【正文】 毒 、 殘廢 、 甚至死亡的慘劇中 ， 也充分說明了臨床前毒理學評價的重要性 134 ? （ 1） 全身性用藥的毒性試驗 ? ① 急性毒性試驗 ? 急性毒性試驗是對動物單次或短時間內（一般指 24h以內）數次口服藥后出現的毒性反應可進行的 定性及定量 的實驗觀察 135 ? 定性觀察 就是觀察一次給藥以后動物所產生的毒性反應 、 中毒表現 ，其出現和消失的程度如何 ， 涉及哪些組織器官 ， 最主要的靶器官是什么 ， 其損傷的程度 、 性質和可逆的情況如何 ， 中毒死亡過程有哪些特征 ， 可能的死亡原因是什么 ? 136 ? 定量觀察 就是測定其半數致死量 （ LD50 ） ， 就是觀察藥物的 ? 劑量－反應關系 ? 和 ? 劑量－效應關系 ? 137 ? 急性毒性在新藥的安全評價中有著獨到的作用 ， 具有多方面的意義 ? ● 了解新藥急性毒性的強弱 ? 任何物質達到一定的劑量都會表現出毒性 ， 只不過有的毒性強些 ， 有的毒性弱些而已 ， 甚至口服蒸餾水達到一定劑量也會致死 ? 大鼠 PO蒸餾水的 LD50為 469177。 51ml/kg 138 ? 根據 LD50值的大小 ， 將化合物的毒性分成不同的等級 ， 但目前分級的標準仍不統(tǒng)一 ， 下列三種分級標準： ? 按大鼠一次口服半數致死量 （ mg/kg）劃分毒性等級 ? 139 ? 按大鼠一次口服半數致死量 （ mg/kg） 劃分毒性等級毒性分級 ? （ 1） （ 2） （ 3） ? 超毒 （ Super toxic） ≤ 5 － ≤ 1 ? 極毒 （ extremely toxic） 5－ 50 ＜ 25 1 ? 甚毒 （ very toxic） 50－ 500 25－ 200 50 ? 中毒 （ moderately toxic） 500－ 5000 200－ 2022 500 ? ? 微毒 （ slightly toxic） 5000－ 15000 ＞ 2022 5000 ? 基本無毒 （ practically nontoxic） ≥ 150000 － － 140 ? 總的說來 ， 化合物的毒性越大 ， 對人產生危害越大 ， 一般藥物毒性的大小以LD50/ED50治療指數來衡量 ， 值越大 ， 安全范圍就越大 ? 安全范圍則是指基本無害化劑量（ LD5）與基本有效量（ ED95）之間的距離 141 ? 上面所言的治療指數或安全系數是否確保安全 ， 只是就特定的實驗動物而言 ，不能直接外推到人 ， 只能為研究新藥者權衡某一化合物是否有進一步研究的價值提供一個方面的依據 ? 142 ? 絕不能看到在小動物身上的毒性小就放松警惕 ? 有時 ， 一種化合物對動物的毒性很小 ，但對人毒性都很大 143 ?● 通過多種動物之間毒性反應的對比 ， 為預測人的毒性反應提供參數 ?● 為主要藥效學試驗長期毒性試驗及特殊試驗選擇劑量提供依據 ? 144 ? 長期毒性試驗的特殊毒性要很多人力 、 時間和資金 ， 尤其是慢性毒性試驗更是如此 ? 故這類試驗不可能設很多劑量組 ，一般中設 3個 ， 而它們的給藥劑量并不是任意選擇的 ， 否則達不到試驗目的 145 ? 其它 ? 新藥在研制過程中，特別是早期階段，多由實驗室小量合成供應，且由于合成路線尚未定型，可能會有改變，這樣就會造成批次多或雜質不同，除進行理化性質分析外，最好再比較它們的 LD50值，觀察生物效應有無變化 146 ? 急性毒性試驗要用兩種以上給藥途徑（包括推薦臨床研究的給藥途徑），溶于水的藥物應當測量靜脈注射的 LD50 ? 給藥后至少觀察 7天，觀察到動物有毒性反應時應進行肉眼尸檢，記錄所有病變。存活 24h或更長時間的處理動物， 尸檢發(fā)現有病變組織時，應對該組織進行鏡檢 147 ? ② 長期毒性試驗 ? 當一個新藥候選物質經藥效學試驗和急性毒性試驗顯示有進一步研究的價值時，面臨的進一步安全評價便是長期毒性試驗 148 ? 長期毒性試驗的目的主要有兩方面 ： ? 