種子擴(kuò)大培養(yǎng)-資料下載頁(yè)
2025-08-09 15:31本頁(yè)面
【正文】 決定于生產(chǎn)菌種在發(fā)酵罐中生長(zhǎng)繁殖的速度，采用較大的接種量可以縮短發(fā)酵罐中菌絲繁殖達(dá)到高峰的時(shí)間，使產(chǎn)物的形成提前到來(lái)，并可減少雜菌的生長(zhǎng)機(jī)會(huì)。 發(fā)酵工程教學(xué)課件 ? 但接種量過(guò)大或者過(guò)小，均會(huì)影響發(fā)酵。過(guò)大會(huì)引起溶氧不足，影響產(chǎn)物合成；而且會(huì)過(guò)多移入代謝廢物，也不經(jīng)濟(jì)；過(guò)小會(huì)延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間，降低發(fā)酵罐的生產(chǎn)率。 ? 通常接種量，細(xì)菌 1~5%，酵母菌 5~10%，霉菌 7~15%、有時(shí) 20~25%。 發(fā)酵工程教學(xué)課件 種子質(zhì)量的控制措施 ? 種子質(zhì)量的最終指標(biāo)是考察其在發(fā)酵罐中所表現(xiàn)出來(lái)的 生產(chǎn)能力 。 ? 首先必須保證生產(chǎn)菌種的穩(wěn)定性，其次是提供種子培養(yǎng)的適宜環(huán)境保證無(wú)雜菌侵入，以獲得優(yōu)良種子。 ? 菌種穩(wěn)定性的檢查 ? 無(wú)（雜菌）檢查 發(fā)酵工程教學(xué)課件 五、生產(chǎn)發(fā)酵罐的無(wú)菌接種技術(shù) 生產(chǎn)規(guī)模發(fā)酵罐的接種，包括兩個(gè)方面： ? 從實(shí)驗(yàn)室搖瓶或孢子懸浮液容器中移種入一個(gè)種子罐； ? 從一個(gè)種子罐移入另一個(gè)生產(chǎn)發(fā)酵罐中。 發(fā)酵工程教學(xué)課件 ? 壓差法 接種瓶 壓力差 ? 火焰封口法 在種子罐接種口周?chē)O(shè)有溝槽，溝槽內(nèi)注入少量酒精，點(diǎn)燃酒精使接種口被圍在一圈火焰之中；在火焰圈中即可將菌懸液倒入種子罐中。 發(fā)酵工程教學(xué)課件 發(fā)酵工程教學(xué)課件 發(fā)酵工程教學(xué)課件 發(fā)酵工程教學(xué)課件 發(fā)酵工程教學(xué)課件 發(fā)酵工程教學(xué)課件 從種子罐到發(fā)酵罐的接種，是通過(guò)接種管道，在壓力作用下進(jìn)行的。 發(fā)酵工程教學(xué)課件 從實(shí)驗(yàn)室搖瓶或孢子懸浮液容器接種 發(fā)酵工程教學(xué)課件 從種子罐接種 第二節(jié) 實(shí)例 一、谷氨酸發(fā)酵的菌種擴(kuò)大培養(yǎng) 斜面菌種 → 一級(jí)種子培養(yǎng) → 二級(jí)種子培養(yǎng) → 發(fā)酵罐 斜面菌種的培養(yǎng) ? 菌種的斜面培養(yǎng)必須有利于菌種生長(zhǎng)而不產(chǎn)酸，并要求斜面菌種絕對(duì)純，不得混有任何雜菌和噬菌體，培養(yǎng)條件應(yīng)有利于菌種繁殖，培養(yǎng)基以多含有機(jī)氮而不含或少含糖為原則。 (1) 斜面培養(yǎng)基組成 葡萄糖 ％ 蛋白陳 ％ 牛肉膏 ％ 氯化鈉 ％ 瓊脂 ~％ PH ~ （傳代和保藏斜面不加葡萄糖） (2) 培養(yǎng)條件： 33~34℃ ，培養(yǎng) 18~24h。 一級(jí)種子培養(yǎng) ? 一級(jí)種子培養(yǎng)的目的在于大量繁殖活力強(qiáng)的菌體，培養(yǎng)基組成應(yīng)以少含糖分，多含有機(jī)氮為主，培養(yǎng)條件從有利于長(zhǎng)菌考慮。 (1) 培養(yǎng)基組成 葡萄糖 ％ 尿素 ％ 硫酸鎂 ％ 磷酸氫二鉀 ％ 玉米漿 ~％ (按質(zhì)增減 ) 硫酸亞鐵、硫酸錳 各 2ppm PH 7． 