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微生物學基本操作技術-資料下載頁

2025-08-15 22:01本頁面
  

【正文】 min內達到 , 隨后逐漸達到 ~ , 在此條件下 , 樣品將保持凍結狀態(tài) , 其中水分則不斷升華 , 干燥才能順利地進行 。 ? 終止干燥時間應根據下列情況判斷 : ? 安瓿管內凍干物呈酥塊狀或松散片狀 ? 真空度接近空載時的最高值 ? 樣品溫度與管外溫度接近 ? 選用 1~ 2支對照管 , 其水份與菌懸液同量 , 當其水分完全蒸發(fā)時視為干燥完結 醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理,北京, 2022 預凍 ? 制備菌懸液、經分裝到進行預凍之間的時間不宜超過 1h; ? 分裝完成后將安瓿管立刻放入- 35~- 40℃ 冰箱預凍 1h,使菌液完全凍結; ? 可采用分段式預凍,先將分裝好的安瓿管置- 20℃ 凍 30分鐘,再放入- 80℃ 冰箱凍 30min; ? 采用離心式凍干裝置時勿需預凍。 醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理,北京, 2022 熔封 ? 將安瓿管的中上部用火焰燒軟 , 拉成細頸; ? 將安瓿管裝到多歧管上 , 用火焰在細頸處熔封; ? 拉管時注意火焰不要離菌體太近 。 醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理,北京, 2022 真空度檢測 用高頻電火花檢查各安瓿管的真空情況,如管內呈現(xiàn)灰藍 光,說明真空度符合要求。 醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理,北京, 2022 保藏 4~ 6℃ 下避光保藏, 一般可保藏 8~ 10年。 醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理,北京, 2022 真空冷凍干燥法 ? 保藏、運輸方便; ? 保藏時間長 (5 ~ 10年 ); ? 對設備要求高 (真空冷凍干燥機、多歧管 ),對人員操作水平要求高; ? 冷凍干燥過程對菌體有損傷,需恢復培養(yǎng)。 醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理,北京, 2022 80℃ 冰箱凍結法 ? 將菌種懸浮于保護劑中,在- 80℃ 冰箱中凍結保存的一種長期菌種保藏方法。 準備冷凍管 準備保護劑 ( 10%15%甘油) 準備菌懸液(細胞、孢子或芽孢懸液) 制備冷凍管(取菌懸液和保護劑至冷凍管) 保藏( 80℃ , 2~ 5年) 醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理,北京, 2022 Microbank 醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理,北京, 2022 80℃ 冰箱凍結法 ? 使用方便; ? 保藏時間較長; ? 對設備要求高 (80℃ 冰箱 ); ? 運輸不方便。 醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理,北京, 2022 液氮超低溫凍結法 ? 指懸浮于保護劑中的菌種經程控降溫后,移置于- 196℃的液氮或- 150℃ 左右的液氮氣相中保存的一種長期菌種保藏方法。 醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理,北京, 2022 操作步驟 ? 冷凍管準備 ? 保護劑制備 ? 保藏培養(yǎng)物準備 ? 預凍 — 將程序降溫系統(tǒng)預冷到 4℃ ,將制備好的冷凍管放入其中,以 1℃ /min降溫速率降至 35℃ ; — 使用程序降溫盒。 ? 保藏 將預凍后的冷凍管轉移至液氮氣相 (150℃ )或液相 (196℃ )。 同“- 80℃ 冰箱凍結法” 醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理,北京, 2022 液氮超低溫凍結法 ? 保藏時間長; ? 保藏效果好,菌種不易退化; ? 對設備要求高 (程控降溫儀、液氮罐 ),對人員操作水平要求高; ? 保藏成本高。 醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理,北京, 2022 不同保藏方法的比較 保藏方法 保藏原理 保藏時間 保藏設備 菌種活性 保藏成本 操作性 定期移植法 低溫 (4 ℃ ) 3 ~ 6 月 冰箱 易退化 高 簡單 液體石蠟法 低溫 (4 ℃ ) 、阻斷氧氣 1 ~ 2 年 冰箱 退化 較高 比較簡單 真空冷凍干燥法 干燥、低溫、無氧、保護劑 8 ~ 10 年 - 80 ℃冰箱、真空冷凍干燥機、封管設備 退化 低 復雜 - 80 ℃冰箱凍結法 低溫 ( - 80 ℃ ) 、保護劑 2 ~ 5 年 - 80 ℃冰箱 退化 較低 復雜 液氮超低溫凍結法 超低溫 ( - 150 ℃或- 1 9 6℃ ) 、保護劑 10 年 以上 程控降溫儀、 液氮運輸罐及液氮罐 不易退化 高 復雜 醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理,北京, 2022 六、質控微生物 醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理,北京, 2022 保藏菌株要求 ?