一方面 ， 是觀察在長期重復給藥的情況下 ， 實驗動物會出現哪些毒性反應 ，其劑量－效應關系如何 ， 涉及哪些組織 ，主要器官是什么 ， 損害的性質和程度如何 ， 損害是否可逆等 ? 149 ? 二是觀察在長期重復給藥的情況下，實驗動物能耐受多少劑量，找出完全無毒的安全劑量，為判斷新藥能否進行臨床試用，以及選擇臨床初始劑量提供依據 150 ? 長期毒性試驗的原則 ： ? ● 動物：至少兩種動物 （ 包括嚙齒類和非嚙齒類 ） ? 嚙齒類常用大白鼠 ， 手給為 6W， 動物數按毒性試驗的天數而定 ， ＜ 90天 ，每劑量組為雌雄各 10只；＞ 90天 ， 每劑量組為雌雄各 20只 ? 151 ? 非嚙齒類常用狗 ， 年齡為 4－ 6個月 ，每劑量組為雌雄各 2只 。 對照組和試驗組的動物數要相等 152 ? ● 劑量：常用 3個劑量組 ， 大動物也可用 2個劑量組 ? 在試驗過程中 ， 高劑量組應有部分動物出現毒性反應或死亡 （ 不超過 20%） ? 低劑量組應當略高于藥物對動物的有效劑量或臨床使用劑量而不出現任何指標的異常 153 ? 給藥的途徑：注射用藥的給藥途徑應當與推薦臨床試驗的給藥途徑相同 ? 口服給藥最好采用灌胃法 154 ? ● 試驗周期：一般可參考臨床給藥的持續(xù)時間而定 ， 即動物給藥的持續(xù)時間必須為臨床用藥期的 3－ 4倍 ? 155 ? 如： ? 臨床用藥 1－ 3天 ， 試驗用藥應為 2W。 ? 臨床用藥 7天 ， 試驗用藥應 4W ? 臨床用藥 30天 ， 試驗用藥應 12W ? 臨床用藥＞ 30天 ， 試驗用藥應至少半年 156 ? 試驗周期在半年以上的新藥，可在長期毒性試驗進行 3個月后，未發(fā)生明顯毒性反應的情況下，申請進行第 Ⅰ 期臨床試驗 157 ? ● 觀察指標：一般體征 、 體重 、 外觀 、行為 、 尿常規(guī) 、 血常規(guī) 、 肝功 、 腎功 、及重要器官的肉眼觀察和病理檢查 ， 必要是做骨髓檢查 ， 血液生化 ， 大動物應檢查心率和心電圖變化 ? 158 ? 凡有可能引起眼 、 耳毒性的藥物 ，應增加眼 、 耳毒性檢查指標 ? 有些藥物尚需研究對酸堿平衡 ， 水鹽代謝的影響 159 ? （ 2） 局部用藥毒性試驗 ? 局部用藥 （ 如呼吸道吸入藥以及粘膜 、皮膚用藥等 ） ， 大都可以被吸收 ? 因此 ， 局部用藥應先進行局部吸收試驗 ， 根據藥物從局部吸收的程度 ， 考慮進行全身性用藥的各項試驗 ? 160 ? 根據用藥方法 ， 對用藥部位要進行局部刺激試驗 ， 用肉眼觀察及組織切片的鏡檢 ， 測刺激性的發(fā)展和恢復情況 161 ? ① 皮膚用藥 ， 進行 完整和破損皮膚的毒性試驗及皮膚致敏試驗 ? 可選用家兔 ， 豚鼠和大鼠 。 至少設 3個劑量組 ， 每組動物不少于 3只 ， 以觀察與劑量相關的毒性反應 ? 觀察期一般在停止敷用后不超過 14天 162 ? ② 滴鼻劑和吸入劑：進行呼吸道 （ 包括肺部 ） 的局部刺激試驗和毒性試驗 ? 大鼠或豚鼠 ， 每一濃度組至少 10只動物 （ 雌雄各半 ） ， 至少 3個劑量組 ? 接觸吸入劑時間不少于 4h。觀察期一般為 14天 163 ? ③ 滴眼劑：觀察對眼結合膜和眼球的刺激 ? 家兔是首選動物 ， 至少用 3只家兔 。 ? 液體制劑的劑量一般每次用量 ， 軟骨等制劑每次不超過 100mg ? 觀察期一般在停藥后不超過 21天 164 ? ④ 局部作用于直腸 ， 陰道的制劑 ， 進行對作用部位的刺激及局部毒性試驗 165 ? （ 3） 特殊毒理研究 ? ① 致突變試驗 ? 要求要做以下 3項試驗 ? ● 微生物回復突變試驗 ? ● 哺乳動物培養(yǎng)細胞染色體畸變試驗； ? ● 體內試驗 ? 一般選作微核試驗 166 ? ② 生殖毒性試驗 ? 包括以下三種： ? ● 一般生殖毒性試驗 ? ● 致畸胎試驗 ? ● 圍產期毒性試驗 ? ③ 致癌試驗 167 ? （ 4） 藥物依賴性試驗 ? 作用于 CNS的新藥 ， 如鎮(zhèn)痛藥 、 抑制藥 、 興奮藥的化學結構與人體具有依賴性傾向的化合物有關的新藥 、 須做藥物依賴性試驗 ? 168 ?