fz第六章分子生物學(xué)基本研究法基因功能研究技術(shù)-資料下載頁(yè)
2024-12-31 23:49本頁(yè)面
【正文】 e, RNA干涉）技術(shù)及其應(yīng)用 RNAi技術(shù)：利用設(shè)計(jì)的 雙鏈小 RNA高效、特異性降解 細(xì)胞內(nèi) 同源 mRNA， 從而 阻斷靶基因表達(dá) ，使細(xì)胞 出現(xiàn)靶基因缺失的表型 。 RNAi的命名來(lái)源于安德魯 〃 法爾 1998年在 《 自然 》雜志上的論文。 RNAi作用機(jī)制示意圖。 初始轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 降解細(xì)胞內(nèi)同源 mRNA 雙鏈小 RNA 核酸酶 RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體 （ RISC）的核蛋白體 RISC介導(dǎo)切割 siRNA mRNA被降解，翻譯受抑制 研究發(fā)現(xiàn)，雙鏈 RNA是 RNAi的觸發(fā)物，引發(fā)與之互補(bǔ)的 單鏈 RNA（ ssRNA, single stranded RNA）的降解。 經(jīng)過(guò) Dicer（一種具有 RNAase III活性的核酸酶）的加工，細(xì)胞中較長(zhǎng)的雙鏈 RNA（ 30個(gè)核苷酸以上）首先被降解形成 21～ 25個(gè)核苷酸的 小分子干擾核糖核酸 （ siRNA， short interfering RNA ），并有效地定位目標(biāo) mRNA。 siRNA是引發(fā)轉(zhuǎn)錄后基因沉默中序列特異性 RNA降解的重要中間媒介。具有特殊的結(jié)構(gòu)特征，即 5’端磷酸基團(tuán)和 3’ 端的羥基，其兩條鏈的 3’ 端各有兩個(gè)堿基突出于末端。 由 siRNA中的反義鏈參與指導(dǎo)合成被稱為 RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體（ RISC）的核蛋白體，再由 RISC介導(dǎo)切割目的 mRNA分子中與 siRNA反義鏈互補(bǔ)的區(qū)域，從而實(shí)現(xiàn)干擾靶基因表達(dá)的功能。 6. 4 基因芯片及數(shù)據(jù)分析 基因芯片（ DNA chip），又稱 DNA微陣列（ DNA microarray）技術(shù)，是能同時(shí)監(jiān)測(cè)大量靶基因表達(dá)的實(shí)驗(yàn)手段，從而迅速準(zhǔn)確地在基因組水平上闡述不同生物組織或細(xì)胞中各種轉(zhuǎn)錄的變化規(guī)律。 基因芯片的測(cè)序原理是雜交測(cè)序方法，即通過(guò)與一組已知序列的核酸探針雜交進(jìn)行核酸序列測(cè)定的方法。 簡(jiǎn)易基因芯片 使用機(jī)械臂把 DNA片段點(diǎn)在玻璃片或尼龍膜上，經(jīng)過(guò)物理吸附作用達(dá)到固定化。也可以 直接在玻璃板表面進(jìn)行化學(xué)合成，從而得到 寡聚核苷酸芯片。 將芯片與待研究的 cDNA 或其它樣品雜交，經(jīng)過(guò)計(jì)算機(jī)掃描和數(shù)據(jù)處理，便可以觀察到大規(guī)模的基因群在不同組 織或同一組織不同發(fā)育時(shí)期或不同生理?xiàng)l件 下的表達(dá)模式。 大規(guī)模基因芯片的應(yīng)用 基因芯片可用于進(jìn)行基因診斷。 先建立正常人特定組織、器官的基因芯片，給出標(biāo)準(zhǔn)雜交信號(hào)圖，用可疑病人的 cDNA做探針與之雜交，確定哪些基因的表達(dá)受抑制或激活。 作業(yè)： 簡(jiǎn)述酵母單雜交系統(tǒng)的主要原理。 簡(jiǎn)述酵母雙雜交系統(tǒng)的主要原理。 基因敲除技術(shù) 謝謝觀看 /歡迎下載 BY FAITH I MEAN A VISION OF GOOD ONE CHERISHES AND THE ENTHUSIASM THAT PUSHES ONE TO SEEK ITS FULFILLMENT REGARDLESS OF OBSTACLES. BY FAITH I BY FAITH
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1