基因工程的概念-資料下載頁(yè)
2025-01-07 17:54本頁(yè)面
【正文】 印到 Tc平板上 Apr TcS為重組 子 Apr Tcr為原載體 影印到 Ap平板上 ApS Tcr為重組子 即為非重組 子 篩選重組子的示意圖 重組D N AA m prTcs提取D N A 電泳A m prA m prA m prA m prTcrTcrTcA m prTcsTcs轉(zhuǎn)化 無菌落陽(yáng)性菌落篩選重組子2 ) D N A 重組無D N A 插入有D N A 插入外源D N A1 ) 限制酶切 pUC18和 pUC19 pUC系列質(zhì)粒載體具有三個(gè)顯著特點(diǎn)： （ 1）、分子量更小，僅為 ，容納外源 DNA量增大；具有更高的拷貝數(shù)（不用氯霉素?cái)U(kuò)增，每個(gè)細(xì)胞含 500700個(gè)拷貝）。 （ 2）、含易于檢測(cè)是否有外源 DNA插入的標(biāo)記基因 LacZα ，可利用 ?互補(bǔ)原理進(jìn)行藍(lán)白篩選。 （ 3）、多克隆位點(diǎn)區(qū)（ MCS） 由人工合成的多個(gè)單一酶切位點(diǎn)構(gòu)成。每一種限制性內(nèi)切酶會(huì)產(chǎn)生不同的粘性末端，可選用兩種內(nèi)切酶組合在質(zhì)粒載體和外源 DNA上產(chǎn)生相同的末端，進(jìn)行雙粘端連接，既提高克隆的效率，又可以定向克隆。 其 MCS區(qū)與 M13mp噬菌體載體的相同，可使 pUC上克隆的目的基因直接轉(zhuǎn)移到 M13mp載體，進(jìn)行 DNA測(cè)序和體外突變等研究。 Vectors pUC18和 pUC19載體 E c o S ac Kp n S m a B am X b a S al P s t S p h Hi nRI I I I HI I I I I d I I IpU C 1 8pU C 1 9Hi n S p h P s t S al Xb a B am S m a K p n S ac E c od I I I I I I I HI I I I RIApO r iL a c Z( )r 利用菌落顏色篩選重組子 AprAprApr轉(zhuǎn)化篩選重組子 白色菌落2 ) D N A 重組無D N A 插入有D N A 插入外源D N A重組D N A提取D N A 電泳AprAprApr1)限 制酶切 Cloning Strategies for Identifying Specific Genes 過 程 優(yōu) 點(diǎn) 缺 點(diǎn) 直接分離法（鳥槍法） 操作 簡(jiǎn)便 工作量大，有盲目性，目的基因含有不表達(dá)的內(nèi)含子 人工合成法 反轉(zhuǎn)錄法 專一性強(qiáng)，目的基因中不含內(nèi)含子 操作過程麻煩 。mRNA生存時(shí)間短 ， 技術(shù)要求高 由氨基酸序列合成 據(jù)推測(cè)出的核苷酸序列，通過化學(xué)方法合成 專一性最強(qiáng) ，目的基因不含內(nèi)含子 ，可合成自然界不存在的基因 目前 ， 復(fù)雜的尚不知核苷酸序列的基因不能合成 供體細(xì)胞中 DNA 限制性酶 運(yùn)載體 DNA片段 不同受體細(xì)胞 DNA片段擴(kuò)增 找出 目的基因細(xì)胞 目的基因 mRNA 逆轉(zhuǎn)錄 單鏈 DNA 合成 雙鏈 DNA 獲取目的基因的方法 重組 DNA操作過程示意圖 Cloning Strategies for Identifying Specific Genes 靜夜四無鄰，荒居舊業(yè)貧。 , January 23, 2023 雨中黃葉樹，燈下白頭人。 11:48:4711:48:4711:481/23/2023 11:48:47 AM 1以我獨(dú)沈久，愧君相見頻。 :48:4711:48Jan2323Jan23 1故人江海別，幾度隔山川。 11:48:4711:48:4711:48Monday, January 23, 2023 1乍見翻疑夢(mèng)，相悲各問年。 :48:4711:48:47January 23, 2023 1他鄉(xiāng)生白發(fā)，舊國(guó)見青山。 2023年 1月 23日星期一 上午 11時(shí) 48分 47秒 11:48: 1比不了得就不比，得不到的就不要。 。 2023年 1月 上午 11時(shí) 48分 :48January 23, 2023 1行動(dòng)出成果，工作出財(cái)富。 2023年 1月 23日星期一 11時(shí) 48分 47秒 11:48:4723 January 2023 1做前，能夠環(huán)視四周；做時(shí)，你只能或者最好沿著以腳為起點(diǎn)的射線向前。 上午 11時(shí) 48分 47秒 上午 11時(shí) 48分 11:48: 沒有失敗，只有暫時(shí)停止成功！。 , January 23, 2023 很多事情努力了未必有結(jié)果，但是不努力卻什么改變也沒有。 11:48:4711:48:4711:481/23/2023 11:48:47 AM 1成功就是日復(fù)一日那一點(diǎn)點(diǎn)小小努力的積累。 :48:4711:48Jan2323Jan23 1世間成事，不求其絕對(duì)圓滿，留一份不足，可得無限完美。 11:48:4711:48:4711:48Monday, January 23, 2023 1不知香積寺，數(shù)里入云峰。 :48:4711:48:47January 23, 2023 1意志堅(jiān)強(qiáng)的人能把世界放在手中像泥塊一樣任意揉捏。 2023年 1月 23日星期一 上午 11時(shí) 48分 47秒 11:48: 1楚塞三湘接，荊門九派通。 。 2023年 1月 上午 11時(shí) 48分 :48January 23, 2023 1少年十五二十時(shí)，步行奪得胡馬騎。 2023年 1月 23日星期一 11時(shí) 48分 47秒 11:48:4723 January 2023 1空山新雨后，天氣晚來秋。 上午 11時(shí) 48分 47秒 上午 11時(shí) 48分 11:48: 楊柳散和風(fēng)，青山澹吾慮。 , January 23, 2023 閱讀一切好書如同和過去最杰出的人談話。 11:48:4711:48:4711:481/23/2023 11:48:47 AM 1越是沒有本領(lǐng)的就越加自命不凡。 :48:4711:48Jan2323Jan23 1越是無能的人，越喜歡挑剔別人的錯(cuò)兒。 11:48:4711:48:4711:48Monday, January 23, 2023 1知人者智，自知者明。勝人者有力，自勝者強(qiáng)。 :48:4711:48:47January 23, 2023 1意志堅(jiān)強(qiáng)的人能把世界放在手中像泥塊一樣任意揉捏。 2023年 1月 23日星期一 上午 11時(shí) 48分 47秒 11:48: 1最具挑戰(zhàn)性的挑戰(zhàn)莫過于提升自我。 2023年 1月 上午 11時(shí) 48分 :48January 23, 2023 1業(yè)余生活要有意義，不要越軌。 2023年 1月 23日星期一 11時(shí) 48分 47秒 11:48:4723 January 2023 1一個(gè)人即使已登上頂峰，也仍要自強(qiáng)不息。 上午 11時(shí) 48分 47秒 上午 11時(shí) 48分 11:48: MOMODA POWERPOINT Lorem ipsum dolor sit amet, consectetur adipiscing elit. Fusce id urna blandit, eleifend nulla ac, fringilla purus. Nulla iaculis tempor felis ut cursus. 感 謝 您 的 下 載 觀 看 專家告訴
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