0 (2) 培養(yǎng)條件 用 1000mL三角瓶裝入培養(yǎng)基200mI，滅菌后置于沖程 、頻率 96次／ min的往復(fù)式搖床上振蕩培養(yǎng) 12h，培養(yǎng)溫度 33~34℃ (3) 一級(jí)種子質(zhì)量要求 種齡： 12h pH值： 177。 光密度：凈增 OD值 殘?zhí)牵?％以下 無(wú)菌檢查： () 噬菌體檢查： () 鏡檢：菌體生長(zhǎng)均勻、粗壯，排列整齊 革蘭氏陽(yáng)性反應(yīng)。 二級(jí)種子培養(yǎng) ? 為了獲得發(fā)酵所需要的足夠數(shù)量的菌體，在一級(jí)種子培養(yǎng)的基礎(chǔ)上進(jìn)而擴(kuò)大到種子罐的二級(jí)種子培養(yǎng)。種子罐容積大小取決于發(fā)酵罐大小和種量比例。 (1) 培養(yǎng)基組成 (2)培養(yǎng)條件 接種量： ~％ 培養(yǎng)溫度： 32~34℃ 培養(yǎng)時(shí)間： 7~8h 通風(fēng)量 ? 50L種子罐 1: ? 攪拌轉(zhuǎn)速 340r／ min； ? 250L種子罐 1: ? 攪拌轉(zhuǎn)速 300r／ min ? 500L種子罐 1: ? 攪拌轉(zhuǎn)速 230r／ min (3)二級(jí)種子的質(zhì)量要求 種齡 7~8h pH OD值 凈增 無(wú)菌檢查 () 噬菌體檢查 () 二、啤酒酵母的擴(kuò)大培養(yǎng) ? 一般可采用 三級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng) ，擴(kuò)大倍數(shù)：第 1級(jí)到第 2級(jí)為 810倍，第 2級(jí)到第 3級(jí)為 46倍。 實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)大培養(yǎng) 2，車(chē)間擴(kuò)大培養(yǎng) 發(fā)酵工程教學(xué)課件 The End 種子罐的級(jí)數(shù)越多好還是越少好？ 種子罐的級(jí)數(shù)越少，越有利于簡(jiǎn)化工藝和控制，并可減少由于多次移種而帶來(lái)染菌 的機(jī)會(huì)。但也必須考慮盡量延長(zhǎng)發(fā)酵罐最終代謝產(chǎn)物積累的時(shí)間，縮短由于種子發(fā)芽、 生長(zhǎng)而占用的非生產(chǎn)時(shí)間，以提高發(fā)酵罐的生產(chǎn)率。 問(wèn)題 1 問(wèn)題 2 什么叫接種齡？以什么接種齡接種較好？ 指種子罐中培養(yǎng)的菌絲體開(kāi)始移入下一級(jí)種子罐或發(fā)酵罐時(shí)的培養(yǎng)時(shí)間。 通常接種齡以 菌絲處于生命極為旺盛的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，且培養(yǎng)液中菌體尚未達(dá)到最高峰時(shí)較為合適。對(duì)于 年輕的種子接入發(fā)酵罐后往往會(huì)出現(xiàn)前期生長(zhǎng)緩慢，整個(gè)發(fā)酵周期延長(zhǎng)；過(guò)老的種子會(huì)引 起生產(chǎn)能力下降而菌絲過(guò)早自溶。 問(wèn)題 3 什么叫接種量？以什么接種量接種較好？ 指移入的種子液體積和接種后培養(yǎng)液體積的比例。 如大多數(shù)抗生素發(fā)酵的最適接種 量為 7%15%，由棒狀桿菌進(jìn)行谷氨酸發(fā)酵的接種量只需用 1%。采用較大的接種量可以 縮短發(fā)酵罐中菌絲繁殖到達(dá)高峰的時(shí)間，但是，如果接種量過(guò)多，往往使菌絲生長(zhǎng)過(guò) 快，培養(yǎng)液粘度增加，造成溶解氧供應(yīng)不足而影響產(chǎn)物的合成。
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