藥品微生物檢驗用的試驗菌應來自認可的 國內或國外菌種收藏機構 的標準菌株,或使用與標準菌株所有相關特性等效的 商業(yè)派生菌株 。 92 2022版中國藥典 《 藥品微生物實驗室規(guī)范指導原則 》 醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理,北京, 2022 國內認可的菌種收藏機構 ? 1979年 7月,全國第一屆菌種保藏管理會議正式成立中國菌種保藏管理委員會( CCCCM),委員會下設 7個全國性菌種保藏管理中心及機構所在地: ? 普通微生物菌種保藏管理中心( CCGMC) , 中國科學院微生物研究所 ? 農業(yè)微生物菌種保藏管理中心( ACCC) ,中國農科院區(qū)劃所 ? 工業(yè)微生物菌種保藏管理中心( CICC),中國食品發(fā)酵工業(yè)研究院 ? 醫(yī)學微生物菌種保藏管理中心( CMCC),中國藥品生物制品鑒定所 ? 抗菌素菌種保藏管理中心( CACC),中國醫(yī)科院醫(yī)用生物技術研究所 ? 獸醫(yī)微生物菌種保藏管理中心( CVCC),農業(yè)部獸醫(yī)藥品監(jiān)察所 ? 林業(yè)微生物菌種保藏管理中心( CFCC),中國林業(yè)科學院 醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理,北京, 2022 國認外可的菌種收藏機構 ? 世界菌種保藏聯(lián)合會 WFCC (World Federation Of Culture Collection)全球注冊的菌種保藏機構 583家 ? ATCC ? NRRL ? DSMZ ? NCTC ? CMI ? CBS ? NBRC(IFO) ? JCM 醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理,北京, 2022 菌株代數 美國藥典( USP)中規(guī)定: “ 將微生物接種至一新鮮培養(yǎng)基上 /內,每萌發(fā)一次即稱為一代, ” 并規(guī)定 “ 菌種的傳代次數(自原始菌種凍干粉起)不得超過 5代 ” 。 United States Pharmacopoeia (USP) provides that: to microbial inoculation to a fresh medium on / in each germination time is referred to as a generation, and provides that strains of the passages (from the original strain from freezedried powder) must not exceed 5 generation. ― 我國的 GMP認證中也如此要求,并且中國藥典 2022年版藥典也已做出 “ 菌種的傳代次數(自原始菌種凍干粉起)不得超過 5代 ” 這個明確的規(guī)定。 China39。s GMP certification is asking, and the Chinese Pharmacopoeia 2022 edition of Pharmacopoeia also had a strain of the passages (from the original strain from freezedried powder) should not exceed 5 on behalf of The clearly defined. Enrichment (G1) Separation of singleolony(G2) Working strain (W3) Working strain (W4) Working strain (W5) 醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理,北京, 2022 標準菌株提供形式 Accuracy Easy of Use (preparation) High Low Complicated Easy Quanti Cult (REMEL) Standard Strains (ATCC/NBRC etc.) EZCFU one step (MicroBioLogics) KWIKSTIK (MicroBioLogics) Culti Loops (REMEL) BioBall (BTF/bioMerieux) 醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理,北京, 2022 ? 質控菌株 Primary strain Qualitative strain Quantitative strain 醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理,北京, 2022 ? 視頻材料 ? 質控菌株的使用 質控菌株
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