免疫原性，通過對腫瘤組織進行細胞因子修飾，刺激機體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生對腫瘤細胞的溶解和排斥反應(yīng)； （ 4）通過導(dǎo)入 “ 自殺基因 ” 殺傷癌細胞。 目 錄 腫瘤基因治療的常用方法 ? 基因干預(yù)技術(shù)：通過基因干預(yù) ， 抑制腫瘤細胞中過度表達的癌基因 ， 從而降低其惡性表型 。 ? 自殺基因治療：直接殺死腫瘤細胞 。 ? 腫瘤的免疫基因治療：激發(fā)機體腫瘤免疫效應(yīng)或提高免疫效應(yīng)細胞功能。 ? 提高化療效果的輔助基因治療： 藥物增敏基因治療； 耐藥基因治療。 目 錄 自殺基因治療 基本原理： 向腫瘤細胞內(nèi)導(dǎo)入某些真核細胞中不存在的酶基因 （ 自殺基因 ） ， 這些基因表達的特異性酶可以催化對真核細胞無毒或低毒的藥物前體 ， 轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂幸种坪怂岷铣尚?yīng)的抗代謝藥物 ， 進而選擇性地使轉(zhuǎn)染了 “ 自殺基因 ” 的腫瘤細胞 “ 自殺 ” 。 自殺基因治療是目前腫瘤基因治療領(lǐng)域中的研究熱點之一。 目 錄 腫瘤的免疫基因治療 激發(fā)機體腫瘤免疫效應(yīng)或提高免疫效應(yīng)細胞功能為目的的一種腫瘤基因治療方法。 主要包括： 細胞因子（或受體）基因治療； 抗原抗體基因治療。 目 錄 臨床上對腫瘤患者進行化療時 ， 通常面臨兩大難題： （ 1） 患者機體內(nèi)的腫瘤細胞對化療藥物的敏感程度存在差異 ， 特別是某些經(jīng)過多次化療的患者 ， 其體內(nèi)的腫瘤細胞已經(jīng)產(chǎn)生了多藥耐藥性 ， 對多種化療藥物產(chǎn)生交叉耐受 ， 最終導(dǎo)致化療失敗 。 （ 2） 大劑量的化療可能導(dǎo)致患者的正常細胞 ， 特別是骨髓造血細胞的功能受到抑制 。 目 錄 藥物增敏基因治療： 為了使化療藥物能夠最大程度地殺死腫瘤細胞 ， 可以將某些藥物增敏基因?qū)肽[瘤細胞 ， 特別是對化療藥物原本不敏感的腫瘤細胞 ， 使其對抗腫瘤藥物的敏感性大大增加 ， 從而達到增強化療效果的目的 。 提高化療效果的輔助基因治療 目 錄 耐藥基因治療： 腫瘤細胞耐藥性與多種糖蛋白或酶： 多藥耐藥 （ mdr1） 基因編碼的 P糖蛋白 、 多藥耐藥相關(guān)蛋白 （ MRP） 以及肺耐藥相關(guān)蛋白等； 細胞內(nèi)氧化和解毒作用的酶系統(tǒng)： 細胞色素 P450（ cytochrome P450） 、 谷胱甘肽 S轉(zhuǎn)移酶 （ GST） 以及谷胱甘肽過氧化物酶 （ GSHPX）等 。 向腫瘤患者的骨髓細胞導(dǎo)入某種耐藥基因 ， 增強骨髓細胞的抗藥性 ， 以便耐受大劑量的化療藥物 ， 達到徹底殺滅腫瘤細胞的目的 。 目 錄 （三）病毒性疾病的基因治療研究 據(jù)統(tǒng)計 ， 75%的人類傳染病是由病毒引起的 。 病毒感染人體后不僅可能急性發(fā)病 ， 還可以在人體內(nèi)長期潛伏 ， 造成終身傷害 。 病毒還是造成先天畸形的重要因素之一 。 它與某些癌癥 、 自身免疫性疾病和內(nèi)分泌疾病也存在一定的關(guān)聯(lián) 。 臨床上對絕大多數(shù)病毒感染性疾病仍然缺乏有效的治療手段 ， 在眾多開展的抗病毒治療方案中 ， 抗病毒基因治療十分引人注目 。 目 錄 1． 調(diào)節(jié)機體免疫應(yīng)答 （ 1） 將細胞因子 (如干擾素 、 白細胞介素等 )的基因 ，導(dǎo)入機體免疫細胞 ， 激活免疫細胞并促進其增殖分化 ， 增強機體的細胞和體液免疫應(yīng)答 ， 促進機體清除病毒感染的細胞和游離病毒 。 （ 2） 將能夠誘導(dǎo)機體產(chǎn)生保護性免疫應(yīng)答的病毒抗原基因 ， 如乙型肝炎病毒表面抗原基因等 ， 導(dǎo)入機體 ， 表達的抗原不僅可以誘導(dǎo)機體產(chǎn)生保護性抗體 ， 還可以引發(fā)特異性的細胞免疫應(yīng)答 ， 產(chǎn)生對野生型致病病毒攻擊的防御作用 。 目 錄 ：根據(jù)病毒在機體細胞中復(fù)制周期的各個環(huán)節(jié)來設(shè)計的 （ 1） 抑制病毒與宿主細胞結(jié)合：即阻斷病毒表面抗原決定簇與宿主細胞受體間的特異性結(jié)合 。 （ 2） 干擾病毒基因組的轉(zhuǎn)錄起始和調(diào)控 。 （ 3） 抑制病毒基因組的復(fù)制和蛋白質(zhì)合成 。 （ 4） RNA干擾技術(shù) 。 （ 5） 將抗病毒蛋白質(zhì)基因 ， 如 239?！?539。腺苷酸合成酶等基因 ， 導(dǎo)入細胞并持續(xù)表達 ， 可以激活核酸酶 F， 降解病毒 RNA。 主要包括： 目 錄 目 錄 五、基因治療的問題與展望 ? 治療基因調(diào)控元件的選擇 ? 安全高效載體的構(gòu)建和轉(zhuǎn)移技術(shù)的選擇 ? 靶細胞的選擇