分離工程第二章ppt課件-資料下載頁
2025-08-22 22:33本頁面
【正文】 的酶的 特殊 的酶溶法。 ?微生物代謝過程中都能產(chǎn)生一種水解細(xì)胞壁上聚合結(jié)構(gòu)的酶，以便使生長過程進(jìn)行下去，改變微生物環(huán)境，可誘發(fā) 微生物產(chǎn)生過剩自溶酶或激發(fā)產(chǎn)生其它自溶酶，以達(dá)到自溶的目的，影響自溶的因素有溫度、時(shí)間、 pH、緩沖液濃度、細(xì)胞代謝途徑等。微生物細(xì)胞自溶常采用 加熱法 或 干燥法 。 小結(jié) ? 機(jī)械破碎法 優(yōu)點(diǎn)：處理量大、破碎效率高、速度快，適用于工業(yè)規(guī)模的細(xì)胞破碎。 缺點(diǎn)：由于操作條件比較劇烈，往往容易造成細(xì)胞的過度破碎，不利于后續(xù)處理。 化學(xué)破碎法 ?優(yōu)點(diǎn)：選擇性高，胞內(nèi)產(chǎn)物的總釋放率低，料液粘度小，有利于后處理過程。 ?缺點(diǎn)：適用范圍小，通用性差，破碎速度慢，處理時(shí)間長，破碎效率低，不適于大規(guī)模細(xì)胞破碎操作。多用于實(shí)驗(yàn)室。 兩種方法各有利弊，把二者結(jié)合起來使用，則可起到取長補(bǔ)短的作用，能夠得到很好的破碎效果。 如面包酵母用 Zymolyase酶解，再高壓勻漿 4次，破碎率 100%，而單純高壓勻漿破碎率為 32% 。 物理滲透法 （ 1）滲透壓沖擊法 ?破碎原理：細(xì)胞在高滲透壓介質(zhì)中平衡后，再突然將其轉(zhuǎn)至低滲透壓環(huán)境中（如高濃度甘油或蔗糖水或低滲透壓緩沖液中），水大量進(jìn)入細(xì)胞，使細(xì)胞壁或細(xì)胞膜脹破。 ?特點(diǎn)：最溫和的細(xì)胞破碎法；適用于易于破碎的細(xì)胞，如動物細(xì)胞和革蘭氏陰性菌。 （ 2）凍結(jié)－融化法 ?破碎原理：將細(xì)胞放在低溫下突然冷凍和室溫下融化，反復(fù)多次達(dá)到破壁作用 ?由于冷凍，一方面使細(xì)胞膜的疏水鍵結(jié)構(gòu)破壞，另一方面胞內(nèi)水結(jié)晶，使細(xì)胞內(nèi)外溶液濃度變化，引起細(xì)胞突然膨脹而破裂 ?特點(diǎn)：適用于大腸桿菌和細(xì)胞壁較薄的細(xì)胞，但通常破碎率很低（小于 10%） ，還可能引起對凍融敏感的某些蛋白質(zhì)的變性。操作方便，但耗時(shí)、耗能，大規(guī)模應(yīng)用困難。 小結(jié) ? 細(xì)胞間及目標(biāo)產(chǎn)物之間的性質(zhì)差別大，實(shí)際的破碎操作仍需通過實(shí)驗(yàn)來確定合適的破碎方法（理論指導(dǎo)少），最好是實(shí)現(xiàn)目標(biāo)產(chǎn)物的選擇性釋放，在滿足目標(biāo)產(chǎn)物回收率的前提下，盡量降低細(xì)胞的破碎程度，以利于后續(xù)分離純化操作。 ? 除研究破碎細(xì)胞的方法外，還應(yīng)研究生物合成過程中減低細(xì)胞牢固程度的方法。 ? 例：已發(fā)現(xiàn)發(fā)酵過程中改變溫度、培養(yǎng)基或加入抗生素等，使某些細(xì)菌減少合成細(xì)胞壁的某種組分，便于細(xì)胞的破碎。 思考題 ? 33頁 習(xí)題 5 ? 細(xì)胞破碎的主要方法有哪些？其適用范圍、優(yōu)缺點(diǎn)是什么？ ? 區(qū)帶離心法分為 ______ 離心 、 ________ 離心。區(qū)帶離心法可用于______ 、 ______等生物大分子的分離純化，但處理量小，一般僅限于實(shí)驗(yàn)室水平。 本章內(nèi)容到此結(jié)束 同學(xué)們辛苦